高效液相色谱法

正高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)又称"高压液相色谱"、"高速液相色谱"、"高分离度液相色谱"、"近代柱色谱"等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。     

3个乌桕品种叶片类黄酮成分研究

以‘连桕1号’‘云台红桕’和‘云台金桕’为研究对象,利用超高效液相色谱-质谱联用技术,定性定量分析其叶片转色前和转色后类黄酮成分与含量。结果表明：3个乌桕品种中共检测到13种类黄酮物质,分别为儿茶素、二氢杨梅素、表儿茶素、芦丁、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、二氢槲皮素、槲皮苷、二氢山奈酚、木犀草素、槲皮素、柚皮苷查尔酮、柚皮素和山奈酚,其中槲皮苷、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷和芦丁为3个乌桕品种共有的主体成分。槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷是‘云台红桕’转色后叶片呈现红色的主要色素成分;芦丁是‘云台金桕’叶片变黄的主要原因。类黄酮类型主要为槲皮甘类、槲皮素类、芦丁类和儿茶素类。‘连桕1号’叶片转色后槲皮甘类高于‘云台红桕’和‘云台金桕’,‘云台红桕’叶片转色后槲皮素类高于‘连桕1号’和‘云台金桕’,‘云台金桕’叶片转色后芦丁类高于‘连桕1号’和‘云台红桕’。     

云芝发酵液中α-半乳糖苷酶酶学特性的研究

为了研究云芝(Trametes versicolor)发酵液中α-半乳糖苷酶的生理生化性质,并筛选提高该酶稳定性的共溶剂,将α-半乳糖苷酶在不同p H缓冲液、不同反应温度、不同金属离子溶液以及不同保护剂中孵育一定的时间,并测定酶活。结果表明,α-半乳糖苷酶的最适反应p H为3.0,最适反应温度为60℃;金属离子Pb2+和Fe3+对酶活性有较强的抑制作用,并随着浓度的升高抑制作用有所增强,Cd~(2+)、Cu2+和Hg2+致使α-半乳糖苷酶的活性降低20%~50%,Ca2+、Mg2+、Zn2+和Fe2+等离子对该酶的活性影响不明显;保护剂筛选结果显示,2 mmol·L-1甘露醇对该酶热稳定性的保护效果最好,其次是海藻糖、蜜二糖、棉籽糖、L-半胱氨酸、甘油和黄原胶等。     

红树莓花色苷的提取与鉴定

以"秋福"红树莓果实为试材,对其花色苷提取条件进行优化,并采用高效液相色谱质谱联用分析鉴定其花色苷组成成分。结果表明:"秋福"红树莓花色苷最佳提取条件为1.5%的盐酸-甲醇溶液,料液比1∶30 g·mL~(-1),提取时间3 h,提取温度35℃,此时花色苷含量可达4.49 mg·g~(-1)。高效液相色谱-质谱联用分析鉴定出"秋福"红树莓中花色苷共有6种组成成分,其中含量最多为花青素-3-葡萄糖苷,其次为花青素-3-槐糖苷和花青素-3-芸香糖苷,三者含量总和占花色苷总含量的93.03%。     

七种真菌对龙胆苦苷的生物转化研究

采用变温培养方式研究了7种真菌对龙胆苦苷的生物转化,应用薄层色谱分析法(TLC)和高效液相色谱分析法(HPLC)检测转化产物。结果表明:绿色木霉、米曲霉、黑曲霉、黑根霉、桔青霉以及辣椒炭疽菌能转化底物龙胆苦苷。其中,绿色木霉具有最强的转化能力,能将底物完全转化为2种产物。     

黑穗醋栗果皮中非花色苷酚的鉴定与分析

以26个不同品种的黑穗醋栗果皮为试验材料,采用溶剂提取法对不同黑穗醋栗品种果皮中非花色苷酚类物质进行提取,并用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)技术对果皮中非花色苷酚类物质进行定性及定量分析。结果表明:在负离子扫描模式下,共检测到10种非花色苷酚类物质,主要有杨梅酮-3-葡萄糖苷、杨梅酮-3-芸香糖苷、槲皮素-3-葡萄糖苷和二氢山奈酚-3-鼠李糖苷等;大部分品种果皮非花色苷酚含量在0.5mg·g-1以上,其中含量较丰富的品种为‘格鲁布基’‘戈金鹦鸽’‘滨海明珠’。该研究结果为黑穗醋栗的综合开发利用提供技术支撑,同时也为新品种的选育提供参考依据。     

