病木样本松材线虫DNA检测方法研究

松材线虫是我国禁止进境的检疫性有害生物,在形态学特征上和拟松材线虫很相似。为提高12I岸木材检疫中松材线虫鉴定速度和准确性,我们开展了从含线虫木样中直接检测松材线虫的初步研究。根据松材线虫和松树内其他寄生线虫核糖体DNA的ITS区序列差异,设计了松材线虫的特异性引物对BXF／BXR,并对7个松材线虫分离物、4个拟松材线虫分离物和1个待鉴定伞滑刃线虫分离物的基因组DNA进行PCR扩增,结果从所有松材线虫分离物中都扩增到长度约为580bp的特异性条带,而其他分离物没有扩增产物出现。采用CTAB法提取含虫病木样本总基因组DNA,用引物对BXF／BXR对不同稀释梯度的DNA样品进行扩增,当含虫木样总DNA被稀释到8倍以上时,可从DNA模板中扩增出特异性条带。特异性引物对BXF／BXR检测木样中松材线虫的灵敏度可达10条线虫／100mg木样。     

松材线虫和拟松材线虫种间及种下群体的RAPD指纹分析

利用ＲＡＰＤ技术对松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）和拟松材线虫（Ｂ．ｍｕｃｒｏｎａ－ｔｕｓ）的分离物基因组ＤＮＡ进行了ＤＮＡ片段的随机扩增,以确定种间及种内群体的亲缘关系和筛选具有种鉴定特征的分子标记．通过对４０个１０聚体随机引物的筛选,应用８个引物对两种线虫种间及种内分离物扩增片段的遗传分析显示：两种间群体ＲＡＰＤ扩增片段的共享度为４０％～５６％,而在松材线虫的不同分离物之间的共享度为６０％～８４％;其中有一个引物（Ｐ２５３）可在松材线虫和拟松材线虫种间产生具有种鉴定特征的特异性ＲＡＰＤ片段,在松材线虫的不同分离物中均可产生一约７００ｂｐ的特异性片段,而在拟松材线虫中产生了两个分别约为１３００ｂｐ和１９００ｂｐ的特异性片段．     

宁波松木中松材线虫与拟松材线虫混生现象的报道

在对宁波地区松木中携带的伞滑刃属线虫种类进行调查时,多次发现了松材线虫与拟松材线虫混生的现象,并进行了分子生物学方法的确认。     

拟松材线虫及其致病性

对拟松材线虫的形态以及致病性方面的研究进行了综述。拟松材线虫在形态上与松材线虫十分相似。两者之间的主要区别在于拟松材线虫的尾部形态为圆锥形,而松材线虫的尾部为指形。形态鉴定上支持将尾尖突短于1μm的定性为松材线虫,长于3.5μm的定为拟松材线虫。拟松材线虫和松材线虫交合伞都有多种变化,不宜作为分类特征。关于拟松材线虫对松树的致病性,主要存在3种观点:①无致病性;②有微弱致病性或潜在致病性;③具有致病性分化,有的株系具有较强的致病性。     

松材线虫和拟松材线虫食道腺及其分泌物超微结构观察

该文用透射电镜观察比较松材线虫南黑株系、拟松材线虫杭九株系幼虫期和成虫期食道腺和分泌物颗粒的形态以及在生活史中的变化. 结果表明二者的食道腺的结构以及在不同时期活性的变化是一致的:幼虫期亚腹食道腺发达,内有大量的分泌颗粒;成虫期背食道腺发达,内有大量的分泌颗粒. 松材线虫和拟松材线虫食道腺分泌颗粒可分为两种类型,这两种类型的分泌颗粒在体积和电子密度上都存在差异. 松材线虫和拟松材线虫株系间的分泌颗粒在体积上存在差异.      

松材线虫体壁物的厚度和糖含量比较

为进一步弄清松材线虫的致病机理,该文对松树上分离的松材线虫、拟松材线虫和小杆线虫的体壁物进行了初步研究。 通过电镜观察和可溶性糖含量分析,发现松材线虫体表有一层很厚的物质,而拟松材线虫和小杆线虫体表比较光滑;松材线虫比其他两种线虫体表有更多的糖类物质。研究同时提出,松材线虫和拟松材线虫体表物质的厚度和糖含量,可能与二者的致病性有密切关系。      

进境木片松材线虫PCR检测方法研究

利用松材线虫rDNA内转录区（ITS）特异性引物,对泉州口岸入境木片携带的线虫基因组DNA进行特异性PCR扩增,建立一套快速准确的线虫检测鉴定方法。将该检测方法应用于泉州口岸现场检疫鉴定,结果未检测到松材线虫,与传统形态学鉴定方法结果一致。     

四川松材线虫与拟松材线虫的PCR-RFLP鉴别

应用PCR-RFLP技术对来自四川省8个地方的枯死松树样品中的伞滑刃属线虫(Bursaphelenchus)群体进行了分子鉴定。结果显示来自邻水、雅安的枯死松树样本中含有松材线虫(B.xylophilus),而来自大竹和遂宁的枯死松树样本中含有拟松材线虫(B.mucronatus)。其他伞滑刃属线虫包括莱鲁尔夫伞滑刃线虫(B.rainulf)、霍夫曼伞滑刃线虫(B.hofumanni)、泰国伞滑刃线虫(B.thailandae)、变异伞滑刃线虫(B.aberrans)。本研究中选用的4种限制性内切酶(DraⅠ、SalⅠ、HhaⅠ、AluⅠ)除SalⅠ外均可对所鉴定的这6种伞滑刃属线虫产生特异性的酶切位点,从而可均有效地鉴别出松材线虫、拟松材线虫和其他4种伞滑刃属线虫,其结果可为今后这几种伞滑刃属线虫的分子鉴定提供一定的参照。     

拟松材线虫媒介昆虫报道

对拟松材线虫发生区内46株萎蔫云南松上的主要蛀干害虫松墨天牛、纵坑切梢小蠹和马尾松角胫象甲进行采样、分离和镜检,结果表明:松墨天牛携带拟松材线虫,是拟松材线虫的主要媒介昆虫,纵坑切梢小蠹和马尾松角胫象甲未检出拟松材线虫.通过分析云南拟松材线虫的危害性提出防控对策.     

