黄独冻后黑暗培养愈伤组织再生苗同工酶分析

本研究对黄独冻后黑暗培养胚性愈伤组织及其再生植株的同工酶进行比较分析。结果表明,与黄独冻后光周期培养胚性愈伤组织相比,黄独冻后黑暗培养胚性愈伤组织及其再生植株的CAT、SOD、POD和淀粉酶同工酶酶谱条带数不变,淀粉酶同工酶酶谱亮度和酶谱面积无变化,但CAT、SOD、POD和淀粉酶同工酶酶谱的亮度明显增加,酶谱面积显著增大;与黄独带芽茎段常温继代培养再生植株相比,黄独冻后黑暗培养胚性愈伤组织再生植株的CAT、SOD、POD和淀粉酶同工酶酶谱条带数也不变,淀粉酶同工酶酶谱亮度和酶谱面积也无变化,但CAT、SOD、POD和淀粉酶同工酶酶谱的亮度也明显增加,酶谱面积也显著增大。因此,冻后黑暗培养可以提高黄独胚性愈伤组织的抗氧化机能,且其超低温保存能保证黄独的遗传稳定性。     

土荆芥挥发油化感胁迫对蚕豆根尖SOD和POD同工酶的影响

旨在了解土荆芥挥发油对受体植物抗氧化酶系统的影响,为阐明土荆芥的化感作用机制提供理论依据。通过模拟淋溶和挥发2条途径,分别以不同剂量挥发油处理受体植物蚕豆幼根,电泳后比较根尖超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)同工酶谱的变化。结果表明：在淋溶途径中,细胞内SOD活性明显受该挥发油抑制,处理48 h后POD同工酶谱有POD7特征性强带出现;在挥发途径中,该挥发油对SOD同工酶的活性则表现为促进效应,处理浓度较高或时间较长(24 h,20 μL;48 h,15~20 μL;72 h,10~20 μL)时,POD同工酶谱有POD6特征性强带的表达。此外,SOD同工酶谱带变化主要为酶带的强度改变,POD同工酶谱带变化主要为酶带的数量增减。由此推测土荆芥挥发油可影响蚕豆根尖细胞SOD和POD同工酶基因的表达,其中POD同工酶基因的响应可能比SOD更为敏感。     

镍对小麦幼苗POD活性和同工酶的影响

采用营养液水培,研究了不同浓度(5、10、20、50、100、130 mg/L)镍处理对小麦幼苗植株POD活性和同工酶谱的影响。结果表明,镍处理诱导小麦幼苗叶片POD 1～5、POD 10谱带增强,引起POD 6～9谱带减弱,抑制根系所有POD同工酶谱带活性;小麦幼苗叶片POD活性随着镍处理浓度呈现先上升后下降的变化趋势,根系POD活性随着镍处理浓度的升高持续下降。     

不同温度条件下根结线虫侵染对烟草根系的影响

为探讨不同温度条件下南方根结线虫对不同抗性烟草品种生理生化指标的影响,利用光合培养箱控制烟草生长环境的温度,采用人工接种南方根结线虫的方法,对不同温度条件下各时期烟草品种根系生理生化指标进行测量。研究表明,受到南方根结线虫侵染后,不同抗性烟草品种根系过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性及羟脯氨酸糖蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量均增加,但超氧化物歧化酶（SOD）活性降低,当温度为25℃时,各生理生化指标变化幅度最大,温度为35℃时变化最小。因此,35℃高温对南方根结线虫侵染活动影响最大,SOD、POD、CAT活性及羟脯氨酸糖蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量与烟草抗南方根结线虫有密切的关系。     

影响籼稻成熟胚愈伤组织植株再生频率的几个因素

以优良籼稻品种的成熟胚为材料,探讨不同浓度ABA、愈伤组织继代次数、培养时间以及干燥处理等因素对籼稻成熟胚愈伤组织再生能力的影响。结果表明：（1）在分化培养基上添加3.0～5.0 mg/L ABA对促进胚性愈伤组织的形成及胚状体发生,提高植株再生能力有显著作用。（2）继代3次、培养20～30 d的成熟胚愈伤组织,质量较好,分     

