鸡肠道芽孢杆菌的分离鉴定及产蛋白菌株的筛选

本实验从鸡肠道分离出50株菌种,通过对菌种菌落培养特性、形态观察、生理生化实验,初步鉴定出8株为芽孢杆菌。通过产蛋白菌株的筛选试验筛选出1株能够分泌蛋白的芽孢杆菌,该菌株可望成为外源蛋白高效分泌表达的宿主。     

鸡源凝结芽孢杆菌的分离鉴定及耐受性分析

【目的】试验旨在寻找1株性能稳定、环境耐受性强的凝结芽孢杆菌菌株,以在实际生产中发挥其替抗功能。【方法】本研究采集160日龄健康海兰褐蛋鸡的粪便样本,进行细菌分离纯化,并对分离菌进行形态学特征观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析。通过绘制该菌的生长动力曲线确定其生长规律;利用耐酸、耐胆盐试验分析该菌株的耐受性;通过单因素试验对分离菌株的培养条件进行优化。【结果】分离菌在普通培养基上长出表面粗糙、不规则的灰白色菌落,镜检为杆状、芽孢端生的革兰氏阳性菌。结合生化试验及16S rDNA基因序列分析综合鉴定该菌株为凝结芽孢杆菌,命名为NJ001。生长动力曲线表明,7～24 h为该菌株的对数生长期,24 h活菌数达到顶峰,凝结芽孢杆菌NJ001的最佳培养时间为24 h;耐受性试验结果显示,该菌株pH 3.0温育2 h存活率为59.5%,pH为4.0时存活率达到87.6%以上,对酸有较强耐受力;0.3%胆盐处理2 h存活率为54.0%,胆盐浓度升至0.5%时存活率仍有50%以上,该菌对胆盐有较强的耐受性。单因素试验结果发现,该菌的最佳培养温度为40℃,接种量2%,初始pH 7.0,摇床转速...     

饲用木聚糖酶菌株的筛选及鉴定

利用刚果红透明圈法,从采集的土样中筛选分离一株产木聚糖酶的菌株,根据其形态学和生理生化特征,结合16 SrDNA分子水平分析,鉴定该菌为短小芽孢杆菌。摇瓶发酵粗酶液的性质测定表明,该菌株酶活力可达132.53 IU/mL。     

高产谷氨酸脱羧酶的菌株筛选及鉴定

γ-氨基丁酸作为一种新型饲料添加剂,助推畜牧养殖业绿色健康发展。谷氨酸脱羧酶利用磷酸吡哆醛为辅因子将L-谷氨酸脱羧生成γ-氨基丁酸的转化方法得到了广泛关注。本研究利用平板活性筛选结合摇瓶发酵复筛的方法,从宁夏沙漠土样中筛选获得了3株具有较高谷氨酸脱羧酶活性的菌株。通过对菌落形态、16S r DNA序列比对和系统发育树分析,3株菌初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),命名为Bacillus sp. Z1、Bacillus sp. Z11和Bacillus sp. Z20,保藏于中国农业微生物菌种保存中心。通过全基因组测序分析,发现三株菌分别含有一个谷氨酸脱羧酶编码基因。三条基因序列长度均为1 470 bp,序列相似性为94.5%～97.3%,编码489个氨基酸和1个终止密码子,理论分子量55 ku。     

高产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及产酶特性研究

为了从腐殖质土壤中筛选得到高产纤维素酶菌株,本试验进行了产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及其产酶特性研究。首先用羧甲基纤维素钠(CMA-Na)培养基初步分离产纤维素酶菌株,再经过酶活复筛得到一株高产纤维素酶菌株B17。经过形态学和16S rDNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其发酵产酶条件和酶学性质进行初步研究。试验结果表明,菌株B17的最佳发酵条件为:培养时间3 d、发酵温度35℃、初始pH为6.0,该条件下测得CMC酶活达85.48 U/mL、FPA酶活达59.85 U/mL。酶学性质研究表明:菌株所产纤维素酶最适反应条件为温度50℃、pH为6.0,且具在30～60℃、pH为4.0～7.0范围均具有较高酶活。以上结果表明,本研究所得菌株B17具有较高的开发价值,可应用于农作物秸秆饲料的生产。     

鸡源芽孢杆菌的分离鉴定及小鼠毒性试验研究

本试验从鸡肠道分离出 42 株菌种,通过对菌种菌落培养特性、形态观察、生理生化试验,初步鉴定出 8 株为芽孢杆菌.用这 8 株菌对小白鼠进行为期 20 d 的正常量和加倍量的饲喂,结果表明,试验组小白鼠均未出现中毒现象,所选用的 8 株细菌均较安全,可作为动物微生态制剂的菌种应用.     

