内蒙古地区羊源大肠杆菌耐药性研究

为确定内蒙古地区羊源大肠杆菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,本研究采用微量稀释法测定了内蒙古地区108株羊源大肠杆菌对13种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示,分离菌株对阿莫西林、头孢噻吩、磺胺甲唑、黏菌素的耐药率最高,均达100.0%,对阿莫西林/克拉维酸、四环素、环丙沙星的耐药率在50%~80%之间,对头孢噻肟、美洛培南、新霉素的耐药率均低于10%,较为敏感。108株羊源大肠杆菌中耐7种以上药物的菌株占94.4%,其中15.6%菌株对13种抗菌药物耐药,只有1株菌对所有抗菌药物敏感。采用PCR方法对羊源大肠杆菌分离株所携带的6种相关耐药基因进行检测,结果显示,6种耐药基因中的4种耐药基因bla_TEM、proP-2、sul-Ⅰ、ampG检出率超过50%,耐药基因aph（3'）-Ⅰ携带率达40%,只有耐药基因aac（3）-Ⅱ检出率仅为5.5%。由此可见,内蒙古地区羊源大肠杆菌对13种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况,羊源大肠杆菌分离株携带aph（3'）-Ⅰ、sul-Ⅰ、ampG、bla_TEM、proP-2、aac（3）-Ⅱ耐药基因。     

河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌分离鉴定、毒力因子及耐药性检测

[目的]为了分析河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌携带毒力基因和耐药性情况,[方法]2020—2021年在河西走廊地区采集患腹泻病犊牛的粪便、肛拭子及肝脏等病料组织279份,采用人工感染试验动物、PCR方法和K-B药敏纸片法分别检测犊牛腹泻性大肠杆菌致病性、毒力因子和耐药性。[结果]结果表明,分离得到了126株大肠杆菌,其中79株犊牛腹泻性大肠杆菌能引起小鼠死亡;分离的79株致病性大肠杆菌的毒力基因crl、irp2、fimH、papC、K88、K99、stx1、stx2检测率在40.5%～100%之间,其他毒力基因检测率在15.2%～34.2%之间;分离的79株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等8种药物的耐药率在49.4%～96.2%之间,对其他药物的耐药率在5.1%～32.9%之间。[结论]从河西走廊地区患腹泻病犊牛病料组织中分离得到79株致病性大肠杆菌,这些菌株携带多种毒力基因,对临床中常用的抗菌药物产生了耐药性。     

新疆犊牛源大肠杆菌系统进化及其耐药特性

本研究利用三重PCR的方法对新疆犊牛源大肠杆菌临床分离株进行系统进化分群,对不同进化群的菌株进行致病性和16种药物的敏感性试验。结果:粪便样品中分离出的127株大肠杆菌中非致病群A(37.8%)和高致病群D(30.7%)菌株分布相对较多,其次是低致病群B1(18.1%)和高致病群B2(13.4%);其中腹泻犊牛源(B2+D)群大肠杆菌明显多于健康犊牛。药敏结果显示,犊牛源大肠杆菌多重耐药表型的菌株占85.0%,主要分布在3耐~7耐,其中腹泻犊牛携带的大肠杆菌耐药率高于健康犊牛,D群大肠杆菌耐药率最高,B2群耐药率最低,A群和B1群居中。结论:新疆犊牛源大肠杆菌耐药性比较严重,应受到重视。     

西藏林芝地区牦牛源大肠杆菌的耐药性分析

本研究旨在了解西藏林芝地区牦牛源大肠杆菌的耐药情况,为有效控制牦牛大肠杆菌感染和指导临床合理使用抗菌药物提供依据。从565份牦牛粪便样品中分离到488株大肠杆菌,通过纸片扩散法对菌株进行药物敏感性分析,采用PCR检测菌株所携带的毒力基因、耐药基因以及筛查含有β-内酰胺酶基因的大肠杆菌菌株。结果显示,在488株大肠杆菌分离菌株中,31%(152/488)呈现多重耐药;毒力基因omp A、etr A的检出率较高,分别为30.2%、23.1%;耐药基因bla CTX-M、bla TEM的检出率分别达到27.6%、14.4%;此外,在产β-内酰胺酶的菌株中未发现SHV型。结果表明,西藏林芝地区牦牛大肠杆菌感染较为严重,菌株分离率高达86.4%,但产ESBLs的菌株检出率较低,且菌株耐药性严重,更呈现出多重耐药性。     