NaCl、光和温度胁迫对龙眼胚性愈伤组织GPX酶活性的影响

以龙眼胚性细胞系LC2为材料,初步研究了在NaCl、光和温度胁迫下龙眼胚性愈伤组织ＧPX酶活性的变化规律。试验结果表明：（1）与对照相比,在盐胁迫下短期内ＧPX酶活性增加,随胁迫时间的延长,低盐胁迫下ＧPX酶活性先上升后下降,而高盐胁迫下ＧPX酶活性则呈下降趋势;（2）白光、绿光处理下,随光强的不断加强,GPX活性均呈先上升后下降趋势,且在同样光强下,白光处理的GPX活性均高于绿光;（3）龙眼EC的GPX活性在低温（高温）处理下,与对照相比,随温度不断降低（升高）,GPX活性呈先升高后降低趋势。以上结果均表明,在一定逆境胁迫下,细胞内GPX可以起到应答外界刺激的作用,且活性呈规律表达,是植物在逆境胁迫下防御ROS伤害的主要标志之一。     

水稻愈伤组织分化培养过程中保护酶活性及其同工酶的变化

以湘早籼33号、01早5202和V20B为供试品种,研究了水稻愈伤组织分化培养过程中保护酶活性及其同工酶酶谱的变化。结果表明：在水稻愈伤组织分化过程中,可溶性蛋白质分别在第6天和第12天出现峰值,而这正是胚性细胞形成和绿苗分化的时期。过氧化物酶活性则在接种后12d出现峰值,分化前期,SOD活性变化趋势与POD活性变化趋势相反,推测这两种酶活性的差异与细胞分化决定有关。此外,POD、SOD同工酶酶谱的变化与水稻愈伤组织分化进程紧密相关     

温度对嫁接番茄幼苗生长及SOD、POD活性的影响

为探明华南地区番茄嫁接后的适宜生长温度,试验研究了3个温度处理下番茄嫁接苗的生长状况及其叶片内保护酶(SOD、POD)活性的变化。试验结果表明：20/17℃处理下地上部和根系生长都受到抑制,根冠比失调;30/27℃时植株出现徒长迹象,且整株生物量下降;25/22℃环境条件下,嫁接苗根冠协调,茎秆健壮,光合能力较强。相比于25/22℃环境,20/17℃的相对低温处理和30/27℃的相对高温处理下,番茄嫁接苗的SPAD读数分别下降20%和13%,叶片的SOD酶活性为237.58 U/(g?FW)和254.39 U/(g?FW),分别比25/22℃处理下的SOD活性低114 U/(g?FW)和97.19 U/(g?FW)。30/27℃处理下的POD活性高于另外两个处理,但差异不显著。综上所述,嫁接后的白天温度应控制在25℃左右,夜间温度为22℃左右。     

新疆阿魏胚萌发研究

研究了新疆阿魏离体胚培养中,不同培养基、光照、温度、碳源、pH值及低温层积、赤霉素、6-苄氨基嘌呤处理等因素对胚萌发及生长的影响。结果表明：诱导胚萌发较理想的培养基为MS（pH值为5.5-6.0）＋1mg／L GA3＋0.1mg／L6-BA＋3％蔗糖;光照对胚的萌发势差异不明显（P=0.334）,但存在显著的温度差异（P=0.000）,其中20、25、30℃较适宜;离体胚的萌发率随种子低温层积时间的延长而有所下降,推测新疆阿魏种子产生休眠效应的部位可能在胚以外的种皮或胚乳。本研究能有效克服新疆阿魏种子抑制物或种皮本身限制,萌发率可达94％。不仅为新疆阿魏人工培育奠定了基础,也为研究种子低温层积打破休眠的机制提供了新的思路。     

阳春砂种子休眠与萌发过程中同工酶活性变化的研究

[目的]研究阳春砂种子休眠与萌发过程中同工酶的活性及酶谱变化规律,为阳春砂种子休眠与萌发过程生理调控机制的分析探讨奠定基础.[方法]以赤霉素浸种前、浸种后、培养10 d、种子露白、胚芽长至1 cm时各阶段的阳春砂种子为材料,测定其种子中过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术研究建立过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及酯酶(EST)同工酶的电泳酶谱.[结果]阳春砂种子在休眠和萌发过程中,POD、SOD、CAT和EST同工酶的活性及酶谱带的数量均发生了一定的变化,其中POD和SOD同工酶活性均呈先减弱后增强的趋势;CAT同工酶在萌发前期变化不明显,后期酶的活性增强,且酶的种类也增加;EST同工酶的酶活性呈先减弱后增强再减弱的变化趋势,且在种子露白时活性达到最强.[结论]阳春砂种子休眠与萌发过程中同工酶谱的变化特点一定程度上可反应出种子休眠与萌发不同阶段的生理特性,这些同工酶基因的差异表达导致了阳春砂种子打破体眠和最终的萌发.     

