转Cry1C基因结球白菜对鳞翅目昆虫的抗性

用白菜的三个朝鲜栽培品种作试材,经由农杆菌介导,将B.t.杀虫晶体蛋白基因(Cry1C)转入其下胚轴中。以潮霉素为筛选剂,其转化效率为5%￣9%。Southern,Northern杂交分析,PCR检测及对其后代的测试都证明外源基因已被导入。许多顶端紧实型的转基因植株在离体条件下能开花,50多株具潮霉素抗性的植株被成功地移栽到地里。转基因植株及其后代对世界范围内十字花科的主要害虫菱纹背蛾(DBM),及银纹夜蛾、菜青虫均具有抗性,并能控制具Cry1A抗性的菱纹背蛾的危害。本实验所采用的高效再生转化体系,对以后把农业上其它重要基因转入白菜可能具重要的参考价值。     

辽宁果树潜叶蛾种类的识别和防治

辽宁果树潜叶蛾种类的识别和防治任兰田（辽宁省果树科学研究所熊岳１１５２１４）潜叶蛾是一种小型蛾类，其幼虫潜入叶片表皮下蛀食叶肉。叶片受害后，轻则部分叶组织被破坏，重则早期落叶。严重影响树体生长发育。辽宁为害果树的潜叶蛾种类有金纹细蛾，银纹潜叶蛾，旋纹...     

分泌型Cecropin B 抗菌肽基因转化血橙提高其抗溃疡病水平

 为了利用Cecropin B（CB）抗菌肽基因提高柑橘对溃疡病的抗性,人工合成了两个含有信 号肽的Cecropin B 抗菌肽基因PR1aCB 和AATCB。洋葱表皮瞬时表达分析表明,与非分泌型CB 抗菌肽 相比,PR1aCB 和AATCB 抗菌肽在细胞间隙中优势积累。进一步构建了CaMV 35S 调控 PR1aCB 和AATCB 基因的植物表达载体,转化塔罗科血橙（Citrus sinensis Osbeck）上胚轴,获得转基因植株。GUS 组织化 学染色、PCR 和Southern blot 分析表明外源基因已成功整合入柑橘基因组。Real-time PCR 定量分析表明, 抗菌肽基因在转基因植株中成功表达。柑橘叶片离体抗性分析表明,转PR1aCB 和AATCB 基因植株的抗 性显著强于非转基因植株,其抗性水平与高抗品种‘南丰蜜橘’（C. succosa Hort. Ex Tan）和‘四季橘’ （C. madurensis）相当。     

基因枪法遗传转化双孢蘑菇菌褶

以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)2793为试材,采用基因枪法对其菌褶进行遗传转化,相对转化率为2.69％,转化子经PCR检测表明,外源潮霉素B抗性基因已经被转入到菌丝体中.     

大白菜耐旱相关基因BpNFYA5 的克隆及功能初步分析

 以拟南芥（Arabidopsis thaliana）NFYA5 基因（GenBank 登录号：At1g54160）的序列为基准,通过比对获得芸薹属大白菜[Brassica campestris L. ssp. pekinensis（Lour.）Makino]同源EST 序列;采用电子克隆的方法从大白菜中克隆到相关基因全长序列,命名为BpNFYA5。该基因包含3 个内含子,其推导蛋白与拟南芥NFYA5 CCAAT-box 结合域相似性达92.6%。对大白菜进行干旱胁迫,发现BpNFYA5显著上调表达。构建了植物过表达载体pBIn-NFYA5 和RNA 干扰载体pFGC-NFYA5,通过根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导浸花法转化拟南芥。经除草剂、潮霉素筛选及PCR 鉴定获得转基因植株。采用干旱和10% PEG6000 模拟亏水胁迫,对转基因材料的T2 代进行了耐旱性鉴定。结果显示：过表达植株（OL）较野生型植株（WT）和干扰表达植株（Ri）叶绿素含量高;渗透胁迫下OL 植株脯氨酸含量迅速积累,积累量显著高于WT 和Ri 植株;控水干旱2 周OL 株系较WT 及Ri 材料具有更好的干旱耐受性;OL 株系离体叶片的失水速率较小,叶片有效水分利用率较WT 和Ri 高。结果表明所克隆的基因BpNFYA5 在亏水胁迫调控中具有抗旱作用。     