高效离心分配色谱(HPCPC)分离纯化苹果树枝中的根皮苷

根皮苷是苹果中主要的水溶性多酚化合物,对人体具有多种生理保健功能。为了获得高纯度的根皮苷,运用高效离心分配色谱技术对苹果树枝乙醇提取物中的根皮苷进行分离纯化。对两相溶剂体系、转子转速和流动相流速等参数进行系统的优化实验。结果表明,最佳两相溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶5∶1∶5,v/v),上相有机相为固定相,下相水相为流动相,转子转速为1500r·min-1,流速为3.0mL·min-1,紫外检测波长为287nm。在此条件下,在30min内,从纯度为17.91%苹果树枝乙醇提取物中一步分离纯化得到根皮苷,高效液相色谱法测定其纯度为91.20%,根皮苷的回收率为98.10%。     

葡萄酒中白藜芦醇含量的测定研究

采用高效液相色谱法分别测定了毛葡萄-1、毛葡萄-2、北国蓝、北国红、法国蓝5个葡萄品种(系)酿制酒中的白藜芦醇及其醇苷的含量。结果表明,葡萄酒中白藜芦醇主要以醇苷的形式存在。可能因气候原因,2017年的葡萄酒白藜芦醇总含量均高于2018年;适时晚采的酒样白藜芦醇总含量高,北国蓝葡萄酒的白藜芦醇总含量达到10.92mg/L。     

杏仁中苦味物质的检测方法及苦味物质在杏仁发育过程中的分布研究

建立了一种同时测定苦杏仁的种皮、子叶(种仁)、早期的珠心和胚乳等组织中苦杏仁苷与野黑樱苷含量的高效液相色谱方法。采用甲醇作提取溶剂，超声提取青岛大红杏仁中苦杏仁苷和野黑樱苷，以1∶400(质量∶体积)的料液比、超声提取30 min为适宜的提取条件。采用Agilent poroshell 120 EC-C18色谱柱(2.7μm,4.6 mm×50 mm)，流动相为20%甲醇和80%水，流速0.3 mL/min，检测波长210 nm，在柱温30℃的条件下，苦杏仁苷和野黑樱苷色谱峰分离良好；苦杏仁苷浓度为0.5～100μg/mL线性关系良好，R2=0.999 9，野黑樱苷浓度为0.5～100μg/mL线性关系良好，R²=0.999 7；苦杏仁苷平均加标回收率为98.87%～101.18%，野黑樱苷为97.90%～110.69%。用此方法对青密沙杏仁不同发育阶段不同组织中的苦杏仁苷和野黑樱苷含量进行了检测，结果发现，发育成熟的杏仁子叶组织中苦杏仁苷含量较高，为39.60 mg/g(R4-c)，而发育早期的杏仁中没有检测到苦杏仁苷；与苦杏仁苷不同，除了R4-c，野黑樱苷在杏...     

快速液相色谱法测定柑橘中6种类黄酮化合物含量

为建立一种快速分析测定柑橘果实中6种类黄酮(橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、川皮素、桔皮素、橙黄酮)化合物的技术方法,以蜜橘为材料,利用加速溶剂萃取技术对柑橘果实中的6种类黄酮化合物进行提取,并通过快速液相色谱对样品中的类黄酮化合物进行分离测定。结果显示,该方法可以同时测定6种类黄酮化合物,并且具有良好的回收率和精密度。整个提取测定技术快速、简单、准确,适合柑橘果实中6种类黄酮化合物含量的测定。     