犊牛腹泻源大肠杆菌耐药情况及HPI相关基因的检测

本研究旨在明确犊牛腹泻源性大肠杆菌的耐药情况、强毒力岛(HPI)标志基因及相关基因的携带情况,以及大肠杆菌分离株与HPI携带的关系。采集犊牛病理性腹泻样本158份,采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选,镜检符合大肠杆菌形态的进行VITEK 2 Compact生化鉴定和PCR鉴定,采用K-B纸片法对大肠杆菌分离株进行药敏试验,应用PCR方法进行分离株HPI相关基因携带情况的检测。结果显示,共分离得到75株大肠杆菌,分离株对阿莫西林、哌拉西林、氨苄西林、头孢唑啉、氟苯尼考、恩诺沙星、四环素的耐药率均90%,对头孢氨苄、头孢拉定、头孢曲松、环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星的耐药率均≥60.00%,对阿米卡星较敏感,耐药率为9.33%;75株大肠杆菌全部耐3种以上药物,多重耐药(≥10)的菌株占85.33%,耐药谱集中在耐14～17种药物,5株对19种药物全部耐药。HPI标志基因irp2的阳性率为100%,其他相关基因fyuA、irp3、irp5、irp8和ytbA的检出率在66.00%以上。综上所述,宁夏地区犊牛腹泻源性大肠杆菌耐药普遍,多重耐药现象严重。     

北方不同地区犊牛腹泻大肠杆菌耐药性和耐药基因携带率的检测分析

为了解中国北方地区部分规模化奶牛场犊牛腹泻大肠杆菌耐药情况及相关耐药基因携带情况,试验采用K-B法和PCR方法检测了部分规模化奶牛场分离的34株犊牛腹泻大肠杆菌的耐药率和相关耐药基因。结果表明:34株犊牛腹泻大肠杆菌对强力霉素的耐药率达到了100%,耐药率在80%以上的有4种,分别为氨苄西林、链霉素、强力霉素、复方新诺明,其他菌株耐药率普遍高于50%,且多重耐药严重。此外,试验共检测了13种耐药基因,其中gyr A、gyr B、par C、aph(3')-Ⅱ、blaTEM 5种基因的检出率分别为74.07%、81.48%、66.67%、72.72%、61.29%,其他耐药基因检出率相对较低,但均高于20.00%。说明中国北方地区部分规模化奶牛场犊牛腹泻大肠杆菌存在多重耐药现象,且高耐药率的产生可能与携带的耐药基因存在一定关系。     

犊牛腹泻源大肠杆菌耐药情况及HPI相关基因的检测

本研究旨在明确犊牛腹泻源性大肠杆菌的耐药情况、强毒力岛（HPI）标志基因及相关基因的携带情况，以及大肠杆菌分离株与HPI携带的关系。采集犊牛病理性腹泻样本158份，采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选，镜检符合大肠杆菌形态的进行VITEK 2 Compact生化鉴定和PCR鉴定，采用K-B纸片法对大肠杆菌分离株进行药敏试验，应用PCR方法进行分离株HPI相关基因携带情况的检测。结果显示，共分离得到75株大肠杆菌，分离株对阿莫西林、哌拉西林、氨苄西林、头孢唑啉、氟苯尼考、恩诺沙星、四环素的耐药率均>90%，对头孢氨苄、头孢拉定、头孢曲松、环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星的耐药率均≥ 60.00%，对阿米卡星较敏感，耐药率为9.33%；75株大肠杆菌全部耐3种以上药物，多重耐药（≥ 10）的菌株占85.33%，耐药谱集中在耐14~17种药物，5株对19种药物全部耐药。HPI标志基因irp2的阳性率为100%，其他相关基因fyuA、irp3、irp5、irp8和ytbA的检出率在66.00%以上。综上所述，宁夏地区犊牛腹泻源性大肠杆菌耐药普遍，多重耐药现象严重。     

大肠杆菌耐药性及氟苯尼考耐药基因floR的研究

本实验对某地养殖场猪源和鸡源大肠杆菌的耐药性及氟苯尼考耐药基因flo R进行分析,旨在了解我国大肠杆菌的耐药现状,以降低对养殖业的危害,减少菌株耐药性的传播,为兽医临床用药及兽药管理提供科学依据,为新型抗菌药物的研制奠定理论基础。采用国标法分离鉴定大肠杆菌,肉汤微量稀释法进行药敏实验,PCR法检测氟苯尼考flo R基因,膜过滤法进行转化接合实验。结果表明:共分离大肠杆菌293株,分离率为73.3%,其中猪源157株,鸡源136株;大肠杆菌对磺胺类、四环素类和氨基糖苷类药物的耐药性相对严重,对氯霉素类、氟喹诺酮类和β-内酰胺类药物相对敏感;与欧盟EUCAST标准相比,该地区大肠杆菌的MIC分布出现明显右移现象;80%以上的大肠杆菌均为多重耐药菌株,以8重和9重耐药菌株为主;氟苯尼考耐药基因flo R携带率为61.2%,flo R基因可以在菌株间相互转移。样品采集地区养殖场大肠杆菌污染严重,耐药种类逐渐增多,多重耐药现象严重,质粒介导的耐药基因可以在菌株间相互转移。     

