转基因柔嫩艾美耳球虫对生态环境的影响

【目的】从表达M2e-EYFP融合蛋白转基因柔嫩艾美耳球虫的稳定性,及其在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力方面,分析转基因球虫对生态环境的潜在风险。【方法】稳定性试验包括:转基因球虫感染非靶动物,观察临床症状和卵囊产出情况;转基因球虫继代繁殖,检测荧光率;转基因球虫与毒害艾美耳球虫混合感染,PCR检测卵囊中的外源基因。传播能力试验主要是分析感染鸡和不感染同居鸡的卵囊产量和荧光率。竞争性试验则是用不同混合比例的2种球虫感染鸡,检测卵囊产量和荧光率;存活能力试验是用不同处理方式的卵囊感染鸡,检测卵囊是否产出以分析卵囊存活能力。【结果】转基因球虫不感染小鼠和家鸽,与野生型柔嫩艾美耳球虫宿主特异性相同;连续繁殖传17代后外源基因稳定表达。与毒害艾美耳球虫混合寄生时在异种球虫体内未检测出外源基因。传播能力试验中,46d攻毒时转基因球虫感染与不感染同居组的卵囊产量差异不显著,但与不感染对照组相比均显著减少,且1∶1感染和不感染同居组卵囊荧光率检测结果维持在51.6%67.9%。竟争性试验中,攻毒时各比例感染组卵囊产量均极显著少于不感染攻毒对照组,荧光率检测结果各比例组变化幅动不大,且1∶1组哨兵鸡卵囊荧光率检测结果为41.2%61%。存活能力试验,转基因球虫与野生型球虫在夏季室温条件下均不能存活90d,且与其他不同方式处理的卵囊外界存活时间接近。【结论】说明转基因球虫具有良好的稳定性,在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力未呈现显著优于野生球虫的趋势。     

鸵鸟源隐孢子虫的种类鉴定及其生物学特性研究

 【目的】掌握鸵鸟隐孢子虫病的流行范围和流行动态，以及研究鸵鸟源隐孢子虫的生物学特性。【方法】应用饱和蔗糖溶液漂浮法检查鸵鸟新鲜粪样404份，详细观察、测量卵囊形态大小；收集纯化阳性样品中的隐孢子虫卵囊，分别人工经口感染幼鸵鸟、雏鸡和小白鼠并利用组织病理学试验技术研究其生物学特性。【结果】检测到阳性样品10份，总阳性率为2.48% (10/404)，且感染率与鸵鸟日龄有一定的关系。其卵囊平均大小为5.43×4.38μm（4.0～6.0×3.7～5.0μm）,形状指数1.24（长/宽）,（n=50）。分离到的卵囊能成功感染雏鸡和幼鸵鸟，但不能感染小白鼠。受试雏鸡具有明显的呼吸道症状，而幼龄鸵鸟呼吸道症状较轻微。此外，在两种动物体内的排卵囊规律差别较大，在鸵鸟体内出现多个排卵囊高峰。虫体主要寄生于雏鸡和幼鸵鸟的泄殖腔和法氏囊，引起法氏囊萎缩、微绒毛大量脱落等病理变化。【结论】根据其卵囊形态、宿主范围和虫体寄生部位等生物学特性，结合文献报道，笔者在国内发现并初步鉴定出鸵鸟源隐孢子虫为贝氏隐孢子虫（Cryptosporidium baileyi）。     

珍珠鸡和雉鸡贝氏隐孢子虫实验感染研究

 采用鸭源贝氏隐孢子虫卵囊经口感染珍珠鸡和雉鸡，感染后的4～30天和4～25天，分别在珍珠鸡和雉鸡的粪便中检出卵囊。贝氏隐孢子虫在珍珠鸡和雉鸡的喉头、气管、支气管、法氏囊和泄殖腔的粘膜上皮发育。珍珠鸡感染后出现明显的呼吸道症状，剖检可见眶下窦肿大、气管和法氏囊水肿、表面有大量粘液、肺暗红、气囊增厚呈云雾状外观。组织学检查可见气管和法氏囊上皮细胞增生、肿胀和脱落以及炎性细胞浸润。感染后33天，珍珠鸡体重明显低于未感染对照组。与珍珠鸡相比，雉鸡感染后只出现轻微呼吸道症状，大体及组织病变均较轻，且体重与对照组无显著差异。实验表明，珍珠鸡和雉鸡是贝氏隐孢子虫的新宿主。     

