F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法

运用DNA重组技术将F18ab和F18ac大肠杆菌黏附素fedF亚单位内的第60～109位氨基酸残基区段(fedF1)和fedF全基因克隆入V型分泌系统MisL的载客结构域上,经DNA测序确证其正确阅读框后,含重组菌质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1经厌氧诱导后,与断奶仔猪小肠上皮细胞进行体外黏附试验。结果表明:FUT1基因M307位点中GG型和AG型仔猪小肠上皮细胞均能黏附上述重组菌,而AA型个体小肠上皮细胞则不能黏附。上述重组菌均能与兔抗F18ab菌毛FedF亚单位单因子高免血清发生玻板凝集反应。而FedF突变体FedF(M)的重组质粒菌则失去上述凝集和黏附特性。证明F18大肠杆菌黏附素fedF基因及其基因片段fedF1在大肠杆菌表面得到了功能性表达,F18ab和F18ac黏附素FedF直接介导F18大肠杆菌与易感仔猪小肠上皮细胞表面大分子受体黏附结合,fedF1为黏附素FedF的受体主要结合域,其His88、His99是FedF黏附素受体结合域的重要氨基酸残基。     

禽致病性大肠杆菌生物被膜形成能力及相关特性分析

[目的]本研究旨在分析能形成生物被膜的临床分离禽致病性大肠杆菌(APEC)菌株的生物学特征.[方法]用刚果红平板法对70株APEC进行筛选,并用结晶紫染色法鉴定菌株生物被膜的形成能力;通过测定不同时间生物被膜生长情况,推断菌株的膜成熟时间;依据玻璃试管法判断菌株是否有卷曲菌毛以及形成生物被膜基质中是否含有胞外纤维素,同...     

牛乳源大肠杆菌生物被膜形成及抗生素的作用

为研究大肠杆菌生物被膜(Biofilms,BF)对耐药性的影响及抗生素对BF形成的作用,以陕西关中地区乳房炎奶牛的乳样中分离的35株大肠杆菌为研究对象,通过刚果红琼脂和结晶紫染色法测定菌体形成BF的能力;通过药物敏感性试验检测BF形成前后菌体耐药性的变化;用结晶紫染色法结合荧光显微镜观察不同质量浓度抗生素对BF的影响。结果显示,35株大肠杆菌中有19株(54.29%)为BF阳性,以形成强、中膜能力为主(84.21%);大肠杆菌形成BF后使头孢噻呋、链霉素、四环素、环丙沙星、庆大霉素、青霉素的最小抑菌质量浓度及最小杀菌质量浓度分别提高4～16倍和8～64倍;抗生素对BF形成的抑制和清除作用随着药物质量浓度增大而加强,其中环丙沙星、头孢噻呋的效果较好。     

超高压对单增李斯特菌生物被膜形成的影响

为探究超高压处理对单增李斯特菌被膜形成能力的影响。以2株4b血清型的单增李斯特菌(Wa X12、ATCC13932)为研究对象进行超高压处理(100~500 MPa,15 min,20℃),通过24孔板结晶紫染色方法对2株菌生物被膜形成能力进行检测,结合荧光显微镜和扫描电镜来观察生物被膜形成情况。Wa X12比ATCC13932形成被膜的能力强。100 MPa压力处理显著增强Wa X12的被膜形成能力(P0.05),200 MPa压力处理使ATCC13932被膜形成量显著增多(P0.05),而大于300 MPa的超高压处理使2株菌的被膜形成量均显著减少(P0.05)。荧光显微镜和扫描电镜观察结果与结晶紫染色结果相符,超高压处理对2株单增李斯特菌被膜形成能力均有影响。小于200 MPa压力处理后单增李斯特菌被膜形成能力增强,并在48 h后被膜形成量达到最大值。     

cpxR基因缺失对鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力的影响

为研究双组分信号转导系统CpxAR对鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力的调控作用,以鼠伤寒沙门菌的标准菌株JS和构建的cpxR缺失株JSΔcpxR、以及前期研究临床分离的6株鼠伤寒沙门菌和构建的6株cpxR基因缺失株为研究对象,首先采用PCR的方法对菌株的cpxR基因进行扩增鉴定,然后采用结晶紫染色法测定各菌株的生物被膜形成...     