龙眼体胚发生中期发育同步化的初步调控

本研究以龙眼“红核子”胚性愈伤组织为材料,对龙眼体细胞胚胎发生进行同步化调控,获得了心形胚、鱼雷形胚和高度同步化的子叶形胚。研究表明,通过培养基中2,4-D浓度的微量调整, 基本能够控制控制龙眼体胚发育中期心型、鱼雷形胚的发育同步化。     

甘薯胚性细胞悬浮培养系的建立

地甘薯胚性细胞悬浮增减系的进行了研究。将１２个基因的长约０．５ｍｍ的茎尖培养在含有０．２ｍｇ／Ｌ或２．０ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，形成了胚性愈伤组织。胚性愈伤组织的形成率因基因型和２，４－Ｄ深度不同而很大差异，为０－７５．７％。一方面，将胚性愈伤组织继续增减在含有２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，它们形成了处于各发育时期的体细胞胚。将具有体细胞胚的胚性愈伤组织转移到ＭＳ基本培养基上，体细胞胚发育成     

两种常用激素组合下棉花体细胞胚胎发生过程的组织学观察

 MSB培养基添加两种常用植物激素组合，Indole-3-butyric acid (IBA) + kinetin (KT)和2, 4-dichlorophenoxyacetic acid (2, 4-D) + KT，分别命名为IK和DK处理用来诱导陆地棉体细胞胚胎发生。陆地棉品系YZ1下胚轴切段作为外植体在诱导培养基上培养4周后，继代到分化培养基上促进体细胞胚胎发生。结果表明，两种处理均有体细胞胚胎发生，其中IK处理上外植体嫁接33 d后就可见体细胞胚出现，分化率高达97.6%，大多数外植体表现为体细胞胚较胚性愈伤早出现。DK处理中体细胞胚胎发生慢，体细胞胚都是经过明显的胚性愈伤发育而来，胚性愈伤分化率明显低于IK处理，仅为28.6%。此外，IK处理中的外植体在培养过程中大部分都出现了须根，而DK处理中则没有。两种处理中出现了两种不同的体细胞胚胎发生过程，组织学观察结果表明DK和IK处理中的体细胞胚分别主要起源于初生形成层和皮层。     

脱落酸对棉花体细胞胚胎发生的影响

【目的】研究脱落酸(Abscisic acid, ABA)对棉花体细胞胚胎发生过程中下胚轴脱分化和再分化的影响,优化体细胞胚胎发生体系和初步解析脱落酸调控棉花体细胞胚胎发生分子机制。【方法】以棉花品种中棉所24(CCRI 24)下胚轴为外植体,设置5个ABA浓度0、0.02、0.04、0.06、0.08μmol·L^-1,分别以A0、A1、A2、A3、A4表示,添加至MSB(MS培养基+B5维生素)培养基诱导愈伤和胚性愈伤,研究ABA对棉花下胚轴初始细胞脱分化、愈伤组织诱导和胚性愈伤组织诱导的影响。【结果】ABA促进下胚轴初始细胞脱分化;显著提高愈伤组织的脱分化率和增殖率;0.02μmol·L^-1ABA显著提高胚性愈伤分化率,0.04~0.08μmol·L^-1ABA显著降低胚性愈伤分化率。ABA处理后胚性愈伤和非胚性愈伤的增殖率均显著提高且质地受到影响。0.02~0.08μmol ABA处理下,LBD和LBD在愈伤起始期上调表达。0.02μmol·L^-1ABA处理下,在愈伤增殖早期和中期BBM、LEC1和AGL15上调表达,愈伤增殖后期FUS3、LEA、ABI3基因上调表达。【结论】脱落酸调控的棉花体细胞胚胎发生与相关标记基因的时空性表达密切相关,这些基因表达水平的增加是ABA调控愈伤和胚性愈伤分化的分子基础。     

茶树愈伤组织继代培养与体细胞胚发生

利用添加不同种类,浓度的１／２ＭＳ修改培养基、Ｂ５培养基交叉培养茶树（ＣａｍｅｌｌｉａｓｉｎｅｎｓｉｓＬ．）愈伤组织,有利于延长愈伤组织继代培养时间,并维持胚性愈伤组织高的体细胞胚分化能力,不同品种的胚性愈伤组织体细胞胚分化率存在明显差异,试管苗茎胚性愈伤组织分化率高于大田栽培的成龄茶树叶柄胚性愈伤组织。胚性愈伤组织随着继代培养时间的延长,体细胞胚分化率随之有所下降,胚性愈伤组织在继代培养过程中,     