抗鸡源大肠杆菌的枯草芽孢杆菌鉴定及代谢产物理化特性研究

本试验采用鸡源大肠杆菌O2作为指示菌,对29株芽孢杆菌的发酵产物进行了抑菌效果检测,获得了4株抑菌圈在15mm以上的芽孢杆菌;在此基础上,对其代谢产物进行了抑菌谱的测定及理化稳定性试验,发现其中一株芽孢杆菌对革兰氏阳性、阴性细菌及真菌均具有良好的抑菌和杀菌效果,理化性质稳定,对鸡源大肠杆菌抑菌圈达到20mm以上;生理生化鉴定及16S rDNA测序结果显示该菌为一株枯草芽孢杆菌,命名为枯草芽孢杆菌GD株。     

枯草芽孢杆菌的分离筛选

本文基于从秸秆垛底层土壤中分离枯草芽孢杆菌的目的,为发酵秸秆提供菌株,从陕西杨凌农村秸秆垛中采取底层土样并进行分离。分离出11株菌,经过形态特征、生理生化特征等方法从中分离初步鉴定了3株疑似菌株。经对液态发酵条件的优化,对3株疑似菌进行液态发酵试验,以粗蛋白和粗纤维含量为标准,筛选出一株发酵效果最好的菌株b-1进行了16SrDNA序列分析,最终鉴定b-1菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其同源性≥99%。     

产有机酸芽孢杆菌的筛选、鉴定及产芽孢条件优化

试验旨在筛选一株高产有机酸的芽孢杆菌,并对其芽孢形成条件进行优化。从实验室保藏的200株芽孢菌株中筛选能够使溴甲酚紫平板变黄的菌株。利用液相色谱对筛选所得的菌株发酵液中有机酸的种类、含量进行测定。根据目的菌株的形态特征和生理生化试验以及16S r DNA序列分析结果对菌株进行种属鉴定。利用单因素试验和正交试验结合的方法,考察不同的碳源、氮源、无机盐、p H值、培养时间、接种量对菌株芽孢形成的影响。结果表明,菌株R42-16发酵液中乙酸、乳酸的含量较高,分别为221、174μg/ml。经鉴定菌株R42-16为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amy-loliquefaciens)。本试验条件下,菌株R42-16的最佳培养基组成为:玉米粉1%、酵母浸粉2%、Mn SO4·H2O 0.01%、Ca Cl2·H2O 0.01%,培养基最佳初始条件为:发酵时间48 h、接种量4 ml、p H值6、装液量50 ml/250 ml。在此优化条件下,发酵液中菌株R42-16的活菌数达到3.19×109cfu/ml,芽孢形成率达到93.76%。     

蟹源益生芽孢杆菌的筛选

本试验根据菌体对高温和低pH的耐受性、产酶能力及对病原菌的抑菌效果,对中华绒螯蟹肠道中的芽孢杆菌进行了筛选.结果表明,在筛选到的3株芽孢杆菌中,ESB3菌株抑制中华绒螯蟹病原菌嗜水气单胞菌CL99920菌株的能力最强,产蛋白酶和淀粉酶的能力也较好,在肉汤培养基初始pH 3.0的条件下培养2 h时,其存活率为(32.56±2.87)%,90 ℃水浴处理10 min存活率为(68.54±8.28)%;浓度低于1×108CFU/mL对中华绒螯蟹无毒害作用,1×107 CFU/mL的ESB3能提高中华绒螯蟹对嗜水气单胞菌感染的抵抗力;经形态学和生理生化反应鉴定,ESB3为地衣芽孢杆菌.     