中西药结合对猪弓形虫病的疗效研究

［目的］评价中西药结合治疗猪弓形虫病的疗效,以提高其治愈率、降低复发率。［方法］用复方磺胺类药结合自拟抗弓形虫中药方剂对人工感染弓形虫病的猪进行治疗,检测其腹水含虫量。将感染猪病料接种小白鼠,进行动物回归试验。观察中西药结合治疗猪的临床表现并检测其血清循环抗原（CAg）水平,与中药组、西药组和对照组进行比较。［结果］中西药结合对弓形虫滋养体有100%杀灭作用。回归试验结果表明仅有1只接种脑组织的小白鼠中发现少量弓形虫。治疗猪只均未出现明显临床症状,其血清CAg峰值低于对照组且转阴速度比中药组、西药组和对照组快。［结论］中西药结合治疗猪弓形虫病具有较好的疗效。     

鹅球虫Eimeria nocens的生活史及致病性研究

 16只10日龄小鹅分别接种1.0×105~1.0×106个Eimeria nocens孢子化卵囊，在接种后30~336 h期间内分期剖杀，对E. nocens的生活史和致病性进行了动态性观察。在内生性发育过程中，E. nocens至少有3个世代的裂殖生殖阶段。有两种类型的裂殖体存在，一种在接种后54~78 h发育成熟，为第1代裂殖体，每个含10个左右的裂殖子；另一种在接种后102~240 h发育成熟，为第2代或第3代裂殖体，每个含25个左右的裂殖子。接种后198 h左右虫体开始进入配子生殖阶段。从接种后第10天开始有卵囊排出，显露期为4 d。25℃下卵囊孢子化时间为60~72 h。E. nocens寄生于空肠后部、回肠、盲肠、直肠和泄殖腔的绒毛和肠腺上皮细胞及固有膜中。在裂殖生殖后期、配子生殖和卵囊排出期间组织病变比较明显，主要包括肠粘膜上皮坏死和脱落、肠壁水肿、出血和炎性细胞浸润以及肠绒毛萎缩等，尤以回肠及其邻近部位最为严重。感染鹅腹泻、食欲下降、消瘦乃至死亡。     

东北虎源等孢球虫虫种的鉴定

对采自黑龙江省某动物园的东北虎源球虫虫种进行鉴定。对东北虎源球虫进行形态学观察;应用孢子化卵囊对犬进行感染性试验;根据已发表的猫等孢球虫核糖体内转录间隔区Ⅰ(ITSⅠ)序列设计引物,提取虫体基因组DNA扩增目的片段,并与其他球虫的ITSⅠ序列进行同源性比较。结果表明,根据形态学观察发现该球虫符合等孢属球虫的特征;用孢子化卵囊感染犬,结果不能在其粪便中检出卵囊;利用聚合酶链式反应(PCR)扩增的目的片段,与其他19种球虫的ITSⅠ序列同源性为35.97%~98.71%之间。通过对东北虎源球虫形态学观察、犬的感染性试验与分子鉴定,确定东北虎源球虫为等孢属球虫,并且与猫等孢球虫亲缘最近。     

柔嫩艾美耳球虫子孢子抗原的制备

[目的]为进一步研究柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）的单克隆抗体奠定基础。[方法]给肉鸡雏接种E．tenella纯种孢子化卵囊：第5～10天收集鸡的粪便并标记、粗提，经卵囊孢子化、纯化孢予化的卵囊、计数卵囊后，最终制备出子孢子抗原。[结果]该方法制备E．tenella子孢子抗原较其他方法简单易行，不需太多专门仪器和培养液，一般实验室均可进行，效果良好。但所用时间较长。[结论]该试验成功分离提纯出了鸡的E．tenella卵囊，并获得了蛋白浓度较高的抗原，为单克隆抗体的制备提供了有力保障。     

Toxoplasma gondii: transmission through feces in absence of Toxocara cati eggs

When incubated at room temperature (23 degrees C) for 3 to 14 days, feces from cats infected 4 to 8 days with Toxoplasma gondii, and free of Toxocara cati eggs, produced toxoplasmosis in mice. Results indicate that the nematode egg is not necessary for transmission of the parasite.     

