兴安杜鹃基本培养基和外殖体选择的初步研究

[目的]研究兴安杜鹃苗木快繁技术,为兴安杜鹃大规模园林绿化应用提供技术保障。[方法]以兴安杜鹃的叶芽、花芽、叶片、茎尖、茎段为外植体,以MS、WPM、Read、B5为培养基,采用不同采集时间、不同消毒方法,通过接种、培养、观察和对比分析,对兴安杜鹃的快速繁殖进行研究。[结果]兴安杜鹃组织培养最佳基本培养基为WPM培养基;最佳外植体为1.5～2.0 cm茎尖和茎段;最佳灭菌方法为70%乙醇30 s结合0.1%HgCl_2 10 min;最佳取材时间为3月中旬至5月中旬。[结论]该研究可为绿化苗木生产、城镇绿化及乡村振兴生态宜居目标的实现提供支撑。     

HPLC同时测定锦绣杜鹃四种黄酮类成分的含量

在建立高效液相色谱法(HPLC)同时,测定锦绣杜鹃中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素4种黄酮类化合物的含量。采用Waters C18(4.6mm×250mm,5μm)反相色谱柱,甲醇(B)和水(A)为流动相,梯度洗脱程序为:0～24min,31%～42%B;24～30min,42%～50%B;30～35min,50%～60%B;35～40min,60%B;检测波长356nm,流速为0.7mL.min-1,柱温30℃。结果显示锦绣杜鹃中4种黄酮类化合物达到了较好的分离,其中平均回收率分别为97.73%、101.71%、98.70%、104.28%;RSD分别为2.25%、1.31%、1.82%、2.81%(n=5),说明该分析方法简便、准确、重现性好,适合于锦绣杜鹃中黄酮类化合物含量的测定,其中锦绣杜鹃中黄酮类成分在4月份达到最大值。     

PEG胁迫对兴安杜鹃和迎红杜鹃种子萌发能力的影响

以兴安杜鹃和迎红杜鹃种子为试材,设置不同浓度(0、5%、10%、15%、20%、25%)的聚乙二醇(PEG-6000)溶液模拟干旱胁迫,研究干旱胁迫对杜鹃种子发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数及早期幼苗生长量的影响,并对种子萌发率与PEG胁迫浓度间进行了回归分析。结果表明:(1)随着干旱胁迫程度的增加,2种杜鹃花种子的发芽启动时间推迟、发芽持续时间延长、萌发高峰期日发芽率显著降低;(2)随PEG胁迫浓度的增加,兴安杜鹃种子的发芽率、发芽指数、活力指数及早期幼苗生长量均呈先上升后下降的趋势,而迎红杜鹃相关测定指标则表现出明显下降趋势;PEG胁迫浓度≥15%时2种杜鹃花种子的各测定指标均显著下降,且处理间差异显著;25%PEG胁迫下2种杜鹃花种子均未萌发,即完全受到抑制;(3)发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数及早期幼苗生长量均与干旱胁迫程度呈极显著负相关,各测定指标间呈极显著正相关;(4)回归分析结果表明,兴安杜鹃种子在PEG模拟干旱胁迫下的萌发临界值和极限值PEG浓度分别为19.09%、22.11%,对应水势为-0.53、-0.69 MPa;迎红杜鹃种子的萌发临界值和极限值PEG浓度分别为17.56%、21.37%,对应水势为-0.46、-0.65 MPa。这表明,兴安杜鹃种子可抵御轻度干旱胁迫(5%~10%PEG),迎红杜鹃对干旱胁迫较为敏感。     

兴安杜鹃总黄酮质量分数及提取物稳定性

采用超声波提取法浸提兴安杜鹃(Rhodendron dauricum L.)叶和茎样品,紫外—可见分光光度法测定兴安杜鹃总黄酮质量分数。以总黄酮降解率作为评价指标,考察温度和光照等因素对兴安杜鹃叶和茎提取物稳定性的影响。以质量分数为60%的乙醇水溶液为浸提液,超声波提取兴安杜鹃叶和茎总黄酮的质量分数分别为48.0mg.g-1和40.2mg.g-1。随着温度的升高,兴安杜鹃提取物中的总黄酮降解率增大,稳定性降低,总黄酮降解率随放置时间的变化具有一级反应特征。随着光照时间的增加,兴安杜鹃提取物稳定性降低,总黄酮降解率随放置时间的变化具有零级反应特征。兴安杜鹃叶提取物的稳定性与茎相比无显著差异。     

