复合酶制备抗氧化活性核桃多肽工艺优化

以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶复合水解核桃蛋白制备抗氧化活性多肽的工艺条件优化为对象,通过研究酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力的影响,并利用正交试验优化工艺条件,以提高核桃蛋白多肽对DPPH·的清除率。结果表明,酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力有一定影响;当木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解温度为45℃、时间1.5h、酶与底物浓度1500U/g、pH值7.0、复合酶比例为2∶1时,酶解物清除DPPH·的能力最强,清除率达78.7%。     

双酶水解黄粉虫水溶性蛋白制备抗氧化肽的研究

以黄粉虫幼虫的水溶性蛋白为原料,利用碱性蛋白酶和胰蛋白酶水解制备抗氧化肽,并对其水解工艺进行优化。以.OH清除率为指标,在单因素的基础上设计3因素(加酶量、pH和酶解温度)3水平的二次正交旋转组合试验。结果表明,双酶水解的最佳工艺条件为:m(料)∶V(液)=1∶20、水解时间2 h、加酶量17.36 mg/g(碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶活比为1∶1)、pH8.0、温度46.5℃。在此条件下制得的多肽具有较强的还原力,对DPPH.和.OH有较强清除作用。     

优质复配蛋白酶解工艺研究

以优质复合蛋白液为原料,采用复合蛋白酶进行水解,得到富含多肽的多肽液,研究酶种类、酶浓度、酶解温度、酶解时间等因素对多肽浓度的影响。试验以多肽质量浓度和DPPH·自由基清除能力为指标,筛选出最佳蛋白酶和最优复配比例,通过单因素和正交试验对酶解条件进行了优化。结果表明,风味蛋白酶添加量1 000 U/g,碱性蛋白酶、中性蛋白酶按2∶1复配时为复合酶解的最佳配比;其最佳酶解条件为:酶浓度为7 000 U/g,底物浓度为3%,温度为60℃,酶解时间为3 h;在该试验条件下,多肽浓度为17.43 mg/m L。     

鹿茸胶原多肽复合酶水解工艺研究

【目的】对鹿茸胶原多肽进行复合酶水解,优化水解工艺,并测定水解液分子量分布。【方法】以碱性蛋白酶和胰蛋白酶为供试酶类,选用酶解时间、pH值、酶解温度、加酶量为影响因素,采用响应面试验设计优化单酶水解条件,根据响应面试验所得到的单酶水解的最适条件,确定双酶复合水解方案。通过Sephadex G25测定鹿茸胶原多肽的分子量分布。【结果】碱性蛋白酶最优水解条件为:酶解时间3.6h,pH值10.50,酶解温度55℃,加酶量4%,水解液的水解度为22.03%;胰蛋白酶最优水解条件为:酶解时间3.2h,pH值8.00,酶解温度50℃,加酶量4.4%,水解液的水解度为15.81%。复合酶水解条件:酶解温度为52.5℃,调节pH值为10.50,加入4%的碱性蛋白酶酶解3.6h;调节pH值至8.00,加入4.4%的胰蛋白酶酶解3.2h,所得水解液的水解度可达33.42%。复合酶水解胶原多肽的分子量分布在400~1 400u。【结论】确定了鹿茸胶原多肽碱性蛋白酶和胰蛋白酶复合水解的工艺条件。     

中性蛋白酶酶解谷朊粉制备抗氧化多肽研究

以谷朊粉为原料,采用中性蛋白酶制备抗氧化多肽,并对其酶解工艺进行优化。结果表明,对中性蛋白酶酶解谷朊粉制备抗氧化多肽的影响顺序依次为酶解温度>加酶量>酶解时间;通过响应面分析优化酶解条件为底物浓度8%,加酶量2 800 U/g,温度52℃,时间280 min,此时酶解液羟自由基清除率达到65.3%,多肽含量为60.4 mg/mL。     

