Proteome Array on Differentially Expressed Proteins of Skin Tissue in Fine-wool Sheep with Different Fiber Diameter

The purpose of this paper was to study the differentially expressed proteins of hair follicles in skin tissue with different fiber diameter of Fine-wool sheep, and discussed the function of proteins related to wool fineness.The differentially expressed protein maps of Fine-wool sheep skin hair follicle were established by two-dimensional gel electrophoresis, and the differentially expressed protein spots were detected and analyzed by the ImageMaster 2D Platinum software, Fine-wool sheep skin hair follicle specific proteins were classified and functional identified by mass spectrum identification technology and database matching method.The results showed that 94 different proteins were successfully identified in Fine-wool sheep with different fiber diameter, including 73 different proteins between superfine wool sheep and Fine-wool sheep at the same age, and 21 different proteins of superfine wool sheep at the different age.According to the functional properties got eight kind of functional proteins, keratin, molecular chaperone protein, cytoskeleton protein, 14-3-3 protein, protease, myosin, serum albumin, other protein, respectively.These results indicated that the internal relation between the differentially expressed protein and the wool fiber diameter was analyzed by the bioinformatics knowledge, which would provide effective genetic resources information directly for high quality breeding of Fine-wool sheep, and had important practical significance for improving the quality of the wool.     

细毛羊皮肤组织中毛囊蛋白质2-DE图谱的建立与初步分析

本研究以不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中的毛囊作为试验材料,利用不同的提取方法、不同pH范围的IPG胶条以及不同的上样量,探索适用于细毛羊皮肤组织的双向电泳体系,建立细毛羊皮肤组织毛囊的2-DE凝胶图谱.凝胶图谱用ImageMaster 2D Platinum软件自动检测蛋白点比较不同纤维直径的细毛羊差异蛋白.结果显示,TCA/丙酮抽提法最适合细毛羊毛囊组织总蛋白质的提取.上样量为100 μL,选择18 cm、pH 4~7的线性IPG胶条,得到质量较好的双向凝胶电泳图谱,有35个蛋白差异点,为后续优质细毛羊的蛋白质组学研究工作奠定基础.     

不同羊毛纤维直径细毛羊MYL6基因克隆及差异表达研究

试验以苏博美利奴羊为研究对象,探讨肌球蛋白轻链6(MYL6)基因在不同羊毛纤维直径的苏博美利奴羊中的表达模式。通过克隆肌球蛋白轻链6(MYL6)基因,结合生物信息学方法对其进行遗传进化和理化性质分析,且预测其二级蛋白结构,又通过RT-PCR相对定量方法以2~(-△△ct)值检测MYL6基因在苏博美利奴羊上的表达规律。结果表明:苏博美利奴羊MYL6基因大小为152036915 bp,MYL6基因的CDS全长序列为696 bp,共编码了105个氨基酸,与绵羊、山羊、牛、猪、老鼠、兔子、鸡、狗和斑马鱼的CDS同源分别为96%、95%、40%、40%、40%、40%、0%、60%、0%。分别在1、220~336、415~864 bp位点上有3个开放式阅读框(ORF)。遗传理化性质研究显示MYL6蛋白含有1个信号肽,在苏氨酸上有5个磷酸化位点、6个N-糖基化位点和3个O-糖基化位点,可能是一种非分泌性蛋白;MYL6蛋白的二级结构以无规则卷曲为主,β-折叠区域占-2.00%;扭曲度占-0.16%;等电荷在-1.60~0.05。研究结果表明,苏博美利奴羊MYL6基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量显著高于细型细毛羊的表达量(P0.01,差异倍数为2.048)。本研究将为开展肌球蛋白轻链基因在细毛羊皮肤转录水平上的研究提供数据理论基础。     

盐碱胁迫条件下羊草差异表达蛋白质组学的研究

为挖掘重要的抗盐碱相关基因,进而阐述羊草(Leymus chinensis)耐盐碱胁迫的分子机制,采用荧光双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)结合串联飞行时间质谱(MALDI TOF/TOF)方法,利用非盐碱条件下及Na₂CO₃处理下生长的羊草建立蛋白质表达谱,并进行差异蛋白质的分离鉴定。结果表明:2D-DIGE获得的74个差异蛋白点,其中蛋白质表达丰度上调的蛋白点44个,丰度下调点为30个,质谱鉴定显示其中33个蛋白质信息已知,参与了能量转换、代谢、光合作用、植物抗性和转录的过程。     