五味子木脂素舒张大鼠离体气管平滑肌的功能研究

【目的】探讨五味子木脂素6种单体成分对大鼠离体气管平滑肌张力的影响及其舒张气管平滑肌的作用机制。【方法】采用离体气管灌流法,观测终浓度为10^-7~10^-3 mol/L的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲和体积分数1‰二甲基亚砜（DMSO,对照）对静息状态及乙酰胆碱（ACh）预收缩状态下大鼠离体气管环张力的影响。用L型Ca²⁺通道阻滞剂维拉帕米（10^-5 mol/L）、β-肾上腺素受体阻断剂普萘洛尔（10^-5 mol/L）和体积分数1‰ DMSO（对照）预孵育大鼠离体气管环15 min,然后依次加入浓度为10^-5~10^-3 mol/L 的五味子醇甲,观测维拉帕米和普萘洛尔对五味子醇甲舒张气管作用的影响。【结果】与对照比较,不同浓度的6种五味子木脂素单体对静息状态下的气管环张力均无显著影响（P>0.05）。五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素对ACh预收缩的气管环张力相较对照具有显著抑制作用,且呈剂量依赖性（P<0.001）,最大抑制率分别为（92.12±3.28）%,（78.23±10.20）%,（62.95±12.93）%及（46.58±4.92）%;而五味子酯甲和五味子丙素对ACh 预收缩气管环张力无明显影响（P>0.05）。与DMSO对照组相比,五味子醇甲对大鼠离体气管环的舒张作用可被维拉帕米明显减弱（P<0.001）,最大抑制率降低了（26.24±8.42）%,但普萘洛尔对其作用无显著影响（P>0.05）。【结论】五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素可呈剂量依赖性地舒张大鼠离体气管平滑肌,其中五味子醇甲的作用机制可能与阻断L型Ca²⁺通道有关。     

应用均匀设计法优化两种野生药用及观赏杜鹃花的高效快繁体系

[目的]筛选迎红杜鹃和兴安杜鹃的最佳生长培养基．建立其高效快繁体系。[方法]以迎红杜鹃和兴安杜鹃的嫩茎段为外植体,以改良MS为基本培养基,附加不同浓度的IAA、IBA、NAA和GA3,应用均匀设计法,选用U10（10^4）均匀表,考察了4种激素不同浓度配比对2种杜鹃嫩茎腋芽生长伸长及茎段生根诱导率的影响,并以2种杜鹃再生植株的茎节为材料,以节培法进行快繁,建立高效快繁体系。[结果]最适合迎红杜鹃嫩茎腋芽生长伸长和嫩茎段生根的培养基为：改良MS＋IAA0．10mg／L＋GA,1．20mg／L,再生率97％;最适合兴安杜鹃生长的培养基为：改良MS＋IBA0．10mg／L＋GA3 1．20mg／L,再生率98％。对2种杜鹃再生植株的快繁表明,在35d的一个培养周期内,增殖倍数达60以上。[结论]成功建立了迎红杜鹃和兴安杜鹃的高效离体快繁体系。     

HPLC法测定黄蜀葵花中金丝桃苷及槲皮素含量

为建立黄蜀葵花中主要活性成分金丝桃苷及槲皮素含量的高效液相色谱(HPLC)测定方法,以金丝桃苷和槲皮素标准品为对照,色谱柱采用COSMOSIL5C18-AR-Ⅱ(4.6mm×250mm,5μm),流动相为0.4%磷酸溶液、乙腈,柱温为35℃,波长为360nm,流速为1.0mL·min-1,梯度洗脱分离。结果表明:金丝桃苷回归方程为y=351.5x+202.1(r=0.999 5),金丝桃苷浓度为5.296~52.96μg·mL-1时呈良好的线性关系;槲皮素回归方程为y=364.9x+23.84(r=0.999 6),槲皮素浓度为5.272~52.72μg·mL-1时呈良好的线性关系。该方法操作简便、重复性好、精密度高,可作为黄蜀葵花中金丝桃苷和槲皮素的质量控制方法。     

吴茱萸中7种活性成分的含量测定

[目的]采用高效液相色谱及紫外检测法建立同时测定吴茱萸药材中辛弗林、绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱7种活性成分含量的方法。[方法]采用浓度为50%的甲醇-水溶液超声制备样品。以Hypersil C18（5μm,250 mm×4.6 mm）为色谱柱,以乙腈-乙酸（V/V,1%）水溶液为流动相进行梯度洗脱。在254 nm波长下检测芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量;在270 nm波长下检测辛弗林和吴茱萸碱的含量;在340 nm波长下检测吴茱萸次碱和绿原酸的含量。[结果]辛弗林、绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱各成分分离效果良好;其平均回收率均接近100%,RSD均小于3.1%。[结论]该方法适用于同时测定吴茱萸药材中辛弗林、绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,为吴茱萸药材的质量评价提供了更好的技术手段。     