抗虫相关基因KTI 对青花菜的转化及其对小菜蛾抗性的分析

 以青花菜（Brassica oleracea L. ssp. italica）下胚轴为外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方 法将来源于杨树的Kunitz 型丝氨酸胰蛋白酶抑制剂（KTI）基因导入青花菜品系‘09LR-11’中,获得13 株卡那霉素抗性植株。以KTI 特异引物对转基因植株进行PCR 检测,其中8 株为KTI 阳性植株。Southern blot 分析进一步表明,基因KTI 已成功整合到青花菜基因组中。RT-PCR 检测表明,KTI 在转基因青花菜 中已成功表达。通过室内叶片离体试验和田间观察,初步证明转KTI 青花菜对小菜蛾幼虫具有一定抗性     

根癌农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立

以寒富苹果组培苗叶片为外植体,利用植物表达载体上含潮霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBI-A1301)和含卡那霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBIA2301)对影响寒富遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,寒富叶片对潮霉素反应敏感,在附加潮霉素的培养基上寒富叶片褐化较为严重。潮霉素和卡那霉素适宜的筛选质量浓度分别为4 mg.L-1和25 mg.L-1。农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立以MS+TDZ 2.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1培养基为叶片离体再生芽培养基。适宜的转化条件为:菌液浓度D 600nm=0.5、叶片外植体在菌液浸泡8 min、共培养时间为3～4 d、推迟4 d进行筛选培养。抗性基因对转化效率具有明显的影响,EHA105(pCAMBIA2301)的平均抗性芽再生率(0.96%)比EHA105(pCAMBIA1301)的平均抗性芽再生率(0.58%)高出几乎50%,EHA105(pCAMBIA2301)的抗性芽再生率最高达1.87%。GUS组织化学染色和PCR鉴定结果表明本研究获得了寒富苹果转基因植株。     

农杆菌介导的人白细胞介素-4基因转化甘蓝的研究

以结球甘蓝‘92-1012-3-11’自交系种子转白细胞介素-4(IL-4)基因T0代材料为试材,研究了通过农杆菌介导法将人IL-4基因导入甘蓝后代的遗传转化情况.结果表明:共得到抗草铵磷(PPT)抗性再生植株396株,聚合酶链式反应(PCR)阳性植株137株,其中带柄子叶转化率为8.1％,下胚轴分化率为5.8％.通过对转基因阳性株T0代的PPT抗性筛选、PCR、PCRSouthern杂交检测获得IL-4阳性甘蓝植株,表明IL-4基因已转入甘蓝受体中.经ELISA和Western检测,说明IL-4基因已整合到甘蓝基因组,但表达量很低(0.23～2.81 ng/mL),且各植株间的表达量差异极大.     

转话TERF1糖橙耐旱性研究

对转TEBF1糖橙及其对照在干旱胁迫下的研究表明,随胁迫程度的加深,对照叶片出现萎蔫,光合作用能力下降,在重度胁迫（sRwc=10％）下,叶片脱落,生长趋于停止,叶绿素含量下降达50．0％。而转基因植株仅嫩叶轻度萎蔫,叶绿素含量下降25．9％;转基因植株脯氨酸（Pro）累积量增加明显,丙二醛（MDA）含量低于同期对照,保护性酶（CAT、POD、SOD）活力均强于同期对照植株。试验结果表明：转基因株系对干旱的抗性强于对照植株,其中转基因5号株系（TS）对干旱抗性最强。     