不同振动模式对副溶血性弧菌生物被膜形成的影响

为了探究食品工厂环境下更为真实的生物被膜形成过程,有效地预防和控制食品加工过程中副溶血性弧菌生物被膜的污染情况,通过模拟不同的食品加工器械振动模式（水平旋转式振动,翘板式振动,垂直翻转式振动）,研究了不同振动模式下副溶血性弧菌在玻璃和不锈钢表面培养72 h生物被膜的形成过程,分析了不同振动模式对被膜生物量、被膜结构以及被膜胞外基质中胞外多糖和胞外蛋白的影响。结果发现,振动条件下副溶血性弧菌被膜形成量明显减少;3种振动模式下垂直翻转式振动条件下被膜生成量最少;同种振动方式下副溶血性弧菌在不锈钢表面形成量大于玻璃表面;增加水平旋转转速,被膜生成量减少;振动导致被膜总生物量减少,多孔性和均一性增加,生物被膜结构趋于简单,被膜比较分散。振动导致生物被膜胞外多糖和胞外蛋白含量减少。以上结果说明,不同的器械振动对被膜的影响不同,本研究中模拟的三种振动模式中选择垂直翻转式振动模式可以有效地减少与抑制生物被膜的生长;振动会导致细菌生物被膜胞外多糖和蛋白的减少,影响被膜的孔径、均一性等结构特性,被膜结构变得松散,被膜生成量减少,为进一步研究实际生产环境中生物被膜的清除提供理论参考。     

槐定碱对白色念珠菌生物被膜形成的影响

本试验旨在探究槐定碱对白色念珠菌生物被膜形成的影响。通过微量稀释法测定槐定碱对白色念珠菌的最小抑菌浓度（MIC）及对该菌株生物被膜生长过程中不同时期的抑制率,使用光学显微镜和扫描电子显微镜观察槐定碱对白色念珠菌生物被膜形成的影响,通过牛乳平板法、卵黄平板法、SDS法检测槐定碱对白色念珠菌的胞外蛋白酶活性、磷脂酶活性及胞外DNA的影响。结果表明：槐定碱对白色念珠菌的MIC值为8 mg/mL,在光学显微镜下发现槐定碱对白色念珠菌生物被膜的形成有影响,尤其对生物被膜黏附期和生长期有明显的抑制作用,而对成熟期后抑制作用减弱。此外,槐定碱对白色念珠菌胞外DNA和胞外蛋白酶无影响,对其磷脂酶活性有显著抑制作用。     

嗜水气单胞菌生物被膜形成的影响因素

采用改良的微孔板法对不同条件下嗜水气单胞菌生物被膜的形成量进行比较分析。结果显示,嗜水气单胞菌生物被膜形成量最高的时间为12 h;25 ℃条件下,在16、24、48 h分别测定生物被膜形成的D₅₇₀值,皆显著高于37 ℃;葡萄糖浓度在0~2%(m/V)时可以促进生物被膜的形成,当浓度大于3%时有抑制作用;当氯化钙浓度达到10.0 mmoL·L^-1时,生物被膜形成的D₅₇₀值显著上升,而氯化镁对生物被膜形成的D₅₇₀值无显著提高。人纤维蛋白原对嗜水气单胞菌生物被膜的形成有极显著的抑制作用,不同浓度的纤维蛋白原各组间无显著差异。     

