零售鲜猪肉中肠球菌的鉴定与毒力基因检测

2007年～2008年间，分别从郑州市5个农贸市场鲜猪肉销售摊点采集了52份猪肉样品，经细菌分离得到30株疑似肠球菌，通过细菌形态学和培养特性的观察，并采用Vitek-32全自动细菌鉴定系统对其进行分析，最终鉴定为肠球菌，其中粪肠球菌(E. faecalis)16株、屎肠球菌(E. faecium)4株、铅黄肠球菌(E.casseliflavus)6株、鸟肠球菌(E.avium)2株、鹑鸡肠球菌(E. gallinarum )2株。药敏试验结果表明：肠球菌对呋喃妥因、万古霉素、替考拉宁和氨苄青霉素有较高的敏感性，对四环索、卡那霉素和红霉索的敏感性较低。经过对肠球菌6种公认的毒力基因cylA、gelE、efaA、ace、AS和esp的检测，发现分离株携带毒力基因不同，7号粪肠球菌携带6种，而12号屎肠球菌则全部为阴性，其它菌株则携带1～5种不等的毒力基因。     

郑州市售畜禽肉中分离菌对β-内酰胺类的耐药及毒力特征

采用微量肉汤稀释等方法分离鉴定了郑州市市售83份猪肉样和56份鸡肉样中的细菌,并研究了这些细菌对β-内酰胺类药物的耐药性及所携带的毒力基因。分别从47.0%的猪肉样和66.1%的鸡肉样中检出大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌或奇异变形杆菌。这4种分离菌对氨苄西林、头孢噻呋、头孢噻肟和头孢他啶均呈现出一定的耐药性,其中奇异变形杆菌的耐药性最强。PCR检测及序列分析结果表明:大肠杆菌主要携带TEM和CTX-M基因。毒力基因的检测结果显示:5株产CTX-M大肠杆菌携带的毒力基因种类均在5种以上。     

郑州市售畜禽肉中分离菌对β-内酰胺类的耐药及毒力特征

采用微量肉汤稀释等方法分离鉴定了郑州市市售83份猪肉样和56份鸡肉样中的细菌,并研究了这些细菌对β-内酰胺类药物的耐药性及所携带的毒力基因。分别从47.0%的猪肉样和66.1%的鸡肉样中检出大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌或奇异变形杆菌。这4种分离菌对氨苄西林、头孢噻呋、头孢噻肟和头孢他啶均呈现出一定的耐药性,其中奇异变形杆菌的耐药性最强。PCR检测及序列分析结果表明:大肠杆菌主要携带TEM和CTX-M基因。毒力基因的检测结果显示:5株产CTX-M大肠杆菌携带的毒力基因种类均在5种以上。     

一株水貂源致病性粪肠球菌分离与鉴定

对水貂肠淋巴结中分离得到的一株新细菌性病原进行分离鉴定,并作形态学和培养特征观察、生化试验、16S r RNA基因PCR鉴定、药物敏感试验、致病性试验。结果表明,该分离株可确定为粪肠球菌(Ente rococcus fae calis),其16S r RNA基因序列与Gen Bank中从猪、羊、鸡、牛、马等动物体内分离出的粪肠球菌基因同源性均在97%以上,且与猪源粪肠球菌亲缘关系最近。药物敏感试验表明,分离菌株对头孢曲松钠、万古霉素、阿莫西林、庆大霉素、多西环素、环丙沙星、左氟氧沙星、诺氟沙星、氟苯尼考、红霉素高度敏感,对其他19种抗生素具有明显抗性。致病性试验表明,分离菌株对小鼠有较强致病性。毒力基因检测结果表明,其携带cyl A、ge l E和e fa A三种毒力基因。这是从水貂中分离得到致病性粪肠球菌的首次报道,研究结果可作为水貂与肠球菌相关疾病检测、鉴别、诊断、治疗和预防依据。     