The Effects of Exogenous Nitric Oxide on Eimeria tenella Oocysts

The effects of exogenous NO on Eimeria tenella oocysts were studied. The E. tenella oocystsfreshly isolated from feces of experimental chickens infected with E. tenella and sporulated E. tenella oocystswere treated in vitro by the well-known NO-donors, SNP, SPER/NO and GSNO. The results showed thatamong the 3 NO donors, only GSNO had significant effects on the percentage of sporulated oocysts, the inhibi-ting rate of purified oocysts was from 93 to 97%, and reached 100% on the oocysts in the feces of chickenswith E. tenella infection. GSNO also significantly decreased the virulence of E. tenella oocysts, and the oo-cysts treated by 2 -8 mmol L-1 GSNO almost lost their pathogenicity to chickens.     

十种药物对牛隐孢子虫卵囊的抑杀效果

采用光学显微镜观察及免疫抑制小鼠感染方法评价了菌毒敌、单甲脒、速尔2号、福尔马林、氨水等10种化学药物对隐孢子虫卵囊的抑杀效果.试管内杀灭试验结果表明,2%的菌毒敌、2%的单甲脒、2%的速尔2号杀灭率分别为98.2%,93.8%,88.7%.经上述3种药物处理24h的卵囊感染小鼠6d后。小鼠粪中仍未见卵囊排出。表明这3种药物对牛隐孢子虫卵囊有良好的杀灭作用.     

PATHOGENIC PLEUROPNEUMONIA-LIKE MICROORGANISMS FROM ACUTE RHEUMATIC EXUDATES AND TISSUES

In suitable cell-free media it has been possible to cultivate pleuropneumonia-like microorganisms from the following materials, first, from chorioallantoic membranes in which lesions were apparently induced by exudates from patients with rheumatic fever; second, from pneumonic lungs of mice inoculated with similar exudates or with suspensions of the abovementioned abnormal membranes; and third, directly from the arthritic exudate of a patient with rheumatic fever, and also from an erythema nodosum nodule excised from a patient with this same disease. With three different subcultures from joint fluid, iritis has been induced in rabbits; and following intranasal inoculation with the same cultures there has developed in mice a pneumonia similar to that found in mice inoculated with rheumatic exudates and with suspensions of chorioallantoic membranes infected with rheumatic exudates. Therefore it seems probable that in all instances the pathogenic agent was derived from similar sources, viz., patients with rheumatic fever. Further work will be required to demonstrate the etiologic significance of these pathogenic agents in rheumatic fever.     

桦褐孔菌不同提取物抗弓形虫效果的比较

为了探讨桦褐孔菌不同提取物抗弓形虫的效果,对桦褐孔菌水煎剂、多糖、白桦脂醇的体外抗弓形虫作用和对感染弓形虫小白鼠的治疗效果进行了比较。结果表明,体外试验中3种提取物均能抑制弓形虫的生长和繁殖,其中多糖组的抗虫效果优于其他2组,但试药组均弱于阳性对照组;在染虫试验中,桦褐孔菌多糖组中小白鼠平均存活天数与阳性对照组比较无显著性差异,表明桦褐孔菌多糖体内抗虫效果较好。     

Immunity and intracellular infection: resistance to bacteria in mice infected with a protozoan

Mice infected with the intracellular parasite Toxoplasma gondii for periods of as long as 7 months were resistant to challenge with numbers of Listeria monocytogenes and Salmonella typhimurium that were uniformly lethal to normal mice. This resistance did not appear to depend on the strain of toxoplasma employed or the route of inoculation of either toxoplasma or bacteria. Onset of immunity to listeria was demonstrable as early as 1 to 2 days after infection with toxoplasma. Resistance to toxoplasma was not demonstrable in mice immune to listeria. Interferon did not appear to be a mediator of the immunity observed in toxoplasma-infected mice.     

免疫辣根过氧化物酶染色法诊断猪弓形虫病的研究

根据病猪临床表现以及病猪组织切片的常规苏木素-伊红(HE)染色和免疫辣根过氧化物酶染色对病猪作出初步诊断;采集病猪的各脏器组织,研磨后接种ICR鼠,分离鉴定病原,探讨免疫辣根过氧化物酶染色法快速诊断猪弓形虫病的可行性。结果表明:常规HE染色法和免疫辣根过氧化物酶染色法都能发现弓形虫的假包囊或速殖子。但是,HE染色切片仅能在个别视野中发现弓形虫,而免疫辣根过氧化物酶染色法可在许多器官切片的多个视野中观察到更多的被染成棕黄色的弓形虫速殖子和假包囊,证明免疫辣根过氧化物酶染色法是诊断猪弓形虫病的有效方法。     