金黄色葡萄球菌生物被膜形成与生物被膜相关基因的调查研究

以分离自全国9个省（市、区）的102株奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌为研究对象,应用刚果红法（congo red agar,CRA）和半定量黏附试验（semi quantitative adherence assay,SQAA）检测了生物被膜形成情况,应用PCR法检测了8种生物被膜相关基因分布情况。结果发现,携带7种基因的菌株占有绝对优势,其次是携带6种基因的菌株;最流行的基因组合是SigB－icaR－icaA－icaD－sarA－rbf－SasG,比例高达66．7％;北京、内蒙古、宁夏、甘肃、广西、上海等地生物被膜形成与生物被膜相关基因的分布高度一致。以上研究结果表明,多种生物被膜相关基因组合是奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌流行的主要特点,生物被膜形成和生物被膜相关基因的分布在大多数地区表现高度一致性,rbf和SigB基因可能在金黄色葡萄球菌生物被膜形成和乳房感染过程中发挥着重要作用。本研究结果将为金黄色葡萄球菌性乳房炎的防治提供一定的科学参考。     

二氧化氯对沙门氏菌生物被膜的影响

通过扫描电镜和测定数据表明,在不锈钢表面形成的沙门氏菌生物被膜培养8 h后细菌密度达到3×10⁶ cfu/cm²;沙门氏菌以生物被膜的形式生长比以浮游形式对二氧化氯具有更强的抵抗能力;胰酶大豆肉汤(tryptone soy broth,TSB)等营养物质能明显减弱生物被膜对二氧化氯的敏感性。     

禽源沙门菌生物被膜形成能力与耐药性分析

为探讨禽沙门菌生物被膜形成能力与耐药性的关系,对临床样品进行沙门菌分离,通过多重PCR方法和序列分析测定其血清型,结晶紫染色定量法测定其生物被膜形成能力,最低抑菌浓度(MIC)测定其对药物敏感性。结果表明:共分离到16株禽沙门菌,其中鸡白痢沙门菌7株、鼠伤寒沙门菌6株、肠炎沙门菌2株、纽波特沙门菌1株;药敏试验结果显示16株禽沙门菌对新霉素、阿米卡星、庆大霉素、氧氟沙星、氯霉素、诺氟沙星有较强的敏感性;87.5%的禽沙门菌能形成生物被膜,相对于浮游状态,沙门菌形成生物被膜后MIC值至少提高16倍,最高超过1 024倍。因此,处于生物被膜状态下的沙门菌可显著提高其对抗生素的抵抗力。     

结核分枝杆菌Rv3519表达与其生物被膜形成能力的研究

采用结晶紫染色检测结核分枝杆菌生物被膜的形成能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测生物被膜态的不同结核分枝杆菌Rv3519表达水平,分析Rv3519基因表达与结核分枝杆菌生物被膜形成能力的关系。结果表明:临床分离株产膜能力较H37Rv明显偏低,差异显著(P0.01);临床分离株之间生物被膜产量差异不显著(P0.05);生物被膜态的分离株较标准株Rv3519基因表达量偏低,差异显著(P0.01)。说明结核分枝杆菌生物被膜形成能力与Rv3519基因表达水平相关,Rv3519基因可以作为结核分枝杆菌生物被膜形成能力的潜在分子诊断标志。     

食源性金黄色葡萄球菌的生物被膜形成能力及其基质组成研究

为了控制食品生产环境中金黄色葡萄球菌生物被膜污染,对分离自河北省不同食物样品的33株金黄色葡萄球菌的生物被膜形成能力及其基质组成进行了研究。首先,使用微效价板培养生物被膜,结果表明,在培养24和48h后,分别有13和16个菌株形成了强弱不同的生物被膜,其中,生牛乳来源的菌株产生物被膜能力较强。然后,分别使用蛋白酶K和DNaseⅠ处理不同菌株的生物被膜,结果表明,在所有菌株的生物被膜基质中,都含有蛋白质和DNA组分,但是在大多数菌株的生物被膜基质中,蛋白质是一种重要的组分,而DNA不是一种主要组分。     