鹅粪肠球菌分离鉴定及耐药与毒力基因检测

【目的】为该送检病死鹅病的实验室诊断提供参考资料,并探明对该病原的耐药机制和致病机理进行初步探讨。【方法】用8只病死鹅的肝脏组织进行病原菌的分离鉴定、体外抑菌试验及其耐药和毒力基因检测。【结果】从上述病死鹅肝脏组织中分离到1株革兰氏阳性链状排列的球菌。同源性分析显示：该菌为粪肠球菌;该菌耐药性强,仅对头孢噻呋钠和头孢喹肟中度敏感。该菌携带卡那霉素类耐药基因aadA1、头孢菌素类耐药基因blaCMY-2、β-内酰胺类耐药基因blatem-1和磺胺类耐药基因Sul1;该菌携带毒力基因有：明胶酶基因gelE,胶原蛋白黏附素基因ace,心内膜抗原基因efaA。【结论】从病死鹅分离到1株粪肠球菌,该菌携带多重耐药基因和多个毒力因子。     

陕西扶风某生猪养殖场肠球菌分型与毒力基因检测

【目的】分析分离自陕西扶风某生猪养殖场的肠球菌的亚型及毒力基因携带情况,为保障猪肉食品安全和临床感染治疗提供依据。【方法】采用PCR方法,对从陕西省扶风县某养殖场生猪鼻腔、粪便及其养殖场环境样品中分离到的87株肠球菌进行粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）、鸡肠球菌（Enterococcus gallinarum）特异性基因的扩增,根据凝胶成像中条带位置对其进行分型,检测其ace、cylA、cylB、cylM、cylL1、efaA、esp、gelE、AS、asal和hyl等11种毒力基因的携带情况。【结果】87株肠球菌中,粪肠球菌、屎肠球菌、鸡肠球菌和其他类型肠球菌（Other Enterococcus）的检出率分别为57.5%,10.3%,4.6%和27.6%;5种毒力基因asal、gelE、cylL1、ace和esp的平均检出率分别为50.6%,27.6%,19.5%,18.4%和1.2%,在猪舍地面菌株中均有检出。粪肠球菌中的asal检出率显著高于其他4种毒力基因（P<0.05）,各毒力基因在未定型的其他亚型肠球菌中的检出率无显著差异（P>0.05）。在生猪育肥前期和后期,所有源菌株中毒力基因ace、cylL1、esp、gelE和asal的总检出率分别为93.7%和6.3%,82.3%和17.7%,100.0%和0%,75.0%和25.0%及84.1%和15.9%。【结论】扶风县某生猪养殖场中流行的肠球菌主要为粪肠球菌,其次为屎肠球菌和鸡肠球菌。不同来源菌株中毒力基因检出率不同,生猪育肥后期菌株中各毒力基因的检出率均有所降低。     

不同动物来源肠球菌的分离·鉴定及耐药性研究

[目的]为动物肠球菌感染机制的研究提供理论依据。[方法]采用常规细菌分离方法从不同动物的肛拭样品中分离肠球菌,利用基于肠球菌保守tuf基因的PCR方法对其进行鉴定,同时采用KB纸片法对分离到的肠球菌进行药敏试验。[结果]共分离到177株细菌,经鉴定确定为肠球菌。药敏试验结果表明,鸡源肠球菌对青霉素的耐药率为80%,牛源肠球菌为46.4%;猪源肠球菌对环丙沙星的耐药率为27.3%,羊源肠球菌为2.8%;鸡源肠球菌对高浓度链霉素的耐药率为62.9%,而羊源未出现耐药菌株。[结论]来源于不同动物的正常菌群肠球菌对某些抗生素表现出不同程度的耐药性。     

新疆动物源粪肠球菌的耐药性分析与耐药基因检测

为了解新疆不同动物源粪肠球菌的耐药性和耐药基因携带情况,并指导临床针对不同动物合理用药,从新疆9个县区养殖场分别采集猪、牛、羊、骆驼、鸡和鸽的粪样共564份,进行粪肠球菌的分离鉴定.对分离得到的粪肠球菌采用CLSI推荐的琼脂稀释法进行11种抗菌药物最小抑菌浓度的测定,用PCR方法进行10种耐药基因的检测.结果显示:1)...     