两种无孢灵芝子实体醇提物的比较

以龙芝2号和鹿角灵芝两种无孢灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体为原料,95%乙醇超声提取,对醇提物中的三萜进行了分析和体外抗肿瘤实验。结果表明,两种样品的醇提物得率分别为1.8%和3.7%,醇提物中三萜化合物含量分别为0.53%和1.16%;高效液相结果表明,鹿角灵芝中三萜的种类也多于龙芝2号。两种无孢灵芝的醇提物对肿瘤细胞K562和SW620的增殖均有一定的抑制作用,龙芝2号抑制肿瘤增殖的活性优于鹿角灵芝。     

棘托竹荪菌丝体抑菌作用研究

以水为提取剂,微波、酶、超声波为辅助手段研究棘托竹荪菌丝体的抑菌作用,测定其对大肠杆菌等6种常见食品腐败菌的抑菌效力(抑菌圈直径)、最低抑菌浓度(MIC)、热稳定性及抑菌pH范围。结果表明,4种方法得到的提取液都有一定的抑菌作用,其中以酶解水提法效果最佳,所得到提取液的抑菌效力最强,最低抑菌浓度小,抑菌pH范围广且热稳定性强。     

QuEChERS提取-高效液相色谱法快速测定菜薹中氨基甲酸酯类农药残留

为简化液相色谱法测定氨基甲酸酯类农药残留的前处理步骤,提高检测效率,采用Q u E C h E R S提取高效液相色谱法建立了菜薹中10种氨基甲酸酯类农药的快速检测方法。样品经乙腈提取后,经提取液氮吹浓缩、多功能针式过滤器净化并进样分析,采用加标回收的方法测定回收率和精密度,检验其准确性和可靠性。结果显示：10种氨基甲酸酯农药回收率为70.9%～101.5%,相对标准偏差（RSDs）为1.7%～6.2%,证明检测方法简单、快速,可满足菜薹中10种氨基甲酸酯类农药残留的检测工作。     

果园生草试验及适生草种评价

试验以自然生草和自然生草＋人工生草（紫花苜蓿、白三叶、红三叶、早熟禾、高羊茅和黑麦草）的‘寒富’苹果园为研究对象,以清耕为对照,研究了自然生草对土壤理化性质、微生物数量和酶活性的影响,并对自然生草条件下的人工草种进行了初步评价。结果表明,与对照相比,自然生草处理土壤pH值、有机质、全氮、全磷、碱解氮、速效磷、速效钾、细菌、真菌、放线菌、脲酶和磷酸酶明显升高,全钾增幅较小,但含水量降低了。通过适宜草种评价的初步研究可知,以生草覆盖为目的、刈割次数少的可选择白三叶、高羊茅和黑麦草等品种;为增加土壤有机质、提高土壤肥力,需要刈割用于覆盖的则应选择紫花苜蓿、红三叶等产草量较高的草种。     

Allelopathic potential of watermelon tissues and root exudates

Allelopathic potential of watermelon in hydroponic culture was investigated using the continuous root exudates trapping system (CRETS). Laboratory bioassays and high-performance liquid chromatography (HPLC) were used for quantification of phytotoxins in different plant tissues and root exudates collected using XAD-4 resin. Seedling growth of both watermelon and lettuce was significantly inhibited by watermelon root exudates and the degree of inhibition increased with increasing concentration of exudates. Root exudates had inhibitory effects throughout the experiment and these were most pronounced during the period 41–50 days after transplanting. Inhibitory effects of various plant tissues were demonstrated using the bioassay tests. Frulic acid was the dominant component found using HPLC and the amounts of allelochemicals found in the plant extracts were correlated with the bioassay results using the Petri dish test. The results indicate that the allelopathic potential of watermelon may play an important role in the phenomenon referred to as ‘soil sickness’.     