30日龄犊牛粪源大肠杆菌耐药性调查

旨在调查新疆某牛场犊牛粪源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况。对该牛场92头30日龄犊牛进行直肠粪样采集,采用常规方法进行大肠杆菌的分离鉴定,利用纸片扩散法对分离菌株进行药物敏感性试验。结果表明,从92份犊牛粪便样本中共分离到92株大肠杆菌,分离率为100%;分离菌株对阿米卡星(93.75%)、恩诺沙星(64.50%)、诺氟沙星(59.30%)、庆大霉素(57.14%)4种抗菌药物的耐药性较强,耐药率均超过50%;对阿莫西林/克拉维酸钾(36.30%)、阿莫西林(26.00%)、环丙沙星(13.60%)3种抗菌药物的耐药率也相对较高;对氨苄西林的敏感性最高,耐药率仅为3.03%。综上提示,该牛场犊牛粪源大肠杆菌对不同抗菌药物产生了一定程度的耐药性,建议该牛场应在药物敏感性试验结果的指导下合理选择抗菌药物。     

牛冠状病毒、牛轮状病毒和致病性大肠杆菌混合感染致犊牛腹泻的研究

为了明确新疆石河子某规模化奶牛场犊牛腹泻病死率较高的原因。本研究对腹泻犊牛的粪样及病死犊牛肠道内容物进行病原检测,并对分离菌株进行毒力基因检测、耐药基因检测、动物致病性试验及药敏试验。最终明确病因主要由牛冠状病毒(BCoV)和牛轮状病毒(BRV)和大肠杆菌混合感染引起。药敏试验表明,分离到的大肠杆菌对28种抗生素产生了严重的耐药,仅对多粘菌素和呋喃妥因敏感,并且发现该菌同时携带2种毒力基因和10种耐药基因。本研究分离的一株大肠杆菌携带有丰富的耐药基因,具有多重耐药性,为该奶牛场上临床治疗加大了难度。而本试验结果为该养殖场提供科学的临床药物指导,为该牛场治疗此次犊牛腹泻提供了依据,同时为新疆犊牛腹泻混合感染的防控提供了病例参考和技术资料。     

鸡源性多重耐药沙门菌质粒与耐药性相关性分析

为了解鸡源性沙门菌临床分离株多重耐药情况与质粒的携带关系,采用K-B纸片法对13株鸡源沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感性试验,通过质粒图谱检测耐药菌株质粒携带情况,分析质粒图谱和耐药谱的关系,采用0.5%SDS和43°C对分离菌进行质粒消除,根据质粒消除前后耐药谱的变化,初步对耐药基因进行定位。13株分离菌均表现为多重耐药,大部分菌株为5重及以上耐药,最主要的多重耐药谱是AMP-CIP-OFL-NOR-SXT-TET,分离菌均检测到了质粒的存在。质粒消除后,耐药谱明显变窄,耐药菌株恢复了对大多数药物的敏感性。结果表明,鸡源性多重耐药沙门菌的耐药性与质粒的携带关系密切,初步推断编码四环素、环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星的耐药基因主要存在于质粒上。     

内蒙古地区奶牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性研究

为了确定内蒙古地区奶牛中乳源金黄色葡萄球菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,采用生化鉴定法结合PCR方法对奶牛乳源金黄色葡萄球菌进行了分离、鉴定。采用微量稀释法测定了15种临床常用抗菌药物对21株金黄色葡萄球菌的最小抑制菌浓度(MICs)。结果显示,分离菌株对青霉素和氨苄西林的耐药率较高,分别为81%和75.5%;对头孢菌素类药物的耐药率也较高,均在60%~70%之间;对大环内酯类和四环素类抗生素的耐药率均在40%~50%之间。乳源金黄色葡萄球菌对3种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率较低,均小于30%;对庆大霉素也比较敏感,耐药率13.2%。以上分离菌株对万古霉素全部敏感。联合用药的药敏试验结果显示,菌株对阿莫西林-克拉维酸高度敏感,耐药率仅9.5%。多重耐药表型结果显示,75.5%的菌株耐2~7种药,24.5%的菌株耐8~13种药。通过PCR方法对奶牛乳源金黄色葡萄球菌所携带的耐药表型及基因进行检测,结果表明,分离菌株中有3种四环素耐药基因组合在流行。分别是tet M+tet L1株(4.76%)和18株分离菌携带bla Z耐药基因,检出率为85.7%。由此可见,内蒙古地区奶牛乳源性金黄色葡萄球菌对15种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且多重耐药情况较为严重;分离菌株中有tet M、tet K、tet L和bla Z耐药基因在流行,分别编码了对四环素类和β-内酰类抗生素的耐药性。     

