大鼠发情周期的子宫组织雌激素受体定位的初步研究

本试验选用SD系大鼠，用常规阴道抹片法鉴定发情，采用免疫组织化学的过氧化物酶一抗过氧化物酶复合物（PAP）法，进行雌激素受体（ER）定位。在子宫的内膜固有层、肌层和浆膜层，发现抗雌二醇抗体的反应阳性细胞，而在内膜上皮细胞内无阳性染色，这种阳性染色可以被 烯酚所阻断，不加抗雌二醇抗体的结果使染色呈阴性，发情周期4个不同时期的子宫组织中免疫反应阳性细胞表现出量的变化，以发情间期为基础，发情前期较多，发情期和发情后期依次减少，其动态变化与前人报道发情周期中雌二醇在血浆中的浓度变化是对应的。并发现发情周期中子宫组织的肥大细胞与雌激素受体的分布和变化有着相似的特点。     

雌激素受体α和孕激素受体在不同发情周期牦牛子宫中的表达变化

 【目的】观察发情周期不同阶段牦牛子宫中ERα、PR mRNA和蛋白的表达变化。【方法】采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学SP法分别对发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中ERα和PR mRNA及ERα和PR蛋白的表达特点进行了研究。【结果】发情周期不同阶段牦牛子宫内膜和肌层中均有ERα mRNA和 PR mRNA的表达,ERα和PR蛋白免疫阳性产物表达于子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞和子宫肌层平滑肌细胞中;子宫内膜中ERα mRNA和PR mRNA在发情后期表达最强,间情期显著下降（P＜0.05）,发情前期回升;ERα和PR蛋白表达在发情期最强而间情期最弱;子宫肌层中ERα mRNA和PR mRNA的表达在发情期较高,发情后期显著下降（P＜0.05）,间情期降到最低,发情前期显著回升（P＜0.05）,且达到最高值;ERα和PR蛋白发情期表达最强,间情期最弱,但其间无显著差异（P＞0.05）。【结论】ERα和PR在牦牛子宫内膜和肌层中随发情周期不同呈周期性变化,参与调节发情周期不同阶段牦牛子宫内膜及肌层功能的发挥。     

小鼠子宫内膜雌激素受体表达规律的研究

为探讨雌激素对子宫内膜容受性的影响,实现主动干预子宫内膜容受性、提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率,本研究利用免疫组化法检测了雌激素受体在小鼠发情周期子宫内膜中的表达规律.结果显示,自然发情受孕组、自然发情假孕组(对照组)和超数排卵组小鼠在见栓后第2天,子宫内膜上雌激素受体(ER)表达量3组之间差异不显著(P＞0.05);之后的第4、6、8天,超数排卵组雌激素受体表达量显著高于其他2组(P＜0.05);自然发情受孕组小鼠子宫内膜中ER的表达在第4、6天时显著高于自然发情假孕组(P＜0.05),在第8天时,自然发情受孕组小鼠子宫内膜中的ER阳性率与自然发情假孕组差异不显著(P＞0.05).与自然发情受孕组相比,自然发情假孕组和超数排卵组小鼠子宫内膜容受性下降,窗口期开放延迟,而自然发情假孕组和超数排卵组差异不明显(P＞0.05).以上结果表明,雌激素通过ER对小鼠胚胎着床及窗口期子宫内膜容受性变化具有调节作用.     

不同发育期大鼠乳腺组织中雌激素受体α的表达

为了探讨不同发育时期大鼠乳腺中雌激素受体α(Estrogen receptor,ERα)的表达情况,采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的ERα进行了半定量研究。结果表明,妊娠和泌乳期大鼠乳腺组织中的ERα表达水平均低于处女期,且差异显著(P<0.05);整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;随着泌乳期的进行,ERα的表达水平增高,但差异不显著(P>0.05)。表明ERα可能参与了乳腺细胞的发育和凋亡。     

子宫内膜癌组织雌激素受体、孕激素受体和PTEN的检测及临床意义

目的了解雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法采用S-P免疫组织化学法对107例子宫内膜癌组织中的ER、PR和PTEN基因表达进行检测,并结合其临床表现结果作统计学分析。结果不同临床分期、组织学分级、肌层浸润深度的子宫内膜癌组织中ER、PR的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01),有或无盆腔淋巴结转移的子宫内膜癌组织中的ER、PR表达差异均无统计学意义(P>0.05);不同组织学分级的子宫内膜癌组织中PTEN表达差异有统计学意义(P=0.05),而不同临床分期、肌层浸润深度及盆腔淋巴结转移情况的子宫内膜癌组织中的PTEN表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论检测ER、PR有助于了解子宫内膜癌的生物学行为,可作为子宫内膜癌术前或(和)术后的治疗参考。     