高寒牧区细毛羊不同生长阶段羊毛生长速度与纤维直径观察

在不同管理条件下，成年公羊毛长生长在0．226～0．424mm／d之间，幼年公羊在0．278～0．313mm／d；成幼年母羊毛长生长速度在0．1745～0．3695mm／d之间。每日净毛生长量以成年公羊(9．935～24．196g／d)最高．幼年公羊(6．687～14．919g／d)次之。母羊补饲条件和品质基础好的成年母羊(4．63～15．41g／d)、幼年母羊(6．378～13．433g／d)要比补饲水平及品质基础一般的成年母羊(3．028～7．792g／d)、幼年母羊(4．201～9．509g／d)生长速度快。羊毛生长不同阶段的生长速度和纤维直径存在显著的差异，枯草期放牧及枯草期补饲水平、羊只本身的品质基础是影响羊毛生长速度和纤维细度的直接因素。     

兴安细毛羊羊毛纤维直径与经济性状的相关性分析

兴安盟在实施内蒙古细毛羊三期科技攻关项目时，笔者对兴安细毛羊的羊毛纤维直径与细毛羊的主要经济性状的相关性进行了研究。     

敖汉细毛羊羊毛纤维直径与主要生产性能相关分析

应用生物统计方法,对敖汉种羊场1999年至2004年度敖汉细毛羊育种技术资料进行统计,结果表明敖汉细毛羊品种质量又有显著提高,羊毛纤维直径(简称细度)已由过去的64支纱为主体转向以66支纱为主体.测算获得羊毛细度与毛长的简单相关和二级净相关系数,育成母羊为-0.093 0、-0.091 1(P＜0.05)、成年母羊分别为-0.199 1、-0.188 1(P＜0.01),而毛长与污毛量简单相关和二级净相关育成母羊为0.125 6、0.117 6(P＜0.01),成年母羊为0.182 9、0.174 6(P＜0.01),提示在加强羊毛细度选择的同时,要注意兼顾毛长、产毛量和体重等性能性状,建议深入测算遗传参数和育种值,指引育种工作.     

云南半细毛羊精子冷冻前后转录组表达差异分析

【目的】 本研究旨在对云南半细毛羊精子冷冻前后差异表达的基因与精子冷冻损伤的关系进行研究。【方法】 采用电刺激法采集3只云南半细毛羊精液,各分成2份,一份直接用于提取精子RNA,另一份经过冷冻保存7 d后再进行精子RNA提取。利用获得的精子RNA,采用单细胞转录组测序技术分别检测新鲜精子和冻融精子的mRNA转录组,构建mRNA转录组文库,用Hiseq2500测序仪进行测序,对测序结果做进一步过滤处理,然后对差异表达基因进行GO功能注释和KEGG通路分析。【结果】 6份精液样本共产生623 399 754条原始测序序列,过滤处理后得到514 313 802条（82.50%）高质量的Clean reads。生物信息学分析结果表明,冷冻前后差异表达显著的基因共1 213个。其中,解冻后表达量下调的有1 208个,上调的有5个。通过GO功能注释和KEGG通路富集分析,差异表达基因分别归类于56个GO分类,参与40个信号通路。其中与精子功能密切相关的主要包括精子细胞过程、代谢过程、应激反应、生殖、质膜和氧化还原反应;精子冷冻前后差异表达基因参与的信号通路主要有炎症、细胞因子-细胞因子受体相互作用和细胞凋亡等通路。【结论】 云南半细毛羊精子的冷冻损伤可能与获得的差异表达基因参与的生物过程有关。此外,获得的差异表达基因也可作为分子标记物应用于绵羊冻精品质的评价。     

青海细毛羊血红蛋白和红细胞蛋白质多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对４７９只青海细毛羊的血红蛋白和红细胞蛋白质的多态性进行研究。结果发现：①青海细毛羊的血红蛋白基因座上有ＨＢＡＡ，ＨＢＡＢ，ＨＢＡＣ和ＨＢＢＢ四种基因型。ＨＢ＾Ａ，ＨＢ＾Ｃ等位基因频率分别为０．２６４１，０．７３４９和０．００１０；②血红蛋白基因座的基因型频率和基因频率没有性别间差异；③青海细毛羊ＥＰ－１和ＥＰ－２是单态性蛋白质。     

妊娠后期云南半细毛羊维持蛋白质需要量研究

本试验旨在研究妊娠后期云南半细毛羊的维持蛋白质需要量,为其饲养标准的制定提供理论依据.试验选取50只体重相近[(46.52±4.58)kg]的妊娠后期(妊娠第111～140天)云南半细毛羊,随机分为5个组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组),每组10个重复,每个重复1只羊.饲粮粗蛋白质水平为6.31％、7.77％、10.47％、1...     