油菜素内酯在棉花组织培养中的应用研究Ⅰ．油菜素内酯对陆地棉体细胞胚胎发生和根器官发生的影响

本文研究了ＢＲ及其与ＩＡＡ、２，４－Ｄ、ＫＴ和６－ＢＡ等配合使用对陆地棉愈伤组织诱导、继代、分化、体细胞胚胎和根器官发生的影响。ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ能使陆地棉Ｃｏｋｅｒ２０１、３１２两品种分化产生胚性愈伤组织，并有效地保持该种愈伤组织的生活力和胚胎发生能力。ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ促进Ｃｏｋｅｒ２０１、３１２两品种体细胞胚胎发生，ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．０５ｍｇ／Ｌ能诱导所有供试品种产生疏松黄绿色愈伤组织，２，４－Ｄ用量逐步降低或除去后，一些品种便分化产生胚性愈伤组织或体细胞胚状体。另在ＢＲ与ＩＡＡ的某些组合中还观察到根器官的发生。     

大蒜体细胞胚胎发生的组织学研究

以大蒜体细胞胚胎发生不同阶段的培养材料为试材进行组织学研究,结果表明：体胚形成过程中,表层薄壁细胞首先经脱分化恢复分生能力,形成愈伤组织,随后在其表面形成许多瘤状突起—胚性细胞团,胚性细胞团继续发育成球形胚、盾形胚最后发育成熟形成完整植株。从实验结果可以初步认为由大蒜体细胞培养而获得的体细胞胚在结构上也具有类似合子胚的基本结构。     

Genetic analysis of in vitro wheat somatic embryogenesis

Summary A spring wheat genotype which produces somatic embryos in vitro, after short and long-term culture, was tested for its ability to sexually transmit this embryogenic trait. Reciprocal crosses were performed between a embryogenic line and a nonembryogenic variety.Immature embryos were cultured on Murashige and Skoog medium plus 2 mg/l 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, gelled with 5.5 g/l agarose. Somatic embryogenesis was not expressed in the F₁'s. In contrast, from several hundred immature embryos of the F₂ generation of one cross, 10.7% and 1.6% expressed somatic embryogenesis in short and long-term cultures respectively. These percentages of embryogenic: non-embryogenic fits a model of a few complementary genes. The embryogenic capacity of the F₂ genotypes depends on the presence of recessive alleles at these gene loci. The long-term wheat somatic embryogenesis capacity requires a more complex mechanism than the short-term one.Abbreviations CS Chinese Spring - Aq Aquila - E Embryogenic - NE Nonembryogenic - SC Subculture     

Regeneration and transformation of cassava

A prerequisite for the development of a successful transformation system is the availability of efficient regeneration systems. Up to 1995 the only available regeneration system in cassava was an organized type of somatic embryogenesis. Transformation of these organized somatic embryogenic cultures with particle bombardment or Agrobacterium tumefaciens resulted in chimeric transformed embryos. However, the transformed sector was lost after repeated cycles of secondary somatic embryogenesis. After 1995 a less organized system of somatic embryogenesis was developed, so called friable embryogenic callus (FEC) and a system of adventitious shoot regeneration. The FEC regeneration system was combined successfully with particle bombardment. Selection of transgenic plants was based on either luciferase activity, or resistance to the aminoglycoside paromomycin or the herbicide phosphinothricin. Furthermore, protoplasts of FEC are able to regenerate into plants and can be transformed by electroporation. The adventitious shoot regeneration system was combined successfully with Agrobacterium tumefaciens. For this mature somatic embryos were cocultivated with Agrobacterium and cultured for adventitious shoot development. After selection based on the aminoglycoside geneticin or on hygromycin transgenic plants were formed. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

新疆海岛棉XH16体细胞胚发生体系的优化和细胞学观察

体胚发生率低是制约海岛棉体细胞胚发生体系应用的瓶颈之一。为提高体细胞胚胎发生率,本研究以新疆海岛棉品种XH16胚性愈伤为实验材料,从植物凝胶、培养基pH值、氨基酸含量、光照强度4个方面进行海岛棉体细胞胚胎发生诱导条件的优化。结果表明,当植物凝胶的工作浓度为2.0 g/L,培养基pH值为6.5,天门冬酰胺为0.5 g/L,谷氨酰胺为1 g/L,光照强度为3000 lx时,XH16体胚诱导率最高。此外,本研究通过显微镜技术观察体胚发生不同阶段细胞组织的形态结构,初步探讨了海岛棉体胚发生机制。本研究结果为后期借助体胚发生体系进行海岛棉分子育种工作奠定了基础。