玉米细菌性枯萎病菌PCR检测

 根据GenBank中玉米细菌性枯萎病菌及其近似种的16S序列差异,设计了一对玉米细菌性枯萎病菌特异性引物Ps2r/Ps3r,该引物能从供试的7株玉米细菌性枯萎病菌中特异性扩增出一条268 bp的预期条带,供试的32株近似种菌株都没有扩增产物;与国内外文献报道的其它5对特异性引物相比,除引物PSA/PSB外,引物DEP1/DEP2、ES16/ESIG2c、HRP1d/HRP3c和CPSL1/CPSR2c在不同程度上对部分近似种菌株出现了扩增。试验结果表明,引物Ps2r/Ps3r和PSA/PSB能特异性扩增玉米细菌性枯萎病菌,得到预期的扩增产物。对不同系列稀释度的DNA和玉米样品中病菌的检测结果表明,由引物Ps1/Ps4和Ps2r/Ps3r组合的巢式PCR方法的检测灵敏度高于引物ITSA/ITSB和PSA/PSB组合的巢式PCR方法,也高于Bio-PCR检测方法;前者可以检测到玉米种子中300 cfu/sample的目的细菌,该检测方法在进境玉米种子样品玉米细菌性枯萎病菌的检疫中具有比较理想的应有潜力和推广价值。     

玉米细菌性枯萎病菌血清学检验技术

根据农林部的布暑,农林科学院农业生物研究所从一九七五年至一九七八年对玉米细菌性枯萎病菌血清学检验技术进行了比较系统的研究,从中筛选出反向间接血凝检验,对流免疫电泳检验,免疫双扩散检验等几种方法     

玉米细菌性枯萎病菌接种玉米方法的比较

由Erwinia stewartii(Smith)Dye引起的玉米细菌性枯萎病造成玉米作物经济上的损失。这个病害是以在春玉米上(主要在甜玉米上)幼苗的萎蔫型为特征,而后期的枯萎型在马齿玉米上有日益增加其重要性的趋势,特别沿南部玉米带的北缘,在玉米跳(虫甲)(Chaetocnema pulicaria Melsk.)     

玉米细菌性枯萎病菌种的保藏方法

菌种保藏是个很重要的问题,保存不当容易丧失活力或造成污染。菌种保藏既要求菌种在较长的时间内,维持其原有活力;同时又要保持原有的特性。 不同菌种,采用什么方法保存,贮藏在什么环境条件下是不尽相同的。我们曾采用日常应用较广的液体石腊保藏法,把玉米细菌性枯萎病Erwinia Stewartii(E.F.Sm.)Dye保藏在4—5℃的冰箱内,结果发现存活时间不长,只25—45天。     

PCR-DHPLC技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌

本研究成功建立了玉米细菌性枯萎病菌的PCR检测方法.该方法根据细菌ITS序列的特异性,设计了对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变的特异性引物及探针,并对5株玉米细菌性枯萎病菌及18种植物原性细菌的DNA进行了PCR、实时荧光PCR及PCR结合变性高效液相色谱技术(PCR-DHPLC)检测.结果表明,几种方法特异性强,检测灵敏度均为菌液浓度102 cfu/mL,PCR-DHPLC技术具有检测成本较低、高通量、自动化程度高、污染风险小及鉴定结果准确等特点,能够满足快速、准确诊断玉米细菌性枯萎病菌的要求.     

玉米细菌性枯萎病菌免疫双扩散检验技术

一、原理:在半固态的琼脂凝胶板上,抗原与抗体双向扩散,如果比例合适,就会形成肉眼可见的抗原、抗体复合物沉淀线。因此,用已知的细菌性枯萎病菌抗血清就可以捡出未知的玉米细菌性枯萎病菌。二,材料：1,琼脂粉     

玉米细菌性枯萎病菌贮藏期生存规律的研究

贮藏期玉米枯萎病细菌存活情况的研究表明,病菌存活期的长短与温湿度有密切关系,玉米在安全水分范围内,温度越高对病菌生存越不利,低温则有利于病菌较长期存活.贮藏过冬病菌存活期206—248天,过夏病菌只存活104—112天。当积温在2.000—3000日度,玉米含水量在安全水分范围内,贮藏期玉米枯萎病细菌达到无菌安全出库的各项指标为:低温期(8—15℃)200—250天,中低温期(15—20℃)150—200天,中高温期(20一25℃)100—150天,高温期(25℃以上)100天。     

16S nested-PCR技术检测玉米细菌性枯萎病菌

 玉米细菌性枯萎病是玉米上的重要种传病害,病原菌为Pantoea stewartii subsp.stewartii。本研究设计了16S通用引物,扩增该病菌及其近似种的16S rDNA,通过序列测定和分析,针对该病菌设计了特异性引物,采用nested-PCR技术,能够准确地区别该病菌及其近似种,检测的灵敏度在DNA水平上达到10^-3 pg级,检测活菌则达到2 cfu。检测人工污染的玉米种子时,不受种子提取液中其它物质的干扰,灵敏度依然达到2 cfu。     

玉米细菌性枯萎病菌反向间接血凝检验技术

将蛋白质抗体结合或吸附在红血球表面,以测定微量的抗原,而引起的血球凝集反应,称为反向间接血凝。用这种方法检测相应的细菌,只有敏感、快速、特异的优点,通过室内检验,我们认为可以用这种方法来检测玉米细菌性枯萎病菌。其     

玉米细菌性枯萎病菌检测引物/探针的特异性评估

利用6株玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii,PSS)和29株相关菌株对报道的18对检测引物/探针的特异性进行测试.试验结果显示,其中16对引物/探针会出现假阳性或弱假阳性扩增,仅引物cpsAB2313F/cpsR和DC283ga1E/DC283galEc可以特异检测目...     

