中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究

为探讨牛皮消多糖（CAP）对体外抗新城疫病毒（NDV）能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625 μg/mL,选择安全浓度范围内的（39.06~625 μg/mL）5种浓度的各级多糖,用3种加药方式（先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药）检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示,先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP₅₀、CAP₃₀、CAP_t、CAP₈₀和CAP₇₀均能显著抑制NDV感染CEF的能力,两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%;先加多糖后接病毒组CAP₅₀、CAP₃₀能显著抑制NDV感染CEF的作用（P<0.05）,阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%,其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP₅₀及CAP₃₀的抗NDV活性较强,可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。     

间接免疫荧光技术研究黄芪多糖体外抗新城疫病毒作用

为探究间接免疫荧光技术辅以MTT法研究黄芪多糖(APS)抗新城疫病毒(NDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)作用的可行性。将安全浓度范围内不同浓度APS和NDV以预防和治疗两种方式加入CEF培养体系中,MTT法测定CEF活力,间接免疫荧光技术检测NDV增殖情况。结果显示预防组CEF增殖活力强于治疗组,治疗组NDV的增殖量较预防组大,P<0.05或P<0.01。表明间接免疫荧光技术能直观的反应病毒在细胞上的增殖情况,该技术联合MTT法研究中药抗病毒作用可靠、可行。     

新城疫病毒致鸡胚成纤维细胞病变特性研究

为探讨新城疫Ⅳ系和Ⅰ系毒株对鸡胚成纤维细胞(CEF)致病变特性的影响,采用细胞病变观察(CPE)、血凝试验(HA)和半数细胞培养物感染量(TCID50)测定等方法对新城疫Ⅳ系和Ⅰ系毒株在CEF上的感染特性进行检测。结果表明:经鸡胚复壮的新城疫Ⅰ系毒株不管胰蛋白酶是否参与,均能在CEF上增殖并产生典型的细胞病变,主要以发生细胞融合和形成多核巨细胞为特征;而新城疫Ⅳ系毒株,必须在胰蛋白酶参与的情况下才能产生CPE,主要以胞浆内出现可见大小不等的空泡或颗粒为特征。新城疫Ⅰ系毒株与新城疫Ⅳ系毒株(胰酶参与)相比CEF培养上清液最高HA效价高2个滴度,TCID50也明显增高,证明新城疫Ⅰ系毒株在CEF细胞上的感染力更强。     

芩花口服液抗鸡新城疫病毒体外研究

为研发抗新城疫病毒(NDV)新药,将黄芩、金银花、前胡、甘草等中药制成的芩花口服液稀释至安全范围浓度,在鸡胚成纤维细胞(CEF)培养系统中进行抗NDV感染试验.用MTT法测定NDV感染CEF能力的变化.结果显示:先加芩花口服液后接种NDV、先接种NDV后加芩花口服液、芩花口服液和NDV同时加入,芩花口服液浓度为0.0625、0.125、0.25、0.50、1.0、2.0 mg/mL时均有显著抗NDV感染CEF作用.此试验初步为寻求抗NDV药物提供一条新途径.     

维药阿里红5种活性成分体外抗鸡新城疫病毒作用

为了研究维药阿里红各活性成分抗鸡新城疫病毒(NDV)的活性,本试验分别提取了阿里红多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油并测定其含量。通过MTT法测定阿里红各活性成分对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度。以3种加药方式将药物与NDV加入已制备好的鸡胚成纤维细胞上,即先加药后接种病毒,先接种病毒后加药,病毒和药物混合作用后加入,以检测各组分对NDV的阻断作用、抑制作用以及直接杀灭作用。结果表明,多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油均有抗病毒活性,其中多糖对NDV的直接杀灭作用及抑制作用强于对NDV的阻断作用。多糖、多酚、黄酮、生物碱、挥发油在抑制作用下的病毒抑制率分别为49.12%,39.64%,42.45%,40.00%,18.59%;杀灭作用下的病毒抑制率分别为45.35%,35.71%,38.57%,35.71%,41.07%;阻断作用下的病毒抑制率分别为15.58%,8.57%,32.98%,43.11%,31.42%。综上可知,维药阿里红的活性成分多糖和生物碱的抗NDV活性较好,可以作为进一步研究的材料。     