青岛地区鸭源四环素类耐药大肠杆菌流行情况调查及耐药基因分析

【目的】通过对山东青岛地区鸭源样品进行四环素类耐药大肠杆菌的分离鉴定,了解其流行分布规律。对耐药菌株进行药敏检测及耐药基因鉴定,研究四环素类耐药大肠杆菌多重耐药率及耐药基因携带情况,为抗生素的合理应用提供理论依据。【方法】以肉鸭泄殖腔拭子及盲肠样本为试验材料,通过四环素选择培养基分离大肠杆菌。采用琼脂稀释法测定耐药菌株对12种抗菌药物的敏感性,通过PCR检测四环素类耐药大肠杆菌携带耐药基因情况,进一步通过接合试验评估tet(X)基因的可转移性,进而对部分tet(X)基因阳性菌株进行全基因组测序,同时探究tet(X)耐药基因的遗传环境特征。【结果】采集的63份样品经分离鉴定,获得48株四环素耐药大肠杆菌,分离率为76.19%。药敏试验结果显示,所有菌株对四环素和土霉素耐药,对多西环素和氟苯尼考耐药率分别为93.75%和89.59%,且对多黏菌素、替加环素及美罗培南耐药率分别为64.58%、16.67%和4.17%;所有菌株均存在多重耐药现象,其中以耐7种药物最多。耐药基因检测结果与耐药情况基本相对应,耐药率高的药物相应耐药基因呈现较高携带率;其中floR、tet(A)、qnrS、mcr-...     

产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）乳牛乳腺炎大肠杆菌的检测及其基因型分布

为了解采自内蒙古和上海地区的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）乳牛乳腺炎大肠杆菌的流行特点、耐药性和基因型分布,采用美国临床实验室标准化委员会（CLSI）2005年推荐的初筛及纸片确认方法对内蒙古地区的58株和上海地区的22株乳牛乳腺炎大肠杆菌进行了ESBLs的检测及耐药性分析,并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果显示,内蒙古地区检出6株产ESBLs菌株,阳性率为10.34%,其中,有1株菌携带TEM-1基因,有1株携带CTX-M-14型基因,而有3株同时携带TEM-1型和CTX-M-14型2种基因,只有1株菌未检出上述基因。上海地区未检出产ESBLs菌株。结果表明,产ESBLs菌株多表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株。     

胶东地区肉鸡大肠杆菌耐药性研究

试验通过CLSI推荐的K-B药敏纸片法,对胶东地区分离的肉鸡大肠杆菌进行耐药性研究。结果显示:169株肉鸡大肠杆菌分离株对17种抗菌药物均有不同程度的耐药性,对四环素、多西环素、阿莫西林耐药的菌株数量较多,耐药率分别为94.08%、94.08%、92.90%;对多黏菌素B耐药菌株数量最少,耐药率仅为0.59%;耐药率低于30%的有4种,依次为磷霉素、大观霉素、丁胺卡那霉素、多黏菌素B;其余10种药物耐药率在36.09%~79.89%。169株大肠杆菌中仅有一株大肠杆菌表现单一耐药性,其余168株分离菌均对抗菌药物表现出多重耐药,耐药范围在3~15种,其中对9~13种抗菌药物具有多重耐药性的分离菌共106株,占全部分离菌的62.72%。     

800株不同动物源大肠杆菌的耐药性监测

采用微量稀释法,检测了2007年12月分离自四川省5个市的牛源、猪源、鸡源800株大肠杆菌对13种抗菌药物的敏感性.结果显示,分离菌株的耐药率除阿米卡星仅5.9%外,其余药物均超过35%,对磺胺异(口惡)唑、磺胺甲嗯唑+甲氧苄啶、氨苄西林的耐药率较高,分别为100%、96.6%、75.8%;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种以上药物的菌株占92.6%.不同地区及不同动物源大肠杆菌耐药水平存在差异.其中成都地区耐药性最严重,鸡源大肠杆菌耐药率最高.监测结果表明,四川省动物源大肠杆菌的耐药现状已不容乐观,有必要加强耐药性监测,指导兽医临床合理使用抗菌药物.     