玉米细菌性枯萎病菌荧光抗体检验技术的研究初报

玉米细菌性枯萎病菌(Erwinia stewartii)为我国对外检疫对象之一。随着国际作物种质交换活动的不断开展,从国外较大量地进口玉米日益成为现实,该病传入我国的机会也在不断增加。为保护农业生产,严防危险性病、虫害的传播,近年来各港口加强了对玉米细菌性枯萎病的检验并已     

水培育苗在玉米细菌性枯萎病菌接种检验上的应用

接种检验是植物细菌病害常用检验方法之一。无论哪一种分离方法所分离到的病菌都应重新回接到寄主上,使其发病予以验证。过去玉米细菌性枯萎病接菌检验应用的玉米苗均为盆钵育苗。由于我国没有这一病害,因此必需在有严格隔离设施的检疫温室内进行,工作结束后还须对大量的土壤及盆     

玉米细菌性枯萎病菌(Erwinia Stewartii)对流免疫电泳检验技术

对流免疫电泳技术是近年来发展起来的新技术,它大大缩短了免疫扩散的时间,并显著地提高了应用的灵敏度,此外,还可同时鉴定多个样品,是达到快速鉴定要求可取的方法之一。对流免疫电泳是电泳和免疫沉淀技术的结合     

玉米细菌性枯萎病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

成功建立了玉米细菌性枯萎病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法.该方法根据细菌16S rDNA序列的特异性,设计出对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变特异性探针,并对10种细菌菌株和5种植原体进行了实时荧光PCR.结果表明,只有玉米细菌性枯萎病菌产生荧光信号,而其它参考菌不产生荧光信号,检测的绝对灵敏度是14.2 fg/μl质粒DNA,比常规的PCR电泳检测高约100倍.整个检测过程只需2h,完全闭管,降低了污染的机会,无须PCR后处理.     

玉米细菌性枯萎菌乳胶凝集试验

前言目前在各港口所检测玉米细菌性枯萎菌(745-1)Erwinia Stewartii 的血清学方法只有琼脂扩散和反问间接血凝试验两种方法。琼脂双扩散试验方法简单,易做,但灵敏度较低。10mg/ml r-球蛋白才能检测出7.2×10~9个/ml745-1菌,反向间接血凝方法简单,灵敏度高,特异性强,但致敏血球     

一种快速鉴定玉米细菌性枯萎病菌的新技术——噬菌体株系鉴别法

利用８株玉米细菌性枯萎病菌噬菌体专化性的差异，结合氯化三苯基四氮唑（２，３，５－ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ）对不同致病力细菌显色反应的不同，组成了一种新的细菌快速鉴定技术，称为噬菌体株系鉴别法，可鉴定玉米细菌性枯萎病菌直至株系。用这个方法鉴定了从美国、日本、南斯拉夫、西德和罗马尼亚进口的玉米种子中截获的许多玉米细菌性枯萎病菌菌株，结果准确快速，并和血清学鉴定及致病性测定的结果相一致     

玉米细菌性枯萎病菌的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法

为了提高口岸和基层实验室检疫和监测玉米细菌性枯萎病菌的准确性和工作效率,利用环介导恒温扩增技术(LAMP),根据内切葡聚糖酶(EGase)基因前导序列,设计2个内引物和2个外引物,对玉米细菌性枯萎病菌进行快速检测。结果表明,使用玉米细菌性枯萎病菌的近缘种或引致相似症状的病原菌菊欧文氏菌玉米致病变种Erwinia chrysanthemi pv.zeae、玉米内州萎蔫病菌Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis、燕麦假单胞菌Pseudomonas avenae、杓兰欧文氏菌Erwinia cypripedii检测其特异性,仅玉米细菌性枯萎病菌有扩增。LAMP检测灵敏度达到2 pg DNA,为普通PCR的100倍;与其它检测方法相比,LAMP方法检测时间短,效率高,不仅降低了设备投入,易于操作,而且具有较高的灵敏度和特异性,适合玉米细菌性枯萎病菌的现场检疫和大规模检测。     

香蕉枯萎和细菌性软腐病菌的多重PCR检测

香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f. sp. cubense和细菌性软腐病菌Dickeya zeae的复合侵染为害给香蕉产业发展带来严重挑战, 有必要建立相关病害的多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction, multiplex PCR)检测技术。本文基于尖孢镰刀菌古巴专化型1号生理小种(F. oxysporum f. sp. cubense race 1, FOC1)基因组contig 438区间(35 631-37 693 bp)(GenBank: AMGP01000438.1)和4号生理小种(F. oxysporum f. sp. cubense race 4, FOC4)基因组contig 195区间(4 028-6 126 bp)(GenBank: AMGQ01000195.1)存在160 bp插入序列差异设计特异扩增引物FOC-F/-R, 同时以香蕉细菌性软腐病菌D. zeae的促旋酶B 亚单位基因(the subunit B of gyrase gene)(GenBank: JQ284039)序列设计特异扩增引物gyrB-F/-R。多重PCR检测结果显示:本技术可在一次PCR扩增反应内同时检测香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种和细菌性软腐病菌; 多重PCR的灵敏度结果表明:检测香蕉枯萎病菌的DNA浓度最低限为0.1 ng/μL, 细菌性软腐病菌的灵敏度为10 3cfu/mL;检测结果稳定可靠。因此, 本研究建立的多重PCR检测方法可有效应用于检测香蕉发病组织中的香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌, 也可用于香蕉种苗和田间土壤带病菌的监测, 为香蕉种植保驾护航。