致病性鹅源新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞的致病变特性

选择4株鹅源新城疫病毒(NDV)接种鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物,研究鹅源NDV对CEF的致病变特性,并与鸡源及鸽源NDV进行比较。结果显示,鹅源NDV接种次代CEF后24h开始有病变产生,表现为少数细胞变圆、皱缩,折光性增强,随后病变缓慢进展,感染细胞形成大量合胞体,到84～144h时,CEF单层彻底破坏;鸡源和鸽源MDV接种CEF后也在24h左右开始有病变产生,最初病变与鹅源毒株导致的病变相似,但病变进展迅速,细胞显著裂解并导致单层的严重破坏,60～84h时细胞单层即彻底破坏。对病毒接种后不同时间段培养物上清血凝(HA)效价的测定结果表明,鹅源NDV接种后84～120h培养物上清HA效价达到高峰,为5～8 log2,鸡源和鸽源NDV接种后60～84h HA效价即可达到高峰,但其最高效价只有4 log2。     

麦冬多糖对鸡新城疫病毒作用的体外研究

为探究麦冬多糖对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的作用,试验采用水提醇沉法提取5种分子量麦冬多糖,采取三氯乙酸法去除蛋白等杂质,用苯酚-硫酸法和考马斯亮兰G-250法分别测定提取物的糖和蛋白含量,用MTT法测定不同分子量麦冬多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,用3种作用方式测...     

维药阿魏根多糖体外抗新城疫病毒的作用

用水提醇沉法得到阿魏根总多糖FSPt和4种分级多糖FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70),FSP_(80)用苯酚-硫酸法及红外光谱对阿魏根多糖进行检测。用MTT法测定各多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,选择安全浓度范围内5种浓度的各多糖与新城疫病毒(NDV)用3种不同的加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)中,用MTT法测定各多糖对NDV感染CEF能力的影响。先加多糖后接病毒组和先接病毒后加多糖组FSP_(30)、FSP_(50)、FSP_(70)和FSPt均能显著抑制NDV感染CEF;多糖与病毒感作后加组FSP_(70)和FSP_(80)有显著抑制NDV感染CEF的作用(P0.05)。结论:新疆阿魏根多糖具有较好的抗NDV作用,其中FSP_(30)和FSP_(50)对病毒的抑制率较高,FSP_(70)在3种加药方式中均表现出显著且稳定的抗NDV作用,综合考虑,FSP_(50)具有很好的研发前景。     

硒化修饰提高大蒜多糖体外抗新城疫病毒活性的研究

旨在研究硒化修饰提高大蒜多糖的体外抗新城疫病毒(NDV)活性并筛选出体外抗NDV活性较好的硒化大蒜多糖.依次通过水提醇沉法、Sevage法去蛋白得到大蒜多糖(GPS),并采用硝酸-亚硒酸钠法对大蒜多糖进行硒化修饰,得到9个硒化大蒜多糖8GPS1～sGPS9.以鸡胚成纤维细胞(CEF)为作用对象,采用MTT法通过先加硒化...     

应用鸡胚接种试验研究中草药的抗新城疫病毒作用

为了筛选出高效的抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)中草药,采用鸡胚接种试验测定了常用清热解毒中草药的体外抗NDV作用.结果表明矮地茶、侧柏叶、贯众、诃子、虎杖、白蔹、夏枯草、黄连对新城疫病毒具有较好的杀灭作用.     

