热处理脱毒法培育苹果无病毒母本树研究初报

通过1981～1984年试验,先后采用热处理脱毒法,获得无病毒原母本树红星品种3株,金冠5株,国光4株,赤阳2株,为建立无病毒母树园,繁殖无病毒苗木,解决病毒病防治问题,奠定了初步基础。     

杏的脱毒及组培快繁研究

杏(Prunus arm eniaca L.)作为主要核果类果树树种之一,在世界各大洲都有栽培。随着研究的深入,研究人员发现,给杏树生产带来严重危害的是病毒,并且已应用ELISA方法检测出杏树病毒有李子苦痘病毒(PPV)、李枯叶坏死坏斑病毒(PNRSV)、李矮缩病毒(PDV)、苹果花叶病毒(ApM V)、苹果     

苹果病毒的研究现状

苹果病毒病在世界各地分布广泛,目前已报道的苹果病毒有39种,中国已鉴定明确的苹果病毒有17种。根据病毒危害特点,通常把苹果病毒分为潜隐性病毒和非潜隐性病毒,其中潜隐性病毒主要有苹果褪绿叶斑病毒(A C LSV)、苹果茎痘病毒(A SPV)、苹果茎沟病毒(A SG V),非潜隐性病毒主要有苹果锈果病毒(A SSV)、苹果花叶病毒(A PM V)。苹果病毒侵染果树,主要表现为叶片失绿、畸形、生长量减少、产量下降、品质变劣等现象,严重时树体死亡。1苹果主要病毒的特性1.1苹果褪绿叶斑病毒(A pple chlorotic leaf spotTrichovirus)曾被归为长线形病毒…     

用离体微嫁接法快速检测苹果潜隐病毒

用离体微嫁接法同时检测了苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎沟病毒和苹果茎痘病毒。由于苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒，症状是在叶部表现黄斑，试管内不易观察，病毒检出率较低，检测带毒率分别为37.5%和61.1%，在检测苹果茎痘病毒上取得成功，检出率达81.3%以上。用木本指示植物跟踪检测了带毒品种，试验证明采用离体微嫁接法检测果树病毒比用木本指示植物检测所需时间短，病毒检出率基本一致。     

两步多重RT-PCR快速检测苹果潜隐性病毒

【目的】为建立检测3种苹果潜隐性病毒更为快速准确的方法,【方法】以携带苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的成龄苹果树韧皮部为试材,根据基因库中苹果茎痘病毒(Apple stempitting virus,ASPV)的外壳蛋白基因序列,设计合成了2对特异性引物,分别与合成的苹果茎沟病毒(ASGV)引物和苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的引物组合配伍,筛选出最佳的引物对组合。对cDNA的合成所用引物和总RNA模板进行遴选和量化,对PCR过程中cDNA的用量、引物对的终浓度、退火温度等主要影响因素进行优化。【结果】结果表明,反转录引物为Oligo(dT)18、总RNA 0.1～3.0μL时,可以得到较好的cDNA;ASPV-FR与ASGV-Pch、ACLSV-Pch引物组合优于ASPV-Pch,并且筛选出4组最佳的终浓度处理组合;cDNA用量为2.0~4.0μL、退火温度为50.0~52.9℃、循环数为35时,扩增效果较好。采用优化的多重RT-PCR体系对采自陕西和山东两省的样品进行检测,并用3种病毒的单重RT-PCR体系进行验证。【结论】结果呈现高度一致性,充分印证了该多重RT-PCR体系的准确性,适用于大量样品的快速检测。     

通辽市塞外红苹果中3种苹果潜隐病毒的检测及变异分析

【目的】明确通辽地区塞外红苹果（Malus pumila ‘Saiwaihong’）中苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）、苹果茎痘病毒（ASPV）和苹果茎沟病毒（ASGV）3种苹果潜隐病毒的普遍率和遗传多样性。【方法】从通辽市开鲁县8个乡镇随机采集了96份塞外红苹果枝条,采用RT-PCR法对样品进行3种苹果潜隐病毒检测。对检测为阳性的样品进行病毒基因克隆、测序,并进行序列一致性分析和系统发育分析。【结果】检测结果表明,被检测的塞外红苹果中3种苹果潜隐病毒均有不同程度的发生,并且存在2种或3种病毒的复合侵染。基于CP基因对病毒一致性和变异情况进行分析,结果表明,来源于塞外红苹果的29个ACLSV分离物的核苷酸序列一致性为78.1%～99.9%,与其他15个已知的ACLSV分离物的一致性为69.1%～93.6%;来源于塞外红苹果的12个ASPV分离物的核苷酸序列一致性为83.6%～99.7%,与其他15个已知的ASPV分离物的一致性为75.4%～91.5%;来源于塞外红苹果的21个ASGV分离物的核苷酸序列一致性为96.4%～100.0%,与其他已知的40个ASGV分离物的一致性为89.9%～...     