圈养条件下猕猴粪便细菌的分离与初步鉴定

本试验以猕猴粪便为主要试验材料,为了解圈养条件下的猕猴粪便携带的细菌情况,对某动物园中的猕猴粪便细菌进行分离培养、16SrRNA基因PCR扩增和序列分析,结果显示,从粪便中分离并鉴定出5属共9种细菌:希氏肠球菌、索氏志贺菌、弗氏大肠杆菌、大肠埃希菌、痢疾杆菌、屎肠球菌、莫海威芽孢杆菌、胼胝体棒状杆菌、谷氨酸棒状杆菌。     

体外诱导耐药及相关基因检测

[目的]了解常见致病菌产生耐药性后耐药基因和毒力基因的变化。[方法]采用微量肉汤二倍稀释法测定21种临床常见抗生素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等5种标准菌株的最小抑菌浓度，选取敏感药物进行体外诱导耐药试验，采用PCR法检测耐药基因和毒力基因。[结果]5个标准菌株均对氨基糖苷类药物敏感；大肠杆菌对四环素类药物敏感；鼠伤寒沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌和肺炎链球菌对喹诺酮类药物敏感；金黄色葡萄球菌对克林霉素敏感。与标准菌株相比，氨基糖苷类和四环素类耐药菌株中均检测出新出现的相关耐药基因；喹诺酮类耐药基因parE在多杀性巴氏杆菌的标准菌株和耐诺氟沙星菌株中检测出，gyrB基因仅在肺炎链球菌的标准菌株和耐氧氟沙星菌株中检测出。在大肠杆菌中均检测出CS31A毒力基因，此外标准菌株中检测出fimH基因，耐多西环素菌株中检测出afa基因；多杀性巴氏杆菌标准菌株未检测出毒力基因，耐药菌株中均检测出oma87和tbpA基因；而鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌仅在标准菌株中检测出毒力基因。[结论]说明氨基糖苷类抗生素更容易诱导菌株产生耐药基因，而毒力基因与耐药基因无明显的相关性。细菌获得耐药性后，其毒力...     

新疆伊犁昭苏不同动物源粪肠球菌耐药性及耐药基因检测

为掌握新疆伊犁昭苏地区不同动物源粪肠球菌的耐药性及耐药基因携带情况，在伊犁昭苏地区各散养户采集鸡的泄殖腔拭子及羊、牛的鼻拭子和肛拭子样品共1 120份，从中分离粪肠球菌，通过琼脂稀释法进行药敏试验，采用PCR方法检测其携带的相关耐药基因。结果表明，共分离鉴定出粪肠球菌263株，分离率23.5%，不同动物源粪肠球菌的耐药严重程度由高到低依次是羊源、鸡源和牛源。其中，羊源粪肠球菌对红霉素、四环素、氟苯尼考、多西环素的耐药率均大于75.0%，显著高于鸡源和牛源粪肠球菌（P<0.05）；鸡源粪肠球菌对抗菌药物的耐药率在0～50.0%之间；牛源粪肠球菌对抗菌药物耐药率均在21.1%以下；所有粪肠球菌对氨苄西林和万古霉素完全敏感。外排泵基因emeA在不同来源粪肠球菌中的检出率均高于80.0%;ermB、fexA、optrA、tet(M)和aph(3’)-Ⅲ基因在羊源粪肠球菌中的检出率高于70.0%，与耐药情况基本一致；未检出cfr、ermC和poxtA基因。不同动物源粪肠球菌对抗菌药物表现出不同程度的耐药性，且耐药基因型与耐药表型基本一致，建议当地加强动物源粪肠球菌耐药性和耐药基因的定期检测...     

三种植物精油抑菌效果的研究

[目的]研究不同浓度的新疆薰衣草、玫瑰和葡萄籽精油对7种供试菌种的抑菌效果.[方法]采用滤纸片扩散法.[结果]不同浓度的薰衣草、玫瑰和葡萄籽精油对7种供试菌种具有一定的抑菌活性.3;的薰衣草和玫瑰精油对供试菌抑菌效果最好,其中3;薰衣草精油对7种供试菌种抑菌5种菌的活性强度为:金黄色葡萄球菌＞枯草芽孢杆菌＞白色葡萄球菌＞植物乳杆菌＞大肠杆菌＞粪肠球菌＞戊糖片球菌,3;玫瑰精油为:粪肠球菌＞戊糖片球菌>金黄色葡萄球菌＞白色葡萄球菌＞植物乳杆菌＞大肠杆菌＞枯草芽孢杆菌.葡萄籽精油的抑菌效果相对其它两种精油较弱.[结论]薰衣草和玫瑰精油对上述细菌具有较强的抑菌效果,可作为天然抑菌剂.     