双酶水解黄粉虫蛋白制备生物活性肽的工艺优化

【目的】对胰蛋白酶与碱性蛋白酶Alcalase双酶组合水解黄粉虫蛋白制备生物活性肽的工艺进行优化,为获得高活性黄粉虫蛋白多肽及有效利用黄粉虫蛋白提供科学依据。【方法】以水解度和酸溶性肽得率为指标,研究了酶解时间、酶活比、料液比、加酶量、pH和酶解温度6种因素对酶解反应的影响。在此基础上设计了3因素(加酶量、pH和酶解温度)3水平的响应面试验。【结果】胰蛋白酶与碱性蛋白酶Alcalase双酶水解黄粉虫蛋白的最佳酶解条件为:酶解时间120 min,酶活比1∶1,料液比1∶3,加酶量23.41 mg/g,pH 8.77,酶解温度53.41℃。【结论】利用优化双酶水解条件制得的低分子多肽的水解度高达21.61%,酸溶性肽得率为92.09%。     

响应面法优化孔鳐软骨抗氧化多肽的酶解工艺

[目的]探讨酶解法制备孔鳐鱼软骨抗氧化肽的最佳工艺。[方法]以孔鳐软骨为试验材料,以DPPH自由基清除率为考察指标,采用双酶复合法酶解制备抗氧化多肽,通过响应面分析优化为最佳酶解工艺参数。[结果]采用胰蛋白酶与碱性蛋白酶复配(1∶3)组合制备酶解物的抗氧化性最好,酶解的最优工艺条件为:p H 8.5,加酶量6.25%,料液比2.1%,温度50.19℃,预测的DPPH自由基清除率为34.45%。[结论]通过响应面设计优化确定了孔鳐软骨抗氧化多肽的酶解工艺,为软骨鱼类高值化利用提供技术支持。     

响应面法优化酶解海洋低值鱼肉制备抗氧化肽工艺

[目的]优化碱性蛋白酶制备海洋低值鱼抗氧化肽的工艺。[方法]以DPPH自由基清除率为指标,在酶解温度、pH、加酶量、底物浓度等条件下进行单因素试验,在此基础上运用响应面法优化碱性蛋白酶酶解低值鱼肉制备抗氧化肽的工艺条件。[结果]在温度54℃、pH 8.8、底物浓度200 g/L、加酶量2 500 U/g的条件下酶解3 h,得到抗氧化肽的DPPH自由基清除率理论值为62.66%,实际值为61.87%,相对误差为1.26%。[结论]该研究为低值鱼抗氧化肽的开发利用提供理论依据。     

响应面法优化酶解鹿角冒渣制备抗氧化活性肽工艺

以游离氨基酸含量和抗氧化活性为试验指标,分别采用5种蛋白酶酶解制备鹿角冒抗氧化多肽,对鹿角冒渣为原料制备鹿角冒抗氧化活性肽的工艺进行了研究。结果表明,碱性蛋白酶产物的游离氨基酸含量和抗氧化活性均较高,因此水解用酶选择碱性蛋白酶。通过单因素和响应面回归试验对酶解工艺参数进行优化,得出最佳酶解条件:加酶量6%、底物浓度15%、pH8.5、温度53℃、反应时间4 h,制备的鹿角冒渣抗氧化肽对DPPH·的清除率预测值为74%,验证试验所得实测平均值为(74.65±1.24)%,实测结果与预测值符合良好。     

双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺优化

以麦胚为原料,制备具有抗氧化活性的麦胚肽。对碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L与胰蛋白酶双酶组合酶解麦胚的工艺进行优化。以水解度和1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除率为考察指标,探讨酶与底物浓度的比值([E]/[S])、酶降温度和酶解时间对制备麦胚抗氧化肽工艺的影响,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面法(RSM)优化了麦胚双酶水解的工艺条件。结果表明:双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺条件为底物浓度10.0%、碱性蛋白酶与胰蛋白酶酶活比1∶1、[E]/[S]为0.041 3、酶解温度50.3℃、酶解时间2.03 h、pH8.0。验证试验表明,在此条件下,麦胚水解度和抗氧化肽对DPPH自由基清除率分别为16.65%和50.16%;其抗氧化活性小于10 mg/ml VC。     