应用iTRAQ技术对滩羊裘皮差异表达蛋白的研究

为了研究与滩羊羊毛纤维粗细及弯曲度和特定花穗构成相关的差异蛋白,试验应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）蛋白质组学方法,联合多维液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术对滩羊、内蒙古苏尼特羊、中卫山羊和新吉细毛羊的羊皮肤蛋白进行鉴定和筛选,并应用Proteome Discoverer 1.4软件进行定量分析,结合数据库搜索,鉴定出差异蛋白;最后应用生物信息学技术对差异蛋白进行GO分析和Pathway分析。4种羊皮肤中共鉴定到1 161个蛋白,其中内蒙古苏尼特羊与滩羊比对发现30个差异蛋白,中卫山羊与滩羊比对发现112个差异蛋白,新吉细毛羊与滩羊比对发现107个差异蛋白,对各比对组的皮肤差异蛋白进行分析,发现14-3-3蛋白σ亚型、KRT25、KRT34、KRT85、TCHH、KAP6和KAP11.1可能与滩羊羊毛纤维粗细及弯曲度和特定花穗形状的形成有关。本研究可为滩羊优质二毛裘皮选育研究提供科学依据。     

Study on Differentially Expressed Proteins of Tan Sheep Skin Using iTRAQ Technology

In order to study the differential protein associated with the thickness and curvature of the flax fiber and the specific spike composition of Tan sheep, this study used the isotope labeling relative and absolute quantification (iTRAQ) proteomics methods,and combined with multidimensional liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) identification and screening of skin protein from Tan sheep,Inner Mongolia Sunitou sheep,Zhongwei goat and Xinji Fine-wool sheep,and the Proteome Discoverer 1.4 software was used for quantitative analysis, combined with database search, identification of differential protein. Finally, the differential proteins was analyzed by the GO and Pathway analysis methods. 1 161 proteins were identified from the four kinds of sheep skin,30 different proteins were found between Inner Mongolia Sunitou sheep and Tan sheep,112 differential proteins were found between Zhongwei goats and Tan sheep,107 differential proteins were found between Xinji Fine-wool sheep and Tan sheep,the skin differential proteins were analyzed for each group,it was found that the 14-3-3 protein sigma, KRT25, KRT34, KRT85, TCHH, KAP6 and KAP11.1 might be related to the thickness and curvature of the flax fiber and the formation of specific spike shape of Tan sheep. The result would provide a scientific basis for the breeding of Tan sheep fur quality.     

一周岁内滩羊皮肤差异表达蛋白研究

为研究一周岁内滩羊皮肤中的差异表达蛋白,本试验利用双向凝胶电泳（2-DE）技术分离了滩羊不同生长阶段皮肤蛋白,经考马斯亮蓝染色,用PDQuest 8.0软件检测并分析差异蛋白点,并经MALDITOF/TOF-MS/MS鉴定。对4个生长时期的蛋白图谱进行两两比对,共发现了19个差异蛋白点,质谱成功鉴定出15个蛋白点共13种蛋白,可能与滩羊皮肤生长调控有关的蛋白有14-3-3蛋白σ亚型（14-3-3 protein sigma）、膜联蛋白A2（annexin A2）、角蛋白25（keratin 25）、微管蛋白α链（tubulin alpha chain）。对差异表达蛋白进行分析,发现这些差异表达蛋白可能与滩羊皮肤不同生长阶段的毛囊周期性变化有关。一周岁内滩羊皮肤差异蛋白的发现为滩羊皮肤的年变化规律研究奠定理论基础。     

Study on Skin Differential Expression Proteins of Tan Sheep Within One Year Old

In order to study different expressed proteins of one-year-old Tan sheep skin, two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) was used to separate the Tan sheep skin proteins of different growth stages by Coomassie blue staining, with PDQuest 8.0 software to detect and analyze differences in protein spots,and were identified by MALDITOF/TOF-MS/MS.Protein maps of four growth stages were performed between pairwise, after testing found a total of 19 differentially expressed proteins, mass spectrometry successfully identified 15 protein spots and a total of 13 proteins, of which 14-3-3 σ protein isoforms, annexin A2, keratin 25 and tubulin α chain might be related to growth regulation sheep skin. Those different expressed proteins might be associated with different stages of growth of Tan sheep skin follicles cyclical changes. The different proteins of one-year-old Tan sheep skin provided theoretical basis for annual variation of Tan sheep skin.     