猪源粪肠球菌菌毛亚单位蛋白多抗对其生物被膜形成及黏附侵袭作用的影响

以猪源粪肠球菌N9、N41为受试菌株,探究了粪肠球菌N9、N41的生物膜形成能力和对猪肠上皮细胞(IPEC-J2)的黏附侵袭能力,然后与重组亚单位蛋白(Ebp)的多克隆抗血清及纯化IgG作用,分别测定其生物膜的形成量、对猪肠上皮细胞(IPEC-J2)的黏附侵袭能力。结果表明,多抗IgG EbpA1、EbpC1和EbpA3对生物被膜的形成有阻断作用(P0.05),且EbpA1的阻断作用最强,其次是EbpC1。6个蛋白片段的多抗血清对细菌黏附、侵袭细胞均有一定的阻断作用,但血清EbpA1和EbpC1对菌株的黏附侵入阻断能力最强,且对N41菌株黏附、侵袭细胞的阻断能力强于N9菌株;6个纯化多抗IgG的黏附、侵入阻断作用基本同多抗血清的作用。这说明重组亚单位蛋白EbpA1和EbpC1可诱导试验动物机体产生相对应的特异性抗体,且在体外试验中具有明显的免疫保护作用。     

电解水对金黄色葡萄球菌生物被膜的影响

为了阐明不同性质的电解水在控制金黄色葡萄球菌生物被膜中的作用,本研究分别使用酸性、碱性和中性电解水处理生物被膜,并测定处理前后生物被膜生物量、活性、活菌数和构造的变化。结果表明,酸性电解水能够有效杀死生物被膜中的菌体,但不能有效去除生物被膜;其有效氯含量与杀菌作用呈正相关。碱性电解水能够有效去除生物被膜,其pH值直接影响去除能力。中性电解水的作用与酸性电解水相似。不锈钢表面的生物被膜用碱性、酸性和中性电解水处理10min后,活菌数从7.5lgCFU/cm2分别减少至5.3,2.3和3.2lgCFU/cm2。电解水有潜力成为生物被膜杀菌剂和去除剂。     

不同培养条件下sigB对单增李斯特菌生物被膜形成的影响

本研究比较分析了不同温度(4、15、25和37℃)、pH(4、5、6和7)及NaCl浓度(0.5％、2.5％、4.5％和6.5％)对单增李斯特菌野生型菌株(WaX12)及sigB缺失突变型菌株(WaX12-ΔsigB)生物被膜形成能力的影响.结果表明,相比于WaX12菌株,WaX12-ΔsigB菌株生物被膜的形成量显著降低(P＜0.05).变异系数分析显示,不同培养条件对WaX12菌株及WaX12-ΔsigB菌株生物被膜形成能力均有影响,其中温度的影响最大,NaCl浓度次之,pH最弱;且WaX12-ΔsigB菌株生物被膜形成能力更易受到培养条件的影响.其次,分别选取了WaX12菌株与WaXl2-ΔsigB菌株生物被膜形成量差异最显著的培养条件(37℃、pH 6及2.5％NaCI)进行后续分析.结果发现WaX12-ΔsigB菌株胞外多糖及胞外蛋白的相对含量均显著降低(P＜0.05),而其活菌数略有降低.本研究为深入探讨sigB参与单增李斯特菌生物被膜形成的分子机制提供科学依据.     