碱性蛋白酶酶解丰年虫卵蛋白工艺条件优化

以丰年虫卵为原料,利用碱性蛋白酶酶解制备营养价值更高的多肽,并对其水解参数进行优化.以水解度(DH)为指标,通过单因素试验研究酶解时间、酶解温度、pH、底物质量分数及加酶量等因素对碱性蛋白酶酶解丰年虫卵蛋白质过程的影响.在此基础上利用3因素(pH、酶解温度和加酶量)中心组合试验设计,得出最优酶解时间为150 min,底...     

中性蛋白酶酶解绿豆蛋白制备寡肽的研究

[目的]利用中性蛋白酶将绿豆蛋白质水解成肽和氨基酸,通过优化酶解条件得到水解度较高的绿豆肽。[方法]选用中性蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解以制备寡肽。在单因素考察的基础上,采用四因素三水平的正交试验设计优化酶解条件。[结果]试验得出,最适的反应条件为温度50℃、pH值6.5、底物浓度7%、酶浓度6000 U/g、水解时间240 min。[结论]绿豆分离蛋白在此条件下酶解,水解度的平均值可达28.82%。     

水解小麦蛋白对蛋白质风味影响研究

试验通过利用碱性蛋白酶和酸性蛋白酶对小麦蛋白进行水解,采用不同水解时间、水解温度处理,得到碱性蛋白酶最佳水解时间为4.5 h,酶解温度为50℃;然后在最适水解度下测定游离氨基酸的含量,并进行比较,通过游离氨基酸量的变化来研究蛋白质风味的变化.     

鲢鱼蛋白质酶水解最佳工艺条件的研究

以酸法提取的鲢鱼蛋白为原料,采用复合蛋白酶进行酶解,研究了底物浓度、酶解时间、酶解温度及反应pH对蛋白酶水解鲢鱼蛋白的影响,通过正交试验确定最佳酶解条件优化水解工艺。结果表明:复合蛋白酶水解鲢鱼蛋白的最适条件为:底物浓度2%,温度55℃,pH值7.5,酶解时间55 min,优化后的水解液蛋白质回收率约为50.88%。     

大麦虫蛋白质的提取分离及抗氧化性研究

以大麦虫幼虫脱脂粉为原料,根据溶解性的不同,从中分离出水溶蛋白、酸溶蛋白、醇溶蛋白及碱溶蛋白,并对各蛋白组分进行体外抗氧化性研究。结果表明:大麦虫幼虫脱脂粉中最主要的蛋白组分为水溶蛋白,占脱脂虫粉的30.24%;其次为碱溶蛋白19.45%;酸溶蛋白和醇溶蛋白分别占9.52%和4.43%。大麦虫各蛋白组分均有体外抗氧化作用,随着浓度的增大,各蛋白液的总还原能力、对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力也随之增强。水溶蛋白具有最强的还原力和清除超氧阴离子能力,酸溶蛋白清除羟基自由基能力最强。     

菲律宾蛤仔木瓜蛋白酶水解物抗氧化活性研究

以菲律宾蛤仔蛋白为原料,用木瓜蛋白酶对其进行水解,采用正交实验方法研究酶解温度、酶解时间,加酶量和pH对水解度和抗氧化性的影响;通过检测羟自由基清除率、DPPH自由基清除、超氧阴离子自由基清除率和还原力评价水解物的抗氧化性。结果表明：水解度与抗氧化性之间没有正反相关系,当温度为45℃,时间为6 h,加酶量为1 500μg/g,pH为7.0时,水解度最大;温度为45℃,时间为2 h,加酶量为2 000μg/g,pH为7.0时,水解物的抗氧化活性最强;水解物对羟自由、DPPH自由基和超氧阴离子自由基均有很好的清除作用,并呈现浓度依赖性。因此,菲律宾蛤仔蛋白的木瓜蛋白酶水解物具有很好的抗氧化性。     