八种杜鹃种子形态的初步研究

利用扫描电子显微镜对百里杜鹃国家森林公园采集的8种杜鹃(Rhododendron L.)种子的形态结构进行了观察,分别对杜鹃种子的主要形态指标(形状、大小、翅和肋)进行了比较与描述,为杜鹃花属植物的分类学研究和种子鉴别提供了依据。     

HPLC法测定不同产地贯叶连翘中黄酮类成分的含量

采用HPLC法测定不同产地贯叶连翘中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量。结果表明,芦丁的线性检测范围为0．0529—0．5290μg（r=0．9997）,平均回收率为99．4％,RSD=1．471％;金丝桃苷的线性检测范围为0．0493～0．4930μg（r=0．9996）,平均回收率为100．2％,RSD=1．407％;槲皮素的线性检测范围为0．00166～0．05300μg（r=0．9998）,平均回收率为98．5％,RSD=1．295％。     

百里杜鹃杜鹃属13种植物叶片解剖结构的生态适应性

贵州百里杜鹃国家森林公园是现已发现的世界上最大且连续分布的天然野生杜鹃花群落。依托生物显微制片技术、数理统计分析方法,研究了采集自百里杜鹃林区的13种杜鹃属植物的叶片解剖特征及其生态适应性,并对其解剖结构特征进行了聚类分析及因子分析。结果表明：①叶片不同解剖性状在种、种群间的变化不同步,其中叶片的海绵组织厚度、叶片厚度、中脉厚度、栅海厚度比以及第1层上表皮细胞长宽比几项解剖特征变异幅度〉50％,显示这些性状更易受环境饰变,是生态适应性状;而气孔密度、气孔长宽比等性状差异小,属相对稳定的系统演替性状。②马银花、光柱迷人杜鹃等具有发达的机械组织,显示对干燥环境的适应;而迷人杜鹃、银叶杜鹃等海绵组织发达,显示对中高山凉湿环境的适应。③叶片解剖结构在种间、种群间有不同程度差异,这是它们适应各自生境的结果。映山红种内差异较大,反映出它对环境变化有较强的响应能力。④主因子聚类分析结果将研究的13种杜鹃属植物分为3类,分类与杜鹃属在系统学上的分类一致。     

杜鹃花期早晚种配置延长观赏期的研究

为延长贵州省百里杜鹃国家森林公园的花期,选择观赏价值高的不同花期高山杜鹃进行了配置和移栽适应性研究,多点对比试验结果表明,糙叶杜鹃(Rhododendron scabrifolium Franch)、锈叶杜鹃(R.siderophyllum Franch)2个早花杜鹃种移栽成活率分别为41.4%、76.8%;长蕊杜鹃(R.stamineum Franch.var.stamineum)、九龙山杜鹃(R.jiulongshanense Xiang Chen et Jiayong Huang)、百合花杜鹃(R.liliiflorumLevl)、羊踯躅[R.molle(Blum)G.Don]、大白杜鹃(R.decorum Franch)、桃叶杜鹃(R.annae Franch)6个晚花杜鹃种的移栽成活率依次为100%、100%、100%、98.0%、95.7%、90.9%。早晚花配置是延长"百里杜鹃"景区花期的实用技术,通过合理配置及成功移栽,可以将"百里杜鹃"景区花期提前10～15 d或延长约70d。在移栽技术上,土壤肥力对杜鹃的成活和初期生长影响不明显,关键是湿度。     

大叶白麻中芦丁、金丝桃苷和槲皮素含量的测定

建立了同时测定大叶白麻中芦丁、金丝桃苷、槲皮素含量的HPLC分析方法。色谱条件为,色谱柱:KromasilC18(5μm,4.6mm×250mm),流动相∶甲醇-0.04%磷酸水线性梯度洗脱,柱温:30℃,流速:1.0mL/min,检测波长:360nm。结果表明,芦丁、金丝桃苷和槲皮素分别在2.7～13.3μg、0.3～2.3μg、2.4～14.4μg范围内,进样量与色谱峰积分面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9996、0.9999、0.9999,平均回收率(n=6)分别为100.45%、100.26%、98.92%。本法可同时测定芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量,且稳定可靠,重复性好,可作为大叶白麻有效成分分析的有效手段。     

基于GUS基因瞬时表达优化云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)遗传转化方法

本研究以云南杜鹃无菌叶片和愈伤组织为受体材料,运用正交试验设计,通过组织染色分析法研究了预培养时间、菌液密度、侵染时间、共培养时间对农杆菌介导的GUS基因瞬时表达的影响。结果表明：叶片是云南杜鹃较理想的遗传转化受体材料,无菌叶片预培养0 d,菌液OD600值0.5,侵染时间40 min,共培养5 d,GUS基因瞬时表达率最高,平均表达率为70%。试验结果为云南杜鹃遗传转化研究提供了快速可靠的依据。     

金丝桃素注射剂的制备及其含量的测定

采用高效液相色谱法(HPLC法)测定所制备的金丝桃注射液中金丝桃素的含量,测定时采用Chrom-sphere C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-1%磷酸盐缓冲液(v/v/v=170∶10∶10),流速为1 mL/min,检测波长588 nm.结果表明:线性范围为0.04~0.20μg,金丝桃素的含量是0.21%(相当于每毫升注射液含金丝桃素0.009 3 mg),RSD为1.07%.HPLC法灵敏、准确、重现性好,可用于金丝桃素注射液含量的测定.     