内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌毒力基因检测及耐药性研究

为了解内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌毒力基因的分布情况及其耐药现状,通过该地区360份乳房炎奶样链球菌的分离鉴定,利用微量肉汤稀释法测定了81株链球菌对15种药物的MIC,采用PCR法检测耐药基因及毒力基因的携带情况。结果显示,分离到的81株链球菌对β-内酰胺类的耐药率最高;对红霉素和四环素的耐药率在40%~85%;对氟喹诺酮类的耐药率相对较低。多重耐药菌株达88.9%(n=72)。耐药基因pbp2b的检出率为86.4%,tetL和tetM的检出率在75%以上,红霉素耐药表型主要由ermB介导。分离菌株毒力基因中cfb的检出率最高(50.6%),其次为cyl和hylB。内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌对β-内酰胺类、大环内酯类和四环素耐药情况严重,且发现多重耐药菌株的流行;链球菌中尤以无乳链球菌的毒力基因携带率较高。     

乌蒙地区威宁黄牛的大肠杆菌耐药性分析

本研究旨在了解乌蒙地区威宁黄牛的大肠杆菌耐药性,从而为临床用药提供参考依据。在威宁县9个乡镇采集黄牛粪便735份,分离得到大肠杆菌菌株672份,分离率91.43%,其中正常粪便中分离到512份,分离率77%,腹泻粪便中分离到160份,分离率高达96%。药敏试验结果显示,在672株大肠杆菌中,磺胺类药物耐药率最为严重,高达55%。通过PCR检测菌株携带的耐药基因和毒力基因,结果显示,喹诺酮类耐药基因qnrA和qnrB的检出率分别是22%和36%;磺胺类耐药基因sul1、sul2和sul3的检出率分别为48%、50%和39%;四环素耐药基因tetM的检出率最低,仅为4%;毒力基因检出率24%,相对其他报道较低。研究结果表明,威宁黄牛大肠杆菌感染较为严重,且菌株耐药性严重,呈现出多重耐药。     

中药提取物恢复耐药大肠杆菌对氨基糖苷类药物敏感性的研究

为考察五倍子、黄芩、黄连、艾叶、鱼腥草5种中药提取物恢复耐药大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素敏感性的作用,采用1/2 MIC中药提取物对耐药菌株进行耐药性消除,通过影印培养法筛选出耐药性消除菌落,观察耐药消除率和消除子MIC值变化,并检测质粒及耐药基因rmt B的携带情况。结果表明:5种中药提取物对耐药大肠杆菌均有一定的抑制作用,耐药菌经1/2 MIC作用48 h后,五倍子、黄芩、黄连、艾叶、鱼腥草的耐药消除率分别为20.67%、21.33%、17.33%、16.67%、9.33%;消除子对庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、阿米卡量(AMK)、新霉素(NEO)的MIC值均由高度耐药(512μg/m L)降至敏感(2~4μg/m L);5种中药提取物不能使耐药菌质粒丢失,却能导致耐药基因rmt B丢失。5种中药提取物可能是通过使高度耐氨基糖苷类药物的细菌丢失耐药主效基因来恢复对药物敏感性的。     

仔猪黄痢病原菌的分子生物学鉴定及多重耐药基因检测

旨在确定引起安徽地区猪场仔猪黄痢发生的病原菌种类,并从分子水平上揭示其多重耐药机制。利用麦康凯培养基对从仔猪黄痢病死猪肝脏样本中初步分离到的9株细菌进行选择性培养;提取分离菌株的基因组DNA,利用PCR法扩增其16SrDNA序列并进行测序;将测序结果提呈至NCBI数据库,与GenBank中已发表的序列进行BLAST比对,对分离菌株进行种水平鉴定;采用纸片扩散法开展分离菌株对抗菌药物的敏感性试验;利用PCR法检测分离菌株携带多重耐药基因AcrA的情况。结果表明,9株分离菌在麦康凯琼脂培养上均呈中等大小的玫瑰红色菌落,符合大肠杆菌的菌落特征;9株分离菌的16SrDNA序列与GenBank中公布的大肠杆菌16SrDNA序列的相似性均在99.0%以上,提示分离菌株均为大肠杆菌;9株分离菌对12种抗菌药物呈现不同程度的耐药性,对阿米卡星、大观霉素和氯霉素的耐药性较强;9株分离菌的AcrA基因携带率为100%。综上提示,多重耐药性大肠杆菌是引起该地区猪场仔猪黄痢发生的致病菌,在临床治疗中应引起足够重视。