山楂属植物中苹果褪绿叶斑病毒的RT-PCR检测及病毒脱除方法

【目的】建立优化的山楂属植物苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的RT-PCR检测体系,获得以山楂组培苗为试材的高效ACLSV脱除方法。【方法】基于转录组高通量测序解析的山楂属植物ACLSV基因组序列设计病毒检测引物,比较c DNA模板浓度、Taq DNA聚合酶种类及采样部位对病毒RT-PCR检测效果的影响。通过组培苗热处理和培养基中添加三氮唑核苷来脱除山楂植株中的ACLSV。【结果】基于转录组高通量测序获得的2个ACLSV山楂分离物的全基因组序列设计并筛选出适合于山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测引物。建立了优化的山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测体系。对80份山楂样品进行病毒检测,其中有18个样本检测出ACLSV,带毒率为22.5%。比较了热处理(37℃、30d)、化学处理(培养基中添加20 mg·L-1的三氮唑核苷,处理40 d)、热处理与化学处理结合方法(处理30 d)3种方法对山楂组培苗中ACLSV的脱除效率,表明热处理或热处理与化学处理结合的方法能够完全脱除山楂中的ACLSV,而单独化学处理的脱毒率不能达到100%。【结论】建立了优化的山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测体系,表明组培苗热处理是脱除山楂植株中ACLSV的有效方法。     

3种苹果潜隐病毒多重RT-PCR检测体系的建立

 研究建立了能同时检测苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus, ASGV) 、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV) 和苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus, ASPV) 的多重RT-PCR方法。以复合感染3种病毒的苹果‘望山红’组培苗为试材, 对影响多重PCR的反应条件进行了一系列的调整和优化。多重RT-PCR体系灵敏性测验显示, 最低能从RNA总量187.5 ng的样品中检测3种病毒的存在。多重RT-PCR产物的序列与报道的病毒序列有较高的同源性, 12个田间苹果样品的多重RT-PCR检测结果与单一PCR的结果一致, 初步证明了多重RT-PCR检测的准确性。     

中,西药剂在苹果褪绿叶斑病毒脱除中的应用

以鉴定明确带有褪绿叶斑病毒的新红星试管苗为试材。在培养基中分别加入南板兰根和三氮唑核苷，接入大（５ｍｍ）、小（０．５ｍｍ）两种茎尖。分化后，经一次继代，进行ＥＬＩＳＡ检测。结果南板兰根对茎尖分化略有抑制，但其浓度高低没有影响；三氮唑核苷对分化有抑制作用，浓度越高越强，因此应在低浓度下使用。两种药剂均对大茎尖的分化没有影响。经ＥＬＩＳＡ检测，南板兰根只在高浓度（４支／Ｌ）、较小茎尖时（０．５ｍｍ）．对褪绿叶斑病毒有脱除作用。而三氮唑核苷在本试验中不论浓度高低（１０ｍｇ／Ｌ、２０ｍｇ／Ｌ）和茎尖大小（０．５ｍｍ，５ｍｍ），对褪绿叶斑病毒均有很好的脱除作用。     

马铃薯组培脱毒技术

马铃薯(Solanurn tuberosurn),茄科、茄属作物,作为一种蔬菜,深受人们的喜爱。目前在我国的栽培面积大约有300多万公顷,已经成为世界上栽培最多的国家之一,但在其繁殖过程中退化问题比较严重,症状是叶片卷缩,产量降低,实验研究表明,病毒浸染是其退化的根源。因此生产无毒基础种成了在马铃薯生产过程中的关键环节,常用的马铃薯脱毒技术是茎     

苹果褪绿叶斑病毒提纯及抗血清制备技术研究

本试验比较了２种提取缓冲液和３种繁殖寄主对苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）提纯效果的影响。以昆诺藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍｑｕｉｎｏａ）和苋色藜（Ｃ．ａｍａｒａｎｔｉｃｏｌａｒ）作繁殖寄主,经蔗糖密度梯度和硫酸铯平衡密度梯度离心,获得了高度纯化的病毒样品。其Ａ２６０／Ａ２８０＝１．５７,产量约为５μｇ／ｇ叶,病毒粒体呈柔软线状。用提纯病毒免疫大白兔制备出抗该病毒的抗血清。免疫电镜观察,该抗血清对ＡＣＬＳＶ粒体具明显的修饰作用。采用双抗体夹心法（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）和Ａ蛋白酶联法（ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ）分别对１８个桃树和１７个梨树样品进行检测,阳性与阴性样品吸光值差异明显。     