28种药用植物提取液对6种植物病原真菌抑菌活性的测定

以瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）、辣椒疫霉（Phytophthora capsici）、尖镰孢菌（Fusarium oxysporium）、茄镰孢菌（Fusarium solani）、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）等6种植物病原真菌为供试菌株,采用菌丝生长法对28种药用植物提取液的抑菌活性进行了测定。结果表明：丁香（Eugenia caryophyllata）对6种植物病原真菌的抑制率均达100%,乌梅（Armeniaca mume）、百部（Stemona sessilifolia）和木香（Aucklandia lappa）对5种植物病原真菌的抑制率均在70%以上。采用孢子萌发法对抑菌效果较好的5种药用植物进行进一步研究,结果表明：这5种药用植物对灰葡萄孢孢子萌发抑制率均在90%以上。     

Isolation and purification of active components from Centella asiatica and observation of their immunosuppressive effect

AIM：To isolate and purify the active components from Centella asiatica, and to observe their effect on the proliferation and apoptosis of mouse spleen lymphocytes. METHODS：Semi-preparative high-performance liquid chromatography was performed to further isolate and purify the extracts from Centella asiatica. The effects of the active components on apoptosis and mitochondrial membrane potential of the spleen lymphocytes were assessed by flow cytometry. The structures of the active components were identified by ultraviolet spectrometry, electrospray ionization negative-ion mass spectrometry, ［1H］ nuclear magnetic resonance (NMR) and ［13C］ NMR. RESULTS：The molecular weights of the active components from Centella asiatica, named compound I and compound II, were 302 and 286, respectively. The compound I and compound II from Centella asiatica significantly inhibited the proliferation, promoted the apoptosis and reduced the mitochondrial membrane potential of mouse spleen lymphocytes. Compound I and compound II were identified as quercetin and kaempferol. CONCLUSION：The compound I and compound II from Centella asiatica show antiproliferative and immunosuppressive effects on mouse spleen lymphocytes by promoting apoptosis and reducing mitochondrial membrane potential.     

苦参有效成分对辣椒枯萎菌的抑菌活性

采用生长速率法和悬滴法测试了不同浓度苦参提取物、黄酮类化合物及生物碱对辣椒枯萎病的抑菌活性.结果表明:苦参提取物对辣椒枯萎菌菌丝生长和孢子萌发均有很强的抑制作用.在供试质量浓度40 g/L时,对辣椒枯萎菌菌丝生长、孢子萌发抑制率分别达到94.48％、89.01％;并且黄酮类化合物抑菌活性显著高于生物碱.     

Comparative study of lipoprotein monosaccharide composition between diabetic patients and healthy participants

AIM:To establish a liquid chromatography method for determining the monosaccharide composition of human lipoproteins, and to investigate the differences between diabetic patients and healthy participants. METHODS:Liquid chromatography with pre-column derivatization was used to determine the neutral and basic monosaccharides, and liquid chromatography tandem mass spectrometry was applied to quantify N-acetylneuraminic acid content. RESULTS:The contents of mannose, glucosamine, N-acetylglucosamine, glucose, galactose and N-acetylneuraminic acid in high-density lipoprotein from healthy participants and diabetic patients were (5.88±0.94),(16.49±4.11),(1.31±0.33), (0.87±0.16), (7.18±1.64), (2.14±0.12) mmol/(g protein) and （8.68±0.39), (24.73±5.50), (1.91±0.54), (1.23±0.35), (9.73±2.85), (3.53±0.27） mmol/(g protein）, respectively. The contents of mannose, glucosamine,N-acetylglucosamine, glucose, galactose and N-acetylneuraminic acid in low-density lipoprotein from healthy participants and diabetic patients were (29.20±3.57), (50.77±4.72), (5.28±0.64), (10.06±1.37), （28.44±3.96）,（6.86±0.11) mmol/(g protein) and (30.08±3.78）, （38.52±6.38）, （3.79±0.78）, （7.63±1.50）, （20.05±2.63）, （6.45±0.18) mmol/(g protein), respectively. The contents of mannose, glucosamine, glucose, galactose and N-acetylneuraminic acid in very-low-density lipoprotein from healthy participants and diabetic patients were (91.21±4.12）, （27.05±2.34）, （4 230.95±15.83）, (43.40±3.75), (2.95±0.24) mmol/(g protein) and (82.40±0.51), (30.16±0.32), (4 722.73±93.27), (34.05±2.81), (4.42±0.15) mmol/（g protein）, respectively. CONCLUSION: Liquid chromatography with pre-column derivatization is suitable for the neutral and basic monosaccharide analysis in human lipoproteins, and the glycosylation of lipoproteins in diabetic patients are significantly changed compared with the healthy controls.