转AtDREB1A基因地被菊杂交后代优株耐寒性分析

 以携带逆境诱导转录因子AtDREB1A基因的地被菊‘秋艳’转化株系‘1805’为母本,以观赏性状好、应用广的品种‘亚冬之光’为父本,人工授粉杂交,获得杂交后代158株。PCR和RT-PCR检测结果表明,外源AtDREB1A基因能够在有性繁殖过程中稳定地遗传给后代,且在低温胁迫下能在杂交后代植株中增强表达。与非转基因对照植株相比较,携带AtDREB1A基因的杂交后代植株在低温环境下的脚芽扦插繁殖能力显著增强,在冷冻条件下的存活率明显增高。生理指标分析结果表明,在低温环境下,携带AtDREB1A基因的杂交后代植株的脯氨酸含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性比对照植株明显增高。     

转基因结球大白菜分子生物学检测

采用农杆菌介导法将TuMV-CP基因导入结球大白菜中,建立了高效的大白菜离体再生体系、遗传转化体系,并对转基因植株进行分子生物学检测,证实得到的再生植株为转基因植株,目的基因已在部分植株上表达.同时,对转基因植株的后代进行检测,分析该基因所控制性状的遗传稳定性以及基因表达情况,为大白菜基因工程抗病毒病育种奠定基础.     

RNAi沉默BcMF3基因对菜薹花粉发育的影响

根据从白菜(Brassica campestris ssp. chinensis var. communis) 核雄性不育两用系中分离到编码果胶甲酯酶( PME) 的雄性不育相关基因BcMF3 cDNA序列设计引物, 从白菜花蕾cDNA中扩增出一短一长两个片段, 分别反向和正向连接至双元载体pB I12 l中, 得到了RNAi (RNA interference) 植物表达载体pB I2B3R, 并导入农杆菌LBA4404菌株中; 通过组织培养途径转化菜薹(B. campestris ssp. chinensis var.parachinensis) , 分子检测证明B cM F3片段单拷贝整合到转基因菜薹的基因组中; 50%转基因菜薹植株的花粉畸形, 花粉离体萌发率为32。3% , 出现畸形花粉植株的花药PME活性降低了13。5%。这一结果从转基因植株后代的表型和酶活性上证明, 采用RNAi技术沉默BcMF3基因, 可能通过影响PME活性而引起转基因菜薹植株部分花粉的败育, 从而证明BcMF3基因在普通白菜和菜薹等植物的花粉发育中起着重要作用。     

生长素结合蛋白基因克隆及在柑桔中的表达效应研究

目的：利用转基因技术将外源生长素结合蛋白基因转入柑桔幼胚，获得抗性植株，以提高柑桔对生长素的敏感性。方法：cDNA合成，PCR反应，基因重组，序列分析，遗传转化及抗性植株的诱导与筛选。结果；获得该基因的编码序列，构建出中间表达载体和植物表达载体，筛选出对生长素极敏感的抗性植株。     

力富农防治苹果金纹细蛾试验

金纹细蛾是苹果叶部的一种重要害虫,近几年来在我市发生比较严重。由于连年使用灭幼脲系列农药控制危害,而导致了金纹细蛾对其产生了一定的抗性。为了筛选防治金纹细蛾的良药,特安排本试验。现将结果总结如下。     

柑橘超量表达CsNBS-LRR通过SA信号途径增强对溃疡病抗性

克隆了柑橘CsNBS-LRR基因,分析该基因在柑橘溃疡病菌（Xcc）、水杨酸、茉莉酸甲酯诱导下的表达特征,通过在晚锦橙中超量表达验证其功能。结果表明,CsNBS-LRR的开放阅读框为3 633 bp,编码1 210个氨基酸。其在感病品种晚锦橙中受Xcc诱导下调表达,而在低感品种四季橘中上调表达;在四季橘中受水杨酸诱导明显上调表达,而晚锦橙中上调幅度较小;两品种CsNBS-LRR受茉莉酸甲酯诱导均不明显;超量表达载体转化晚锦橙获得4个阳性植株;抗性评价表明超量表达CsNBS-LRR明显提升了转基因植株对柑橘溃疡病的相对抗性（病情指数为野生型的75% ~ 88%）;转基因植株中水杨酸含量和水杨酸合成途径中关键基因转录水平明显提高;水杨酸信号途径中的PR基因转录水平也升高。综上所述,CsNBS-LRR是柑橘抗溃疡病的1个抗病基因,它可能通过对水杨酸途径的调控一定程度上增强柑橘对溃疡病抗性。     