饲用鸡源芽孢杆菌的鉴定及环境耐受性研究

为开发饲用芽孢杆菌用于鸡的生产,从放养的淮南麻黄鸡盲肠内分离了2个菌株,用酵母浸出粉胨葡萄糖培养基分离并纯化,采用常规生化试验、16 S rDNA鉴定为芽孢杆菌。模拟胃肠道内环境研究其耐盐、耐人工胃液和耐胆盐能力显示,这2株芽孢杆菌具有较好的耐盐、耐人工胃液和胆盐能力,可耐过机体胃肠道内环境。耐热性研究表明,这2株芽孢杆菌均能在85℃条件下生长。结果表明所分离的芽孢杆菌可以在肠道内生存,具有耐热性,有利于工业化生产。     

产淀粉酶菌株的筛选鉴定及酶学特性研究

试验旨在开发饲料用淀粉酶制剂,提高饲料利用率并探索新型非常规饲料资源。研究利用平板法从土壤中筛选产淀粉酶细菌,经形态学和分子生物学法对淀粉酶细菌进行鉴定,并分析其生长特点及酶学特性。结果表明,该产淀粉酶细菌为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),该菌所产淀粉酶的最适反应条件为50℃、pH值7.0,且在中低温以及中性和弱碱性条件下稳定性较好,Na^(+)、K^(+)和Ca^(2+)能够激活酶活力,而Mn^(2+)和Zn^(2+)能够抑制酶活力,该菌在生长稳定期产淀粉酶活力最高,可在发酵14~16 h对淀粉酶进行收获。研究表明,试验菌株所产淀粉酶可以在动物肠道中发挥一定的作用,可用于开发新型发酵饲料及酶制剂产品,在饲料行业具有较广阔的应用前景。     

产蛋白酶芽孢杆菌的筛选鉴定及酶学特性分析

为了分离筛选产蛋白酶芽孢杆菌,以开发新型饲料添加剂,本研究选取小鼠肠道内容物为样品,通过对样品进行预处理以及酪蛋白平板检测法分离筛选获得产蛋白酶芽孢杆菌,对该菌进行形态学和分子生物学鉴定并分析其生长规律、产酶规律以及所产蛋白酶的酶学特性。结果表明,经形态学和分子生物学鉴定该菌为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis),其所产蛋白酶的最适反应条件为50℃,pH=8.0,具有一定的高温耐受性,在弱酸、中性和弱碱性条件下表现出一定的稳定性,Ca²⁺和Mn²⁺能够显著提高酶活(P<0.05),Zn²⁺、Mg²⁺、Cu²⁺和EDTA、尿素溶液对蛋白酶活力具有显著抑制作用(P<0.05),培养至16 h菌体量达到最大值,发酵22 h上清液中的蛋白酶活力达到最高值(57.77 U/mL)。该芽孢杆菌的成功筛选分离以及其所产蛋白酶的分析研究,为新型饲料添加剂的开发利用提供了物质基础。     

一株高产α-淀粉酶的地衣芽孢杆菌的筛选及鉴定

芽孢杆菌属的一些菌株对动物和人类具有广泛的作用而被认为是益生菌,其中地衣芽孢杆菌是芽孢杆菌中较具有应用潜力的菌种之一.本文从健康的鸡、鸭、鹅、马、牛、羊粪便及周边土壤中分离出12株芽孢杆菌,并通过产总淀粉酶活性和α-淀粉酶活性筛选出6株产淀粉酶的芽孢杆菌,通过形态学分析、生理生化分析及分子鉴定,确定产酶性能最优的1株芽...     