G15对发情周期小鼠卵巢表皮生长因子受体表达的影响

【目的】研究G蛋白偶联雌激素受体(G-protein-coupled estrogen receptor,GPER)对发情周期小鼠卵巢表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。【方法】间情期小鼠腹腔注射GPER抑制剂G15,按注射剂量0.3,1.5和7.5nmol/只设3个注射组,另设腹腔注射等体积生理盐水的对照组;药物注射后,依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠的卵巢,用免疫组织化学SP法和RT-PCR法分别检测各组小鼠发情周期不同阶段卵巢EGFR及其mRNA的表达。【结果】EGFR免疫组化阳性产物主要分布于卵巢的各级卵泡中,阳性染色随卵泡发育而逐渐增强,其中颗粒细胞越靠近卵母细胞染色越强,发情周期卵巢EGFR相对表达量表现为发情期发情前期间情期发情后期。小鼠注射G15后,各情期卵巢中EGFR的表达呈G15剂量依赖性减弱,除发情后期外,均极显著下降(P0.01);1.5和7.5nmol/只G15注射组各情期EGFR的相对表达量无显著差异(P0.05),但均极显著低于0.3nmol/只G15注射组(P0.01)。EGFR mRNA的变化规律与EGFR相对表达量的变化趋势完全一致。【结论】G15可在一定程度上通过GPER下调发情周期小鼠卵巢中EGFR的表达,从而影响发情周期卵巢的功能。     

GPER激动剂对发情周期小鼠卵巢EGFR表达的影响

【目的】探讨G蛋白耦联雌激素受体(G-protein-coupled estrogen receptor,GPER)激动剂对卵巢表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响,为阐明GPER和EGFR在卵巢功能维持中的作用奠定基础。【方法】取间情期小鼠,将其分为40,200,1 000ng/只G-1腹腔注射组和对照组(腹腔注射等体积生理盐水),每组20只,各组小鼠进行相应的处理。注射G-1后,依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠各5只,脱颈处死,迅速取出卵巢,采用免疫组织化学SP法和实时定量RT-PCR法,研究不同剂量GPER激动剂G-1对发情周期小鼠卵巢EGFR分布及其mRNA表达的影响。【结果】EGFR在小鼠卵巢的各级卵泡、黄体和间质中均有表达,且在卵泡颗粒细胞和卵母细胞中表达最明显,在黄体和间质中的表达较微弱。同一发情时期卵巢中,EGFR的相对表达量随注射G-1剂量的增加而升高,除发情后期外,其他3个时期以1 000ng/只G-1注射组均极显著高于对照组(P0.01);间情期和发情前期则以200ng/只G-1注射组显著高于对照组(P0.05)。各组发情周期小鼠卵巢中EGFR mRNA表达量的变化规律与EGFR相对表达量的表现基本一致。【结论】G-1对发情周期卵巢中EGFR的表达有一定的上调作用,提示GPER可介导雌激素经EGFR信号级联参与卵巢周期性生殖活动和卵泡生长发育的调节。     

甘加型藏绵羊发情周期内输卵管和子宫中MTR1a mRNA的表达

旨在研究褪黑素受体(MTR1a)基因在甘加型藏绵羊(Ganga Tibetan ovis aries)输卵管和子宫组织中的表达规律,选取发情周期内正常且未孕的甘加型藏绵羊32只,应用qRT-PCR方法检测输卵管和子宫组织中MTR1a基因的表达差异。结果显示:在整个发情周期中,甘加型藏绵羊输卵管和子宫中均有MTR1a mRNA表达。在发情前期、发情期、发情后期、间情期4个阶段,输卵管组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.604±0.253、 0.033±0.031、 0.202±0.151和1.000±0.221,间情期的相对表达量最高,与发情期差异极显著,与其他时期差异显著;子宫组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.188±0.086、0.525±0.347、1.878±0.209和1.000±0.094,发情后期的相对表达量最高,与其他3个时期差异极显著。发情周期内MTR1a基因在输卵管和子宫中的表达变化规律表明褪黑素(Melatonin,MT)在动物排卵、受精及早期胚胎发育过程中起调节作用。     