杀蛾灵、菜蛾霸对小菜蛾的防治效果

小菜蛾是十字花科蔬菜的重要食叶害虫.福建省的抗性监测结果表明,不同地区、不同生境与时间条件下的小菜蛾对不同种类杀虫剂均产生了不同程度的抗性,其防治已成为老大难问题.杀蛾灵、菜蛾霸是福建省农科院植保所C 97059项目组自行研制的2种新型混配药剂,对小菜蛾防治有特效.现报告如下.     

马铃薯Desiree遗传转化体系的优化及转基因植株的获得

为优化马铃薯品种Desiree的遗传转化体系并获得转基因马铃薯,以Desiree叶片和茎段为外植体,分别比较了不同转化条件（预培养时间、菌液浓度、侵染时间及激素配比）对遗传转化效率的影响。结果表明：以茎段为外植体,预培养2 d后以OD600=0.5的菌液侵染10 min,在加有1.0 mg?L-1反式玉米素（ZT-t）的MS20选择培养基上的遗传转化率最高,其愈伤诱导率可达80 %,芽分化率可达70 %。通过该转化体系将抗晚疫病基因R1导入马铃薯,获得了具有卡那霉素抗性的转化植株。经PCR检测和抗病接种鉴定,外源基因已经导入马铃薯基因组中,获得的转基因马铃薯具有很强的抗晚疫病能力,且转基因马铃薯植株和块茎的重要农艺性状没有发生改变。     

几种杀虫剂对金纹细蛾的防治试验

金纹细蛾是苹果树的主要叶片害虫之一。以幼虫潜入叶背表皮下取食叶肉 ,造成下表皮与叶肉分离 ,叶背面形成一皱褶 ,叶正面虫斑呈透明网状虫疤 ,外观呈泡囊状。严重时一个叶片上有虫斑 1 0余个 ,造成叶片枯黄皱缩 ,早期脱落 ,对树势及正常生长发育影响很大。由于连年使用菊酯类农药 ,导致金纹细蛾产生了一定的抗性。为筛选防治金纹细蛾的良药配方 ,特进行了本试验。现将结果总结如下。1　试材与方法试验设在临汾市乔李果园 ,品种为红富士 ,树龄 6年生 ,株行距 2 .5 m× 4.5 m,金纹细蛾发生比较严重。试验共设 8个处理 :1 80 %敌敌畏乳油1 0 0…     

金纹细蛾的发生特点与防治技术

金纹细蛾的发生特点与防治技术赵凤玉（中国农业科学院果树研究所·辽宁兴城·１２５１００）１９９３年金纹细蛾在我国一些苹果产区普遍大发生，叶片受害率一般达３０－８０％，重者高达１００％，每叶有虫斑１０－２０个，使叶片功能严重丧失，造成大量提早落叶，成为苹...     

拟南芥花期基因FT转化切花菊‘神马’

采用RT-PCR方法从拟南芥叶片中克隆FT基因,经过测序分析、酶切之后,连接到植物表达载体Super1300+,构建植物重组载体FT-Super 1300+,运用农杆菌介导法将FT基因导入切花菊'神马'中,鉴定其在转化植株体内的整合和表达.扩增得到的基因片段经测序分析与GenBbank上的FT基因同源性为100%;构建的植物表达载体经过酶切分析证实外源基因已经正确插入;转化后得到了29株抗性植株,PCR和PCR-Southern杂交结果显示,8株抗性植株为阳性,说明外源基因整合到转化植株的基因组中.RT-PCR鉴定结果表明外源基因在转化植株叶片中表达.其中转FT基因的一个株系在组培条件下分化出花芽,表明转基因植株花芽分化不受光周期影响,花期可以提前.