鸡毒害艾美尔球虫早熟株的免疫原性研究

为制备早熟弱毒疫苗提供虫株和理论依据,对选育的毒害艾美尔球虫早熟株(P8)和亲本株(P0)的免疫原性进行了研究。试验分别用P0和P8,以每只鸡300个孢子化卵囊免疫7日龄雏鸡,免疫后14 d,分别以每只鸡1×104和10×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒,以OPG、平均每只鸡的卵囊产量,卵囊减少率、相对增重率、病变记分减少率为指标。结果表明:(1)攻毒后每只1×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组的卵囊减少率分别为75.59%、84.66%;(2)攻毒后每只10×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组病变记分降低率分别为81.46%、76.66%。表明P8株的免疫原性与P0无明显变化,均有保护力,符合早熟株免疫原性保持不变的特点。     

净球散对球虫病雏鸡部分血液指标的影响

以120只15日龄AA肉仔鸡为试验对象,研究人工感染球虫卵囊后,净球散对球虫病雏鸡部分血液指标变化的影响及其机制。结果表明:净球散对正常雏鸡红细胞数、白细胞总数、血红蛋白含量、白蛋白和血糖浓度的影响与对照组比较,差异不显著(p>0.05);应用净球散的球虫感染雏鸡的血液指标与感染对照雏鸡比较,红细胞数、血红蛋白含量、白蛋白和血糖的浓度显著升高(P<0.01或P<0.05),白细胞总数显著降低(P<0.01)。所以净球散可对抗球虫使感染雏鸡的红细胞数、血红蛋白含量、白蛋白和血糖浓度降低和白细胞总数升高的作用,其机制是药物杀灭球虫卵囊或抑制球虫卵囊在肠粘膜上的生长繁殖,而不是药物能促进雏鸡血液指标的改变。     

柔嫩艾美尔球虫库尔勒株免疫原性初步研究

本实验采用单卵囊分离技术,得到1株柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella),对该株E.tenella的免疫原性做了初步研究,分别用100个卵囊/只,1,000个卵囊/只,10,000个卵囊/只的剂量免疫,以100,000个卵囊/只的剂量攻毒,结果显示,1000个卵囊/只的剂量免疫效果最好。     

复方中药治疗急性弓形虫病的试验研究

用弓形虫Rh株感染昆明小鼠,设计复方中药治疗组及对照组,观察对比复方中药对正常小鼠的影响、对感染小鼠腹水中弓形虫数量及小鼠平均存活天数的影响.按照疗效判定标准,复方中药治疗感染弓形虫小鼠有效.     

西杂肉牛球虫病的诊断与虫种鉴定

[目的]为肉牛球虫病的诊断和防治提供依据。[方法]通过对新乡市某肉牛场患出血性肠炎的西杂肉牛进行临床检查,粪便直接涂片检查和饱和食盐水漂浮检查,并对粪样中分离的球虫卵囊及其孢子化卵囊进行形态学观察和虫种鉴定。[结果]在粪便中检出大量球虫卵囊,球虫经鉴定分别为艾美耳属的牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、巴西艾美耳球虫、巴克朗艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫,确诊该牛场的出血性肠炎是由多种牛球虫混合感染引起的牛球虫病,其中,牛艾美耳球虫和邱氏艾美耳球虫为该肉牛场的优势种。[结论]临床检查、粪便实验室检查和虫种鉴定是诊断肉牛球虫病的一套简便实用方法。     

鸡传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定

从安徽省合肥郊县疑似传染性法氏囊病的雏鸡体内,分离到4株病毒。经血清学、人工感染、鸡胚接种、分子生物学试验鉴定,结果表明,分离物为传染性法氏囊病病毒(IBDV)。人工感染易感鸡试验表明,4株中有2株具有超强毒株的致病特点。将其接种36日龄鸡后第2天精神沉郁,拉白色或绿色稀粪,发病率为100%。第3~4天出现死亡高峰,死亡率达80%。剖检可见全身性出血素质,法氏囊呈“紫葡萄”样外观。接种鸡胚后72~96 h引起鸡胚全部死亡。另外2株接种易感鸡后,发病率和死亡率都较低,临床症状不典型,出现亚临床传染性法氏囊病,剖检病理变化不明显,表明此2株毒力较弱。