采煤塌陷前后植物群落对比研究——以百里杜鹃化育煤矿为例

采用典型样地调查法对百里杜鹃化育煤矿非塌陷区和塌陷区的典型植物群落进行了调查,从物种组成、区系成分、生活型、重要值及物种多样性等方面进行了对比分析.结果表明,矿区植物群落的科属组成较为简单;森林植被具有北温带性质;非塌陷区优势种是杜鹃和茅栗,在塌陷区内优势种只有杜鹃;非塌陷区相较于塌陷区更稳定;非塌陷区植物群落的物种丰富度、多样性指数、生态优势度普遍高于塌陷区植物群落.总体反映出采煤塌陷对植物群落的生长发育存在负面影响.     

2种罗布麻叶中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷含量比较研究

【目的】建立并测定罗布麻叶中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷含量的HPLC方法,并比较2种罗布麻叶中3种黄酮成分的含量差异。为2种罗布麻质量控制提供方法和依据。【方法】采用Symmetry Shield(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,在35℃条件下以乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,检测波长为360 nm,进样量为10μL。【结果】芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷的线性范围分别为0.251 1~1.255 4μg、0.026 6~0.265 9μg、0.235 6~1.178 0μg,相关系数R分别为0.999 8、0.999 9、0.999 9;平均加标回收率分别为103.6%、102.1%、104.4%,RSD均小于3.8%。大叶白麻中异槲皮苷含量最高,罗布红麻中芦丁含量最高,并且仅有罗布红麻中检测到了金丝桃苷。【结论】HPLC测定方法可用于罗布麻叶中3种黄酮成分的含量测定,2种罗布麻叶中3种黄酮成分含量差异有一定规律,罗布红麻中异槲皮苷含量略高于大叶白麻,芦丁含量则至少是大叶白麻的13倍,金丝桃苷含量仅为0.05%,且在大叶白麻中未检测到金丝桃苷,研究结果可为2种罗布麻质量控制提供方法和依据。     

东祁连山杜鹃属植物光合作用特点的研究

对东祁连山杜鹃灌丛中杜鹃属植物光合作用特点的研究结果表明:4种杜鹃的净光合速率较低,头花杜鹃、百里香杜鹃、烈香杜鹃和陇蜀杜鹃在7月分别为5.06、6.13、7.23、7.44 m mol CO2 m-2穝-1,在10月分别为-0.12、0.032、-0.063、1.218 m mol CO2 m-2穝-1。前3种杜鹃的净光合速率与光通量密度存在正相关关系(r分别为0.936 4、0.850 1、0.817 8),陇蜀杜鹃则相关性不显著。头花杜鹃和百里香杜鹃的净光合速率在光通量密度达到1 000 m mol m-2穝-1时开始下降,而烈香杜鹃和陇蜀杜鹃则在达到1 400 m mol m-2穝-1时开始下降。4种杜鹃在13 : 00～14 : 00发生光合午休现象。     

正交试验超声提取满山红中黄酮类物质的工艺研究

[目的]优选满山红中黄酮提取的最佳工艺.[方法]采用正交试验法对满山红中黄酮的提取工艺进行优选,以原料粒度、料液比、提取功率、提取温度等为考察因素,采用液相方法测定4个黄酮类活性成分(金丝桃苷、槲皮素、山奈酚和杜鹃素)的总合量.[结果]最佳工艺为粒度为65目的原料在50℃的80％乙醇(料液比1∶25)中浸渍2h,超声功率80 W提取30 min.[结论]该工艺合理,有效成分提取效率高.     

HPLC 同时测定菟丝子不同炮制品中 5 种主要活性成分含量

目的建立HPLC 同时测定菟丝子不同炮制品中绿原酸、金丝桃苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量。方 法色谱条件：Kromasil ODS-1 色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,甲醇-0.4%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为 1 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长为360 nm。结果5 种活性成分均达到基线分离,线性关系良好（r≥0.999 7）;平均 加样回收率为98.4%～100.7%,RSD≤2.4%（n=6）。结论该方法灵敏、可靠,可用于菟丝子饮片的质量评价。