陕西一养猪场4种细菌的流行状况及分型研究

为了解陕西省养猪场大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肠球菌的流行状况,按照国家食品安全风险评估中心"动物源食物链中耐药性细菌污染和传递机制研究工作方案"规定,分别于生猪育肥前期(50～90日龄)和育肥后期(120～130日龄)在陕西省扶风县某养猪场采集猪粪、猪鼻拭子、猪舍地面涂抹样品和饲养员粪便等样品共150份。按照工作方案推荐的方法对4种细菌进行分离、鉴定,采用PCR技术对大肠杆菌和肠球菌进行分型,PCR结合DNA测序技术对金黄色葡萄球菌进行葡萄球菌蛋白A(Staphylococcus Protein A;SPA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus;MRSA)分型,采用血清凝集方法对沙门氏菌进行血清分型。结果表明,育肥前期采集的75份样品中,肠球菌阳性样品检出率(89.3%)最高,其次是大肠杆菌(69.3%)、沙门氏菌(38.7%)和金黄色葡萄球菌(12.0%)阳性样品。育肥后期75份样品中,肠球菌阳性样品检出率仍为最高(73.3%),其次分别为大肠杆菌(64.0%)、沙门氏菌(6.67%)和金黄色葡萄球菌(1.33%)阳性样品。肠黏附性大肠杆菌(Enteroadhersive Escherichia coli, EAEC)在检出的大肠杆菌中最为流行(40.0%),肠球菌则以粪肠球菌(Enterococcus faecalis)最为常见(58.6%)。检出的沙门氏菌均为鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)。1株金黄色葡萄球菌为T441型MRSA,2株金黄色葡萄球菌为T701型,T189型和T899型各1株,剩余2株未分出型。因此,该养猪场4种细菌污染严重,细菌型别相对单一,且在生猪育肥前期和后期均有检出,需要及时加以控制和防范。     

致羔羊脑炎粪肠球菌asa1、ace和esp基因的克隆与原核表达

<正>肠球菌是人和动物肠道内仅次于大肠杆菌的常在菌,通常不引起发病,当抗生素大量使用或宿主免疫力低下时,宿主与肠球菌之间的共生状态失衡,肠球菌离开正常寄居部位进入其他器官,在毒力因子的作用下,引起感染性疾病的发生发展[1-2]。肠球菌引起的感染已越来越普遍,威胁着人类健康,也影响着畜牧业的发展[3-5]。目前发现的肠球菌毒力因子基因有10余种,在众多毒力因子基因中,有的基因控制产生特定的毒素,有的基因控制产生特定的蛋白质,这些     

犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

采用多重PCR方法检测南京部分地区分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI).对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因.同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定.在分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中,具有LEE和/或HPI毒力岛的菌株33株,占30%(33/110).LEE毒力岛基因检测结果为9.1%(10/110)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性.HPI毒力岛基因检测结果为25.5%(28/110)的菌株irp2和fyuA基因扩增阳性.0.9%(1/110)的菌株irp2阳性.5.5%(6/110)的菌株irp2、fyuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性.在33个LEE和/或HPI毒力岛阳性分离株中,O78和O36血清型菌株分别占定型菌株的34.6%(9/26)和27%(7/26).9.1%的犊牛腹泻大肠杆菌携带LEE,25.5%的菌株携带耶尔森菌HPI,O78和O36为牛源携带LEE和/或HPI毒力岛大肠杆菌常见血清型.     

tlr4基因对羊肠道细菌影响的研究

【目的】通过分析tlr4基因对羊肠道主要细菌数量的影响,评价转基因羊tlr4的生物安全性。【方法】收集15只转基因羊tlr4和15只非转基因羊的粪便样本,采用传统平板培养法和实时荧光定量PCR法(quantitative Real-Time PCR,qPCR)分析转基因羊tlr4和非转基因羊肠道中主要细菌数量的变化。【结果】传统培养法的结果表明,转tlr4基因对羊肠道中大肠杆菌(E.coli)、沙门氏菌(Salmonella)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、粪肠球菌(Enterococcus)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus)的生长均有一定程度的抑制作用,在数量上转基因羊tlr4和非转基因羊的差异不显著(P0.05);qPCR法的结果表明,转tlr4基因对羊肠道中大肠杆菌、双歧杆菌、拟杆菌(Bacteroides)和粪肠球菌的数量亦无显著性影响(P0.05)。【结论】显示抗病基因tlr4处理对羊肠道主要细菌基本无显著性影响。     