豚鼠发情周期不同时期的子宫LHR mRNA差异表达研究

 【目的】克隆豚鼠子宫黄体生成素受体(LHR)基因片段并分析其进化关系,研究豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期不同时期的表达特性。【方法】以豚鼠子宫总RNA为模板,根据小鼠、大鼠、猪LHR保守区设计引物,RT-PCR扩增LHR基因片段。筛选阳性克隆测序,采用DNAMAN软件分析比对同源性。以?-actin为分子内参,采用优化的半定量RT-PCR技术,测定豚鼠发情周期不同时期的子宫组织LHR mRNA表达量。【结果】测序得到686 bp的剪接变异体1和缺失75 bp 4号外显子的剪接变异体2。686 bp序列与人类LHR mRNA序列同源性为83.8%,与牛、猪及绵羊LHR mRNA序列同源性分别为84.6%、84.2%及83.6%,而与大鼠和小鼠LHR mRNA序列同源性则分别高达93.7%和99.4%。LHR mRNA在豚鼠整个发情周期的子宫中都有表达,发情周期第0天的表达水平为0.635 ± 0.0194,第4天为0.617 ± 0.099,均显著低于第8天的表达水平(P＜0.05),随之在第12天升至1.218 ± 0.049。【结论】克隆的片段为豚鼠LHR基因的部分序列,其mRNA存在着剪接变异体。豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期第0、4天表达水平较低,第12天升至最高,即发情周期不同时期的LHR mRNA表达呈现明显的规律性,该结果为探究哺乳动物非性腺组织中LHR的功能及生殖内分泌调控机制提供了理论依据。     

姜曲海母猪初情期前生殖器官雌激素受体mRNA表达丰度的研究

采用非同位素标记原位杂交组织化学方法,检测姜曲海母猪初情期前(初生及15、30、45、60日龄)卵巢和子宫中雌激素受体(ER)mRNA的表达丰度。图文分析系统扫描结果显示：初生卵巢内ER mRNA表达不明显,15～45日龄时阳性率逐渐上升,60日龄时略有下降,阳性斑点主要集中于原始、初级、次级各级卵泡,且大卵泡阳性斑点较小、卵泡密集;子宫内ER mRNA阳性率与日龄呈正相关,且阳性斑点主要出现在子宫内膜腺体中,基质部分较少。     

姜曲海母猪子宫雌二醇和孕酮受体含量的变化

以长白母猪为对照,分析了1月龄、发情期和间情期姜曲海母猪子宫细胞质雌二醇受体(CER)和细胞核雌二醇受体(NER)以及细胞质孕酮受体(CPR)和细胞核孕酮受体(NPR)。3个时期该猪子宫CER分别为351、410和367fmol/mgDNA,其Kd值分别为7.1、4.8和4.0nmol;子宫NER分别为245,1390和620fmol/mgDNA,Kd值为3.7、6.6和4.4nmol;CPR分别为251、364和147fmol/mgDNA;NPR分别为232、337和184fmol/mgDNA。在发情期和间情期,姜曲海母猪子宫NER以及与细胞质受体的比值均比长白母猪高,说明此时姜曲海母猪子宫对雌二醇具有较高的敏感性。性成熟后,试验猪的雌二醇受体和孕酮受体均受它们配体激素的调节。     

小鼠动情周期中卵巢内卵泡和黄体的动态组织学观察

本实验通过对17只昆明白小鼠动情周期中卵泡和黄体等组织学观察，结果表明：0d，初级卵泡数达其最高值，中小型有腔卵泡数处于一个峰值；1d，大型有腔卵泡数达其最高值，有成熟卵泡出现；2d，中小型有腔卵泡处在又一个波峰，成熟卵泡达其最高值；3d，大量黄体和间质腺出现；4d，萎缩卵泡和间质腺达其最高值．     

荆豆凝集素-1受体在犬子宫内的分布与激素调节

采用组织化学方法对荆豆凝集素-1(ulex europaeus agglutinin-1,UEA-1)受体在发情周期和早期妊娠犬子宫内的分布以及激素调节进行了研究。结果显示,UEA-1受体主要存在于犬子宫内膜腔上皮和腺上皮,其表达量随妊娠阶段的不同而发生动态性变化。UEA-1受体在休情期犬子宫内未见表达,而在发情期犬子宫内膜腔上皮和腺上皮内的表达量很高。在早期妊娠犬子宫内,在妊娠第6天和12天犬子宫内的表达量较低,此后其表达量逐渐增加,在妊娠第17天时,UEA-1受体在子宫内膜腔上皮和腺上皮内的表达量达到峰值,此后其表达量又逐渐下降,在妊娠第23天时未见表达。注射雌激素可明显促进卵巢切除后犬子宫内膜UEA-1受体的表达。结果表明,犬子宫内UEA-1受体的分布与胚胎着床前胚胎与子宫内膜之间的黏附和植入有关,UEA-1受体在犬子宫内的表达受母体分泌的激素所调控。     

小鼠发情周期观察与最佳超排时期的确定

实验以阴道涂片的方法观察ICR小鼠不同发情周期阴道上皮细胞的变化类型,并同时记录其外阴部的特点,根据小鼠不同发情周期所表现出的阴部特点依次将其分为发情前期(实验1组)、发情期(实验2组)、发情后期(实验3组)、间情期(实验4组)4个实验组别。超排处理后比较不同实验组与对照组(发情周期未观察小鼠)的超排效果。实验结果表明:处于阴道口紧闭的间情期和外阴略肿胀呈粉红色、阴道口开张、腔内浆液性液体较多的发情前期小鼠在超排成功率、每只小鼠平均可用胚胎数上均好于对照组和其他组别。     