益生菌腊样芽孢杆菌的筛选及培养基的优化

为开发具有特定生理活性的新型微生态制剂,以益生菌腊样芽孢杆菌(BacillusCereus)为初发菌株,对蜡样芽孢杆菌的初发菌株进行了耐受性试验,其耐受性结果为:pH4.8;胆盐浓度(W/V)0.01%;温度48℃。然后对蜡样芽孢杆菌的初发菌株通过紫外线诱变,筛选出能够适应肠道生存环境,耐受胆盐和高温的优良菌株,其极限耐受条件为:pH4.2,胆盐浓度0.045克/100毫升,温度55℃。通过单因素试验和正交实验确定了腊样芽孢杆菌发酵培养基的最佳配比为(W/V):葡萄糖1.0%,豆粕粉3.0%,玉米浆0.3%。对诱变后的菌株进行了生长曲线的测定,并通过生理生化试验对筛选出来的菌株进行鉴定。     

动物肠道益生菌地衣芽孢杆菌的筛选及培养基的优化

为了研制新型微生态制剂,以常用益生菌株--地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为试验菌株,在测定了初发菌株的极限耐受性后,运用紫外诱变技术筛选到了一株耐酸性较强,耐胆汁,耐高温的地衣芽孢杆菌D-11.其极限耐受条件为：pH 4.18,胆盐浓度0.4 g/L,温度58 ℃.并通过试验对该菌株进行了形态和生理生化特征的鉴定.最后通过单因素和正交试验对地衣芽孢杆菌D-11的发酵培养基成分配比进行了选择和优化,为以后的工业化生产提供依据.结果显示当培养基的配比浓度为：玉米淀粉15 g/L、豆粕粉90 g/L、玉米浆6 g/L时菌体的培养效果最好.     

益生菌发酵工艺中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定

在益生菌生产发酵工艺中常出现耐热杂菌污染的现象,导致产品质量下降,甚至生产失败,从而造成经济损失。本试验为确定发酵工艺中被污染的耐热性杂菌,采集污染发酵液为检样,分离及纯化一株菌株(命名为YBNR),通过形态学、生化试验及16sRNA测序等方法进行菌株鉴定。结果显示:污染发酵工艺的耐热菌为蜡样芽孢杆菌。     

鸡源乳酸杆菌优良菌株的筛选

乳酸杆菌是鸡肠道中的最优势菌群之一,对维持机体的健康起着重要的作用。随着人们对抗生素等药物危害的认识和对健康意识的增强,以及适应国际市场的要求,微生物作为活菌制剂添加到饲料中越来越受到专家和学者的认同。而乳酸杆菌是国际上允许添加的研究的最早和最深入的菌种,但大多数乳酸杆菌都存在对外界环境的耐受能力差的缺陷,作为有效的微生物添加剂必须能够通过胃肠中的低pH值和较高浓度的胆盐环境才能发挥其生物学功能。本研究就是根据这些特点对本试验室保存的乳酸杆菌进行筛选,并探讨了它们对致病性大肠杆菌和沙门氏菌的拮抗能力,从…     

高产中性蛋白酶芽孢杆菌的筛选鉴定及酶学性质研究

为了获得高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株,试验从不同环境样本中分离细菌并进行16S rDNA序列鉴定,利用酪蛋白琼脂培养基对产蛋白酶菌株进行初筛、福林酚法检测中性蛋白酶活性,结合形态学和分子生物学鉴定对高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株进行分类鉴定,通过对培养时间、温度和pH值的调节,研究该菌株的酶学性质。结果表明：成功筛选出1株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)A1,该菌株具有较强产中性蛋白酶能力,中性蛋白酶活性为31.40 U/mL,所产中性蛋白酶的最适反应温度为50℃、最适pH值为7,在pH值=6～8时稳定性较好,对碱性环境有一定的耐受性,5.0 mmol/L的Ca²⁺和Mn²⁺对中性蛋白酶活性有显著促进作用(P<0.05),Zn²⁺和Fe²⁺对中性蛋白酶活性有抑制作用(P<0.05),Mg²⁺无明显作用。说明贝莱斯芽孢杆菌A1可以作为生产中性蛋白酶的备选菌株。     

亚硝酸盐降解芽孢杆菌的筛选鉴定及其降解效果研究

在贵州省都匀市雨花湖公园附近5～15厘米深土层的土壤和水域区泥底中采样,通过分离、筛选后得到了1株具有降亚硝酸盐(NO2-)优势的菌株且命名为Y2;经过测序及形态学等分析,判断Y2为Bacillus aryabhattai,即阿氏芽孢杆菌.实验分析显示该菌在养殖水样和模拟水样中7天后NO2-的降低率分别为24.3％、6...