Hydrolysis of Fish Protein by Analkaline Protease

Cod muscle protein was hydrolyzed by an alkaline protease in our study,The influences of hydrolysis temperature,fish protein concentration,and ratio of protease addition to protein amount on its degree of hydrolysis(DH) of protein were studied in details by applying dual quadratic rotary combinational design,The final reuslts whower that more than 84% cod muscle protein could be hydrolyzed and recovered.Cod protien hydrolysate thus obtained had a balanced amino acid composition and mainly consisted of small peptides with molecule weight less than 6900 dalton.     

Bacillus subtilis LC-9产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质与催化特性研究

[目的]系统研究Bacillus subtilis LC-9所产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质,探讨其在催化应用上的可行性。[方法]采用两步阴离子交换层析法对B.subtilis LC-9发酵液中的β-1,3-1,4-葡聚糖酶进行纯化,用SDS-PAGE检测其纯度,研究纯酶的酶学性质及该酶对β-葡聚糖和地衣多糖的降解特性,并采用TLC法检测其水解液中糖的成分。[结果]从自行筛选的糖苷酶产生菌B.subtilis LC-9的发酵液中经两步纯化,得到电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,其比活力达3 502 U/mg,表观分子量为28 kDa;酶的最适反应pH和温度分别为6.5和45℃,且在45℃下稳定;该酶催化地衣多糖的Km值和Vmax分别为4.13 mg/ml和1 238μmol/min/mg,催化大麦β-葡聚糖的Km值和Vmax分别为3.84 mg/ml和1 427μmol/min/mg;该酶降解大麦β-葡聚糖产生寡聚糖,最终产物主要为三糖和四糖,而降解地衣多糖终产物主要为三糖。[结论]从Bacillus subtilis LC-9发酵液中纯化获得了电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,性质研究表明该酶是专一性的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,有望用于啤酒、饲料等领域。     

酶解制备鸭肉香精前体物的工艺优化

为获得制备鸭肉香精较优的反应基料,采用蛋白酶对鸭肉蛋白进行酶解.结果表明:复合风味蛋白酶和肉类水解专用酶对鸭肉蛋白的水解效果优于木瓜蛋白酶和中性蛋白酶,前二者复配使用的效果优于单独使用;酶解的最佳工艺条件为酶解温度50℃,酶底物比(酶活性与底物蛋白质质量的比)1500 U/g,初始 pH 8.0,酶比(蛋白酶酶活性的比)为3∶1(复合风味蛋白酶与肉类水解专用酶的酶比);在该条件下水解3 h 得到的酶解液水解度约达36%;用水解度约36%的酶解液参与美拉德反应的产物风味较佳     

限制性酶解对11S球蛋白结构的影响研究

[目的]研究限制性酶解对11S球蛋白结构的影响。[方法]采用碱性蛋白酶对11S球蛋白进行限制性酶解,并利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、扫描电镜(SEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)、疏水性和巯基含量的变化等手段,研究酶解对11S蛋白结构的影响。[结果]由SDS-PAGE电泳分析结果可知,酶解后的电泳图谱发生了很大变化,11S的亚基含量均显著降低,且酸性亚基较碱性亚基更易被水解;粉体的扫描电镜分析结果表明,所有酶解后的样品在相同的观察条件下,其粉体结构均发生了明显改变;FTIR的结果表明,蛋白在酶法水解过程中各种构象所占的比例发生了很大变化;由疏水性和巯基含量的分析结果可知,蛋白的疏水性和巯基含量受水解度的影响较大。[结论]酶解导致11S球蛋白的构象发生了很大变化,且构象变化的程度取决于水解的程度。