马立克氏病病毒感染鸡羽髓上皮细胞差异蛋白质组学研究

为鉴定鸡羽髓上皮细胞感染马立克氏病病毒(MDV)前后差异表达的蛋白,本研究以MDV强毒GA株人工感染SPF鸡,并通过双向电泳技术进行分析.结果显示:在病毒感染后4 d、7 d、14 d和21 d显著差异表达的蛋白点分别有2个、8个、25个和9个;而通过质谱技术鉴定出29种蛋白质,其中包括能量代谢相关蛋白、增殖和凋亡相关蛋白、细胞骨架蛋白、信号传导蛋白、转录相关蛋白、免疫相关蛋白和其他功能蛋白质.本实验首次对鸡羽髓上皮细胞感染MDV后各时期蛋白表达水平的变化进行研究,鉴定了多种差异表达蛋白质,为进一步揭示MDV与宿主的相互关系、感染性病毒粒子的成熟和致病机制提供了依据.     

消减cDNA文库差异表达基因检测分析方法的研究进展

同已有的差异表达基因分离方法相比,抑制消减杂交以其快速、高效及假阳性率低等优点被广泛应用,并形成了反向Northern斑点杂交和表达谱基因芯片技术2种差减cDNA文库筛选方法,同时,快速发展的生物信息学为文库中大量阳性差异表达片段的序列分析提供了最有力的技术手段,而RT-PCR和实时荧光定量PCR为进一步在mRNA水平验证基因的表达差异性和初步揭示基因功能奠定了技术基础。作者在简要综述上述各方法的原理、特点及应用基础上指出,先测序后筛库的研究策略可以在成本增加较低的前提下大幅度提高差异表达基因的研究效率。     

牛至精油对甘肃高山细毛羊肌肉脂肪酸组成及共轭亚油酸含量的影响

旨在研究饲粮中添加牛至精油对甘肃高山细毛羊肌肉脂肪酸组成的影响。本试验筛选30只健康状况良好、体况相近的60日龄甘肃高山细毛羊,随机分为3组,每组10只,分别为对照组,添加2和4g·d-1牛至精油组(Ⅰ组和Ⅱ组)。饲喂3个月后每组随机屠宰6只,屠宰后取背最长肌和半腱肌测定脂肪酸组成和共轭亚油酸(CLA)含量。结果表明:1)Ⅰ组母羊和Ⅱ组公羊血液高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度显著低于对照组母羊(P<0.05),其他血液生化参数无显著性差异。2)各部位肌肉脂肪酸以油酸(C18:1n9c)和棕榈酸(C16:0)为主;背最长肌中,对照组母羊MUFA、UFA含量显著高于该组公羊(P<0.05),而n-6PUFA含量显著低于该组公羊(P<0.05),Ⅰ组公羊SFA含量显著高于Ⅱ组公羊(P<0.05);Ⅱ组公羊MUFA含量显著高于该组母羊及对照组、Ⅰ组公羊(P<0.05),Ⅱ组母羊PUFA含量显著高于该组公羊及对照组、Ⅰ组母羊(P<0.05),Ⅰ组公羊UFA含量显著低于Ⅱ组公羊(P<0.05);半腱肌中,对照组公羊PUFA、n-6PUFA及n-3PUFA含量显著高于该组母羊(P<0.05),Ⅱ组公羊MUFA含量显著高于对照组及Ⅰ组公羊(P<0.05),Ⅰ组公羊n-6/n-3含量显著高于该组母羊(P<0.05)。3)各部位肌肉c9t11-CLA含量均为母羊高于公羊,且Ⅰ组母羊c9t11-CLA含量显著高于该组公羊(P<0.05);Ⅱ组公羊和母羊背最长肌c9t11-CLA含量分别显著高于对照组公羊和母羊(P<0.05),与Ⅰ组无显著性差异(P>0.05)。综上所述,甘肃高山细毛羊肌肉脂肪酸组成因动物性别、组织部位、添加剂添加量不同而存在差异;日粮中添加牛至精油可提高其肌肉CLA含量,且4g·d^-1添加量效果优于2g·d^-1。