果蔗脱毒种苗组培快繁技术研究

采用不同浓度的6-BA对果蔗进行了茎尖分生组织的诱导和幼芽增殖试验研究,利用不同状态的培养基对增殖芽进行了培养。结果表明,当6-BA浓度为4-5mg／L时,比较适宜于果蔗茎尖分生组织的诱导。在幼芽增殖前期．6-BA的浓度采用2-3mg／L;在将进入生根阶段时,6-BA的浓度采用0．5-1．5mg／L,有利于获得粗壮的幼苗。果蔗幼芽在增殖阶段。适宜采用液体培养基,可降低成本。     

球根鸢尾的病毒鉴定及试管脱毒成球技术

对上海地区球根鸢尾进行了病毒病害调查。经检测初步确定球根鸢尾普遍存在鸢尾重花叶病毒、鸢尾轻花叶病毒、水仙潜隐病毒３种病毒的复合侵染。对带毒种球进行茎尖组培脱毒,得出了茎尖诱导成芽、芽成球及小球生根的培养基配方。将组培苗在试管苗、成球苗、移栽苗等不同时期进行病毒检测,结果表明,小于１．０ｍｍ的茎尖诱导的幼苗可脱去上述３种病毒。     

大樱桃脱毒苗组培工厂化育苗技术

大樱桃脱毒苗生长快,结果早,果实品质好,通过组织培养进行工厂化育苗是快速繁育苗木的捷径。现将其主要技术介绍如下。1外植体的建立1.1接种时间与取材部位1.1.1接种时间在发芽前12~1月采枝条,室内催芽,1~2月接种,效果较好,污染率仅0~6.7%,启动时间及正常化又以1月份接种为最快     

几种草莓优良品种的组培快繁和脱毒苗生产技术研究

以7个草莓优良栽培品种的匍匐茎为起始材料,试验出以MS为基本培养基附加BA 0.5 mg/L诱导草莓匍匐茎芽和茎尖植株再生、增殖、生根的培养基,确立了草莓组培快繁技术方法,同时探讨低成本下草莓试管苗的快繁技术,不仅能快速培养出大量脱毒苗,而且能取得较好的社会和经济效益。     

梨树苹果茎沟病毒的脱毒技术研究

１９９３—１９９６年,采用热处理材料茎尖培养及试管苗热处理方法,对１３个梨品种及矮化砧材料进行苹果茎沟病毒脱毒试验的结果表明,二者对茎沟病毒的脱除率分别较单纯茎尖培养高５７．０％和６２．４％。脱毒苗生根率和移栽成活率分别达７０％和８０％。     

植物组培脱毒技术及其在花卉上的应用

植物组织培养技术是花卉生产的重要技术。但由于植物在自然界生长发育过程中,会在体内积累大量的植物病毒。如果在组织培养过程中,采集了含有植物病毒的植物组织,就很可能导致组织培养的失败。鉴于此,笔者在分析了植物病毒在植物组织培养中的危害的基础上,探讨了相关的脱毒技术。     

香石竹组培脱毒与快繁技术

香石竹（Dianthus caryophyllus）,即康乃馨,又名狮头石竹、麝香石竹、大花石竹、荷兰石竹等,为石竹科石竹属的一种多年生宿根草本植物,分布于欧洲温带以及中国大陆的福建、     

德国苹果病毒病分子检测与防控技术考察报告

为执行国家外国专家局出国培训项目CG2011370012苹果病毒病的分子检测与防控利用,由山东省烟台市农业科学研究院5名科技人员组成的培训团于2011年8月20日至9月9日赴德国栽培作物联邦研究中心(JKI)果树及葡萄栽培植物保护研究所进行了为期21d的技术培训,期间考察了解了德     

利用山定子绿苗移植法繁育苹果苗木

苹果常规育苗技术有两种.一种是用种子播种,育1年山定子苗,第2年春季移栽,秋季嫁接,3年培育成成苗.另一种是利用种子直播,这样虽然2年可出成苗,但是必须断根才能培育出合格苗木,否则培育出的苗木根系不好,须根少,直根发达,定植成活率低.我农场是苹果的主要产区,农场苗圃每年都繁育大量苗木,除自给外,其余外销.2000年开始采用"绿苗"移植法,繁育苹果苗木666.7 m2,2001年秋出圃10 850株,1级苗木合格率90%以上.……