拟松材线虫对黑松致病性研究

松材线虫病（Ｂｕｒａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｍｕｃｒｏｎａｔｕｓ）是发生在松树上的一种毁灭性病害 ,目前已在日本、中国、美国、加拿大和韩国等分布 ,并在日本和中国造成巨大的损失。在北美洲 ,松材线虫分布也很广。针叶树中还有一些形态与松材线虫非常相近的伞滑刃线虫 ,统称松材线虫复合种（ＰＷＮＣ） ,其中最常见的是拟松材线虫。拟松材线虫在东亚、美洲、欧洲都有 ,分布极广泛。杂交试验和ＤＮＡ分析证实松材线虫和拟松材线虫有密切的关系 ,能用ＲＡＰＤ和ＲＦＬＰ技术进行区分 ,拟松材线虫的ＤＮＡ有东亚和欧洲两种类型 ,前者主要分…     

松材线虫及携带细菌对黑松复合的侵染

从不同松树上分离松材线虫、拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫,并从松材线虫和小杆线虫体上分离细菌,将线虫无菌化处理后与从线虫体上分离到的荧光假单胞杆菌、产气肠杆菌混合接种无菌黑松苗和愈伤组织。结果表明,单独接种无菌线虫或细菌不能使黑松致病,无菌松材线虫、无菌拟松材线虫只有与有毒性的荧光假单胞杆菌混合接种时才能使黑松无菌苗和愈伤组织发病,细菌通过线虫携带在树体内传播扩散,使松树致病。研究进一步证明了线虫和细菌在松材线虫病致病过程中起协同作用。     

伞滑刃线虫属分类研究进展

 伞滑刃属线虫是重要的寄生线虫。该属松材线虫是中国林业上一种重要的外来入侵性有害生物。随着松材线虫及其近缘种拟松材线虫对森林资源危害性的加重,该属越来越受到广泛重视。迄今报道已有63个种,其中3个种有待查考（species inquirendae）、1个种有待确认（species indeterminatae）、1个种发现地不详（species incertae sedis）、5个裸名（nomen nuda）。对松材线虫和拟松材线虫的区分至关重要。为了弥补形态鉴定的不足,还辅以PCR技术鉴别。已开发出的PCR鉴别技术有RAPD,PCR直接鉴别法、RFLP和SSCP等。     

松材线虫两种实用分子检测技术

为检验已开发的SCAR标记与实时PCR两种分子检测方法鉴定松材线虫的可靠性,本文选用线虫未知种样品7个以及已知种样品3个为实验材料,采用上述两种分子检测方法进行检测,并且对7个线虫未知种样品进行形态鉴定。结果表明：1）运用SCAR标记检测,第2、3、4、7号4个未知种样品与8号松材线虫样品出现了一条清晰、明亮的860b...     

余姚市松木中伞滑刃属线虫种类调查

对宁波余姚市针叶林中的伞滑刃属线虫种类进行了调查,从采集的218份样本中,根据形态学特征共分离和鉴定出伞滑刃属线虫8种,松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）、莱奴尔夫伞滑刃线虫（B．rainulfi）、拟松材线虫（B．mucronatus）、林伞滑刃线虫（B．1ini）、湖南伞滑刃线虫（B．hunanensis）、泰国伞滑刃线虫（B．thailandae）、中华伞滑刃线虫（B．sinensis）和程氏伞滑刃线虫（B．chengi）。其中,程氏伞滑刃仅在台湾的木质包装中报道：     

松木包装板材的伞滑刃线虫种类鉴定

记述了输入福建省的松木包装板材中分离到的松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)和拟松材线虫(B.mucronatus),讨论了松材线虫对福建省林业构成的威胁.     

利用荧光PCR快速检测松材线虫

利用荧光PCR从美国进境的木质包装材料中成功检出松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus).结果表明,探针检测松材线虫样品时,可产生明显的荧光信号,但空白水对照、小杆线虫(Rhabditida)、拟松材线虫(B.mucronatus)无荧光信号,表明探针有较强的特异性,且具有简单、灵敏、快速等特点.     

伞滑刃线虫属 4个种rDNA的PCR扩增

 从161份病松树样本中分离、鉴定出拟松材线虫（Bursaphelenchus mucronatus）、霍夫曼伞滑刃线虫（B.hofmanni）和赫列尼库斯伞滑刃线虫（B.hellenicus）3个种,其中后二者是中国新记录种,华山松和云南松分别是这两个种的世界新寄主记录。本试验以松材线虫(B.xylophilus)为对照,用伞滑刃属线虫rDNA相关引物对这4种伞滑刃线虫进行PCR扩增,进一步印证形态鉴定的可靠性。试验结果表明,霍夫曼伞滑刃线虫、赫列尼库斯伞滑刃线虫与松材线虫、拟松材线虫,均扩增到约800 bp的分子片段,为霍夫曼伞滑刃线虫和赫列尼库斯伞滑刃线虫的鉴定从分子生物学角度提供了一定依据。