临床分离粪肠球菌的毒力基因和耐药基因检测及其耐药性研究

分离女性阴道中的粪肠球菌（Enterococcus faecalis）,通过PCR和Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法探究其毒力基因、耐药基因及其耐药表型,为揭示粪肠球菌感染机制及其临床治疗提供科学依据。结果表明：从157个样品中共分离出22株粪肠球菌;在这些粪肠球菌中：毒力基因检出率为efa A (100%)、asa1 (90.9%)、cyl A (90.9%)、fsr (90.9%)、cpd (90.9%)、acm (86.4%)、gel E (81.8%)、esp (68.2%)、ace (54.5%)和hyl (0);耐药基因的检出率为van A (0)、van B (0)、van C (18.2%)、aac (40.9%)、ant(6)-1 (59.1%)、erm B (68.2%)、mef A(54.5%)、tet M (72.2%)和tem (81.8%);药敏结果显示粪肠球菌对万古霉素、呋喃妥因、利奈唑胺、替考拉宁敏感;对其他抗菌药物具不同程度的耐药。由此得出,阴道易受粪肠球菌感染,体外实验支持糖肽类抗菌药物可用于粪肠球菌感染的临床治疗。     

西藏牦牛肠出血性大肠杆菌HPI基因调查及耐药性分析

为明确西藏牦牛源肠出血大肠杆菌强毒力岛(HPI)基因以及ESBLs耐药基因携带情况,复壮笔者所在实验室保存的14株牦牛源肠出血性大肠杆菌,采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选,镜检确定复壮成功后,应用PCR方法检测HPI携带情况,并对HPI相关毒力基因进行克隆与序列分析,测序结果同时采用K-B纸片法对被检菌株进行药...     

广西人工养殖牛蛙源嗜水气单胞菌的分离鉴定及致病力分析

【目的】确定引起广西人工养殖牛蛙(Rana catesbeiana)发病死亡的病原菌,了解其致病性、组织病理学特征、耐药性及耐药基因的携带情况,为该病的临床诊断及合理预防提供科学依据。【方法】采用常规细菌分离纯化方法从患病牛蛙的病灶组织中分离优势菌株,通过观察分离菌株的形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析等对病原菌进行鉴定,以纸片扩散法测定其耐药性,通过PCR扩增分析其耐药基因和毒力基因携带情况,通过人工回归感染试验确定病原菌的致病性,并通过组织病理学探究牛蛙感染菌株后的组织特性。【结果】从患病牛蛙腿部分离得到1株优势菌株(编号NFAH-5),综合其形态学、生理生化特性、溶血特性及分子鉴定结果,确定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。菌株NFAH-5对多西环素、多粘菌素B和庆大霉素等6种抗生素敏感,对头孢拉定、恩诺沙星和阿莫西林等12种抗生素已产生耐药性;经耐药基因PCR检测,发现该分离菌携带Ant(3″)-I、Intl1和parC等9种耐药基因,与耐药表型基本一致。毒力基因PCR检测结果显示,菌株NFAH-5携带Ser、aer、Lip、exu、...     

PCR法检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因

[目的]建立一种快速准确检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。[方法]将金黄色葡萄球菌模拟污染的水增菌后提取菌体DNA,以沙门氏菌、大肠杆菌DNA和空白作对照,用PCR法扩增金黄色葡萄球菌肠毒素A基因。[结果]金黄色葡萄球菌DNA的检测结果呈阳性,检测底限达100 cfu/L,而大肠杆菌和沙门氏菌及空白对照均未出现特异性片段,整个检测过程只需要24 h。[结论]试验建立的PCR方法可检测水及类似食品中的金黄色葡萄球菌SEA基因,并具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作的特点。