Study on Antiviral Effect of Polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.on NDV in vitro

To research on polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.against Newcastle disease virus (NDV).Total polysaccharide and four different solvent extractions of Lagenaria siceraria (Molina) Standl.were extracted by the methods of hot water extraction and ethanol precipition in this study.The content of polysaccharide was measured by phenol-sulfuric acid method and infrared spectroscopy method.The safe concentration and growth of chick embryo fibroblast (CEF) were assayed by MTT method,in order to facilitated the comparison under the same level,the safe concentration was united as 78.125 μg/mL.Under the safety range of concentration,detected the block-virus activity,anti-virus activity and virus-killing activity of polysaccharides through the ways of pre-adding polysaccharides,post-adding polysaccharides and adding polysaccharides with NDV.The results showed that the direct inactivation and propagation inhibition activity of total polysaccharide and four different solvent extractions were stronger than anti-absorption function.Anti-virus inhibition rate of 70%,80% gradient alcohol precipitation of polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.(LSP₇₀,LSP₈₀) and total polysaccharide (LSP_t)were 40.41%,44.54% and 61.85%,virus-killing inhibition rate were 44.74%,58.76% and 59.38%.LSP₈₀ had the highest virus inhibition rate as 37.14% in the block-virus activity of those five polysaccharides.In summary,70%,80% gradient alcohol precipitation and total polysaccharide in polysaccharides possessed better activity and would be as the materials for further research.     

列当多糖对鸡新城疫病毒在鸡成纤维细胞中增殖的抑制作用

为研究列当多糖抗新城疫病毒(NDV)活性,用水提醇沉法提取列当总多糖及4种分级多糖,并通过苯酚硫酸法及红外光谱对列当多糖进行检测。通过MTT法测定各级多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度。以3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加药,检测列当多糖对新城疫病毒的阻断作用、抑制作用及直接杀灭作用。结果表明,列当总多糖及4种分级多糖均具有抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用及阻断作用强于对NDV的直接杀灭作用。50%、80%梯度醇沉的列当多糖(OSP50、OSP80)及总多糖(OSPt),阻断作用下的病毒抑制率分别为19.50%、33.10%和22.30%,抑制作用下的病毒抑制率分别为19.00%、21.90%和22.60%,杀灭作用下对NDV的抑制率分别为,14.70%、17.50%和13.30%,其余各组多糖阻断作用、抑制作用及杀灭作用下的病毒抑制率均低于上述3组多糖。说明OSP50、OSP80及OSPt的抗NDV活性较好,可以作为进一步研究的材料。     

中草药在鸡胚成纤维细胞(CEF)上对新城疫病毒的作用研究

分离并培养鸡胚成纤维细胞(CEF),并感染新城疫病毒(NDV),通过观察细胞病变,检测在CEF上,复方中草药对NDV的影响。结果表明,中草药对新城疫病毒的中和、预防、治疗作用的最小抗病毒浓度分别是0.061mg/ml、0.244mg/ml、0.976mg/ml。     

甘草多糖和甘草酸对NDV感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

从甘草中提取甘草多糖和甘草酸,进行抗病毒活性比较。用MTT法比较了它们对鸡胚成纤维细胞(CEF)生长及以三种加药方式(先药后毒、先毒后药、药毒同时)抵抗新城疫病毒(NDV)感染细胞的影响,并用平均病毒抑制率比较甘草多糖和甘草酸的抗病毒活性。结果表明,先药后毒,甘草多糖能显著抑制NDV感染细胞(P0.05),平均病毒抑制率为60.6%;先毒后药,甘草多糖和甘草酸都能显著抑制NDV感染细胞(P0.05),其中甘草多糖的平均病毒抑制率为74.28%,甘草酸为62.3%。通过平均病毒抑制率比较,表明甘草多糖的抗病毒活性优于甘草酸。     

复方中药体外抗新城疫病毒活性研究

为了筛选出高效的抗新城疫病毒中药,采用鸡胚接种试验,对8种经典清热解毒复方中药的抗新城疫病毒效果进行了测定。结果表明,荆防败毒散、银翘散、白头翁汤、双黄连口服液在体外对新城疫病毒具有较好的抑制作用。     

