伪狂犬病毒早期蛋白0基因缺失对病毒基因表达的影响

应用实时定量RT-PCR分析早期蛋白0(EP0)基因删除对伪狂犬病病毒(PRV)裂解感染培养的猪肾细胞过程中病毒转录本表达的影响。本研究分析表明,在感染早期,EP0对PRV的基因转录有抑制作用,在感染后期对病毒基因的表达是刺激和抑制作用相交替。研究数据表明,EP0的功能可能是逆转早期病毒基因表达的动力学。研究还观察到,EP0促进IE180基因和PRV转录本转录动力学的相互关系的发展,表明EP0的主要功能可能是改变IE180蛋白对PRV转录的影响。     

伪狂犬病病毒变异株EP0基因缺失株的构建及其致病力评价

EP0(Early Protein 0)基因是伪狂犬病病毒(PRV)早期表达的转录激活因子,可以结合并激活多种病毒基因启动子,调节基因的表达,同时其也是毒力相关基因。为探究EP0基因对PRV变异株毒力的影响,本研究采用CRISPR/Cas9系统敲除PRV变异株HeN1的EP0基因,通过噬斑纯化筛选与基因测序鉴定,成功构建1株EP0基因缺失病毒株PRV-EP0。小鼠毒力试验显示PRV-EP0株虽然体外复制能力降低,但其致病力与野生病毒株HeN1相比并无变化。本研究构建的EP0基因敲除病毒为研究PRV变异株EP0的功能奠定基础。     

伪狂犬病病毒立即早期蛋白基因缺失突变体对SV40启动子的调控作用

用多次PCR方法对伪狂犬病病毒的立即早期蛋白(immediate early protein，IE180)基因进行部分缺失。测序证实缺失序列正确后，构建了IE180基因部分缺失突变体的真核细胞表达裁体peP1P2、pcP1P3P2、pcP6P2。将这些真核表达裁体与带有SV40早期基因启动子和报告基因CAT(氯霉素乙酰转移酶)的pCAT3-control载体质粒混合后，用质酯体介导的方法，共转染Hela细胞。通过CAT的ELISA方法检测瞬时表达结果表明：突变体P1P2和P1P3P2对SV40启动子具有较强的激活能力，而P6P2则对SV40启动子有较明显的抑制作用。     

伪狂犬病病毒立即早期180基因的克隆及序列分析简

为了研究伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）立即早期180基因（immediate early 180,IE180）及其功能,试验采用设计的特异性引物通过PCR法对IE180基因进行扩增,并成功构建了IE180克隆载体,经序列测定后,用DNAStar软件对该序列和已发表的7个PRV参考株的IE180基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比对分析。结果表明,HB-98株IE180基因编码区大小为4425 bp,编码1474个氨基酸,与GenBank中登录的参考株的IE180基因核苷酸同源性为98.4%～99.1%,氨基酸同源性为97.8%～98.4%。系统进化树分析结果表明,该毒株与毒株TNL(登录号：AF352564.2）的亲缘关系较近。     

猪伪狂犬病的诊断与控制

正1伪狂犬病的病原学及流行病学(1)伪狂犬病的病原学。伪狂犬病又称Aujeszky氏病,是一种急性高度接触性传染病。目前,PR已经被我国列为2类传染病。PR的致病病毒为猪疱疹病毒I型伪狂犬病病毒(PRV),该病毒属于疱疹病毒,是一个封闭的核衣壳,属于双股DNA病毒,有囊膜。PRV感染的发生与该病毒的囊膜有着直接的关系,而     

伪狂犬病基因缺失苗的研究进展

<正>伪狂犬病(Pseudorabies,PR),又称Aujeszky氏病,是由疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科猪疱疹病毒I型(Suid Hepervirus I,SHV-I)又称为伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)所引起的猪、牛、羊等多种     

猪伪狂犬病病毒闽A株PK基因的克隆及其鉴定

<正>伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的家畜和多种野生动物的急性传染病。PRV由Aujeszky在1902年发现并鉴定,因此该病又叫奥耶斯基病[1]。猪伪狂犬病呈现典型的潜伏感染,任何年龄的猪耐过急性感染后,均能形成潜伏感染,病毒在猪体内终生潜伏,一定条件下潜伏的病毒可以激活,引起复发性感染并向外散毒,这种机制导致伪狂犬病很难根除[2]。     

淮安地区猪伪狂犬病的防制

伪狂犬病（Pseudorabies,PR）又名奇痒症、奥叶基氏病（Aujeszky＇s disease,AD）,病原为疱疹病毒科、猪疱疹病毒属的伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）,是一种具有重要经济意义的病毒性传染病。至今世界上有40多个国家和地区包括美国、德国、法国、新西兰、日本等有本病的报道,世界动物卫生组织（OIE）将其列为B类动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。     

表达多个外源基因的重组伪狂犬病病毒的构建及其细胞培养特性研究

将SV40启动子控制下的LacZ报告基因表达盒与分别在CMV启动子控制下的含有猪瘟病毒（CS-FV）E2基因及猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5基因的表达盒插入到伪狂犬病病毒（PRV）Bartha-K61株TK基因中，通过蓝斑筛选获得了一株插入CSFVE2、PRRSVGP5与LacZ基因的重组伪狂犬病病毒，命名为rPRV-E2-GP5。经Western blot、间接免疫荧光试验证实E2、GP5基因在重组病毒感染细胞中获得了表达。重组病毒感染Vero、PK-15、IBRS2和CEF细胞后的增殖滴度和致细胞病变特征与亲本病毒比较，无显著差异。本试验结果表明在PRV基因组中可以插入多个外源基因，为进一步研究多价基因工程载体疫苗奠定了基础。     

伪狂犬病病毒UL9基因突变株构建及其生物学特性分析

伪狂犬病病毒（PRV）是一种大的DNA病毒,编码蛋白众多,其中一些具有酶功能,涉及病毒复制、蛋白调控和核苷酸代谢等。本研究在实验室已有的PRV感染性克隆pBAC-PRV基础上,利用体外转座的方法将Tn5转座子随机插入伪狂犬病病毒基因组中,获得病毒复制相关功能基因UL9的突变体。将UL9基因突变体转染Vero细胞,获得重组病毒vPRV-Tn5-UL9。通过病毒空斑实验和多步生长曲线测定等方法对vPRV-Tn5-UL9的生物学特性进行研究分析,结果显示突变病毒可在体外传代,但病毒的增殖速度显著降低,这表明UL9基因为PRV复制非必需基因,但对病毒复制增殖存在重要影响。此外,动物试验显示,vPRV-Tn5-UL9失去对小鼠的致死能力。本研究成功利用体外转座技术获得了PRV的UL9突变病毒,为构建重组病毒的方法提供了新思路,同时也为研究PRV复制机制打下一定基础。