井冈霉素A 对枯草芽胞杆菌R31 生长和生物被膜形成的影响

测定了井冈霉素A对枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)R31游离生长和生物膜形成的影响,并初步探索了井冈霉素A对枯草芽胞杆菌R31游离生长的影响可能机制,为进一步促进井冈霉素A和枯草芽胞杆菌复配提高防效和扩大防治对象提供依据。分别将不同浓度的井冈霉素A标准品、60%井冈霉素A加入枯草芽胞杆菌R31的培养液中,通过结晶紫染色的方法观察和测定其对R31生物被膜形成的影响;通过测定培养液OD值分别检验了井冈霉素A对R31游离生长的影响及海藻糖对井冈霉素A抑制的缓解作用。结果表明,不同浓度的井冈霉素A标准品和60%井冈霉素A能够促进R31生物被膜的形成,但对摇瓶中游离生长的R31表现出先抑制后促进现象,此现象与R31胞外多糖的产生无关;加入海藻糖后可以减轻抑制。可以利用井冈霉素A促进R31生物被膜形成的特点制备复配型生物农药,扩大防治对象和增加田间防效。     

动物源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力与分子分型关系研究

[目的]调查产生生物被膜的金黄色葡萄球菌流行病学特征,探究生物被膜形成能力与分子型之间的相关性,为治疗动物金黄色葡萄球菌感染提供理论依据.[方法]以广东省兽药研制与安全评价重点实验室保存的98株金黄色葡萄球菌为研究对象,用结晶紫半定量法测定所有菌株生物被膜形成能力,将产膜菌株进行22种常见抗菌药的最小抑菌浓度测定,通过...     

lmo2672基因缺失对LM在不同环境下生物被膜形成的影响

旨在了解AraC家族转录调控因子 lmo2672对单核增生李斯特菌(LM)生物被膜(BF)形成的影响。根据同源重组技术构建LM-△ lmo2672基因缺失株,利用结晶紫染色法比较LM EGD-e和LM-△ lmo2672在不同温度、渗透压、H_2O_2和胆酸盐环境中BF形成量的差异;通过qRT-PCR分析上述不同应激环境中BF相关基因相对转录水平的变化。研究结果证实:与LM EGD-e相比,LM-△ lmo2672在4℃,30℃,5%NaCl,8%NaCl,5mmol/L H_2O_2和0.3%胆酸盐培养环境中BF形成量显著降低;在37℃LM-△ lmo2672 BF形成能力极显著降低;在不同应激环境中,LM-△ lmo2672 BF形成相关基因的表达量均出现不同程度下降。研究结果表明, lmo2672基因在LM BF形成过程中发挥重要作用。     

共存体系中对虾优势腐败菌对副溶血弧菌生物被膜形成的影响

【目的】评估对虾优势腐败菌对副溶血弧菌生物被膜形成的影响,为对虾生产中生物被膜的危害评估和控制提供理论支持。【方法】采用改良微孔板法,分别检测5种腐败菌羽状变形杆菌(Proteus penneri)camtE、camtG、camtJ,希瓦氏菌(Advenellasp)camtF和未命名菌(Unknown)camtB的胞体或其乙酸乙酯提取物,与3株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ATCC33847、ATCC17802和CAMT13011共培养后生物被膜的形成量,并用光学显微镜和扫描电镜观察生物被膜的形成情况。【结果】羽状变形杆菌camtE、camtG、camtJ及希瓦氏菌camtF和未命名菌camtB的乙酸乙酯提取物对副溶血弧菌ATCC33847、ATCC17802、CAMT13011生物被膜形成的促进作用大于上述5种腐败菌胞体的促进作用,前者生物被膜洗脱液OD600相对值达到0.46~0.83,后者仅达到0.26~0.59。副溶血弧菌与5种腐败菌乙酸乙酯提取物共培养48h后其生物被膜形成受到促进,洗脱液OD600相对值为0.47~0.84;其中羽状变形杆菌camtE、camtG和camtJ乙酸乙酯提取物对3株副溶血弧菌的促进作用最明显,其生物被膜洗脱液OD600均值分别为0.74,0.70和0.68。【结论】5株对虾优势腐败菌与副溶血弧菌共培养可使原本产膜能力较弱的副溶血弧菌形成较致密的生物被膜,而这种影响可能与菌群间的群体感应信号分子有关。