柠檬提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及新城疫病毒抑制作用的初步研究

目的:初探柠檬提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑制作用及其机制,温度、酸碱度对提取物作用的影响;观察柠檬提取物对新城疫病毒的抑制作用。方法:利用滤纸片扩散法测定不同提取物浓度的相对抑菌活性,不同温度、酸碱度环境提取物相对抑菌活性。利用Vero细胞为载体观察提取物对新城疫病毒的抑制作用。结果:柠檬提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有显著的抑菌活性,其活性不受酸碱度影响,但受温度影响;提取物对新城疫病毒具有直接抑制作用,对该病的预防及治疗作用则不明显。结论:柠檬提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及新城疫病毒均具抑制作用。     

Characterisation of genotype VII Newcastle disease virus (NDV) isolated from NDV vaccinated chickens,and the efficacy of LaSota and recombinant genotype VII vaccines against challenge with velogenic NDV

A Newcastle disease virus (NDV) isolate designated IBS002 was isolated from a commercial broiler farm in Malaysia. The virus was characterised as a virulent strain based on the multiple basic amino acid motif of the fusion (F) cleavage site ¹¹²RRRKGF¹¹⁷ and length of the C-terminus extension of the hemagglutinin-neuraminidase (HN) gene. Furthermore, IBS002 was classified as a velogenic NDV with mean death time (MDT) of 51.2 h and intracerebral pathogenicity index (ICPI) of 1.76. A genetic distance analysis based on the full-length F and HN genes showed that both velogenic viruses used in this study, genotype VII NDV isolate IBS002 and genotype VIII NDV isolate AF2240-I, had high genetic variations with genotype II LaSota vaccine. In this study, the protection efficacy of the recombinant genotype VII NDV inactivated vaccine was also evaluated when added to an existing commercial vaccination program against challenge with velogenic NDV IBS002 and NDV AF2240-I in commercial broilers. The results indicated that both LaSota and recombinant genotype VII vaccines offered full protection against challenge with AF2240-I. However, the LaSota vaccine only conferred partial protection against IBS002. In addition, significantly reduced viral shedding was observed in the recombinant genotype VII-vaccinated chickens compared to LaSota-vaccinated chickens.     

鸡马立克病毒流行强毒株的致弱研究

针对马立克病毒(MDV)毒力逐渐上升的现状,本研究对国内MDV流行强毒株进行了致弱研究。本实验采用近年来从东北、四川2地区免疫发病鸡场中分离的4株MDV流行强毒株(L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY),经噬斑纯化后,采用鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养至75代～85代,获得了4株高代次细胞毒株(L-SYp85C、L-MSp75C、L-CZp75C、L-ZYp75C)。并分析了L-SYp85C和L-MSp75C毒株的体外、体内生长特性和对SPF鸡的致病力。结果表明,L-SYp85C和L-MSp75C株在CEF适应性显著提高;以10倍感染剂量感染的SPF鸡,在12周内均未发生MD肿瘤,体重平均值与对照组体重平均值差异不显著;检测7d～45d羽髓中病毒载量,均低于106copies/106cell,显著低于亲本毒株。同时,4株传代毒株132bpr基因拷贝数显著增加。上述结果为MDV强毒株的致弱研究以及进一步筛选MDV弱毒疫苗株提供了实验依据。     

中药成分对传染性法氏囊病毒感染细胞的影响

将黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂甙、人参皂甙等 1 0种中药成分与鸡传染性法氏囊病毒 (IBDV)以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、中药和病毒同时加入 ,观察细胞病变的程度 ,以评价它们对IBDV感染细胞的影响。结果表明 ,先加中药后接种病毒和中药与病毒同时加入时 ,多数中药成分处理组在病毒接种后 72h的细胞病变程度明显减轻 ,表明多数中药能抑制病毒感染细胞 ,且有一定的量效和时效关系。