小鼠发情周期不同时期超数排卵效果的研究

实验分析了108只昆明白小鼠发情周期与超数排卯的关系，结果表明在发情周期不同时期进行超数排卵，效果有差异，以发情初期和间情后期超数排卵效果最好，见栓率高达84．20％，3．5d取胚，平均胚胎数达30．57枚，而且胚胎的质量也最好，多数是桑椹胚和囊胚，占胚胎总数的78．73％。     

雌激素对小鼠子宫BDNF、NGF表达的影响

以21日龄雌性小鼠为研究对象,用雌激素处理一周后收集子宫,苏木素-伊红(HE)染色法观察到子宫发生水肿、内膜外膜明显增厚。提取子宫总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量和Western-Blot方法检测雌激素对子宫中神经营养因子BDNF及NGF的表达。荧光定量结果表明:试验组BDNF表达显著升高、NGF表达显著降低。Western-Blot结果与荧光定量结果一致。这说明雌激素能够调节小鼠子宫中BDNF和NGF的表达。     

5-HT及5-HT1A受体在不同妊娠阶段大鼠子宫中的分布

 【目的】研究5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）及5-HT1A受体在SD大鼠妊娠期子宫中的分布情况和变化规律。【方法】选取均为正常妊娠的30 只雌性SD大鼠分为妊娠3 d、妊娠5 d、妊娠7 d、妊娠13 d、妊娠19 d及产后第1天6组,处死各组大鼠,取子宫制作石蜡切片,经免疫组织化学SP 法染色后,进行观察分析。【结果】5-HT及5-HT1A受体免疫阳性产物广泛存在于子宫内膜上皮细胞、子宫腺上皮细胞、血管内皮细胞、基质细胞、蜕膜细胞、免疫细胞及肌纤维中;5-HT在妊娠7 d和妊娠13 d着色最深,5-HT1A受体在妊娠13 d着色最深。5-HT及5-HT1A受体免疫阳性产物相对表达量的T检验表明,子宫内膜5-HT在妊娠7 d和妊娠13 d的表达较妊娠3 d、妊娠5 d和产后极显著的增加（P＜0.01）,较妊娠19 d显著增加（P＜0.05）;子宫肌层5-HT在妊娠19 d的表达较妊娠7 d显著减少（P＜0.05）,较妊娠13 d极显著的减少（P＜0.01）。子宫内膜5-HT1A受体在妊娠13 d较妊娠3 d、妊娠5 d、妊娠19 d及产后极显著的增加（P＜0.01）,较妊娠7 d显著增加（P＜0.05）;子宫肌层5-HT1A受体在妊娠13 d较妊娠各个时期极显著增加（P＜0.01）。5-HT和5-HT1A受体在妊娠期子宫中的表达,具有极显著的正相关性。【结论】5-HT和5-HT1A受体在妊娠期子宫中的表达具有一定规律,5-HT通过5-HT1A受体参与妊娠的调节。     

Effects of Different Progesterone Plugs on Estrous Control in Ewe

In breeding season and non-breeding season, the effects of three kinds of progesterone plugs on estrous control in ewes were studied. Meanwhile, the advantages and the disadvantages of the progesterone plugs were analyzed. The results showed that there were no significant difference among three progesterone plugs on modulating the ewes＇ estrus and pregnancy, and affecting estrous rate and fecundation rate （P〉0.05）. It was observed that the progesterone plug produced by Animal Husbandry Research Center of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences could modulate the ewes＇ estrus and pregnancy effectively, and the low cost and convenience in operation made it popularize in the reproducation of sheep widely.     

大重叠度无人机遥感影像的三维建模方法研究

通过对不同饲养方式下的山羊共373只(A组66只,全放牧;B组89只,放牧和舍饲相结合;C组218只,全舍饲)用孕酮阴道海绵栓(PRID)结合PGF2α进行同期发情处理,试情公羊法鉴定母羊发情情况,发情结束后剖检部分山羊,检查卵巢排卵点情况,以比较不同饲养方式下的同期发情效果.结果表明:全舍饲下的山羊同期发情率为85.78%,高于放牧的66.67%、半舍饲半放牧的59.55%(P＜0.01);出现发情的时间短于其他两种饲养方式(P＜0.01);放牧方式下发情持续时间最长,多于半舍饲(P＜0.05)和全舍饲方式(P＜0.01).B组80%(4/5)、C组86.49%(32/37)的母羊有经排卵形成的1～2个排卵点(或新生黄体).说明饲养方式是影响山羊同期发情效果的因素之一.