棕榈科植物DNA的提取及SRAP引物筛选

采用CTAB法提取棕榈科植物基因组DNA,选用4个棕榈科植物DNA作模板,对100个SRAP引物组合进行筛选,以条带清晰多态性丰富为引物筛选原则,最后共筛选出14个组合作为棕榈科植物SRAP分子标记的核心引物,为后续SRAP分析提供依据。同时还对SRAP-PCR扩增程序进行优化,在不影响扩增效果的前提下,节约了大量实验时间。     

棕榈科植物DNA的提取及SRAP引物筛选

采用CTAB法提取棕榈科植物基因组DNA,选用4个棕榈科植物DNA作模板,对100个SRAP引物组合进行筛选,以条带清晰多态性丰富为引物筛选原则,最后共筛选出14个组合作为棕榈科植物SRAP分子标记的核心引物,为后续SRAP分析提供依据。同时还对SRAP-PCR扩增程序进行优化,在不影响扩增效果的前提下,节约了大量实验时间。     

山核桃基因组DNA提取及RAPD引物筛选

分别用SDS法、CTAB法、简易CTAB法及高盐低pH法提取山核桃干叶的基因组DNA并进行了检测比较.结果显示,SDS法更适合于山核桃基因组DNA的提取;对600条10碱基的随机引物进行了初筛和复筛,结果筛选出了20条扩增多态性强、稳定性好的引物,作为全部基因纽的扩增引物.     

藏獒基因组DNA提取及RAPD引物筛选

分别采用酚-氯仿法和改进的盐析法对藏獒血液基因组DNA进行了提取,并对可用于藏獒RAPD分析的随机引物进行了筛选.结果表明,酚-氯仿法提取的藏獒血液基因组DNA在浓度和纯度上均显著高于改进的盐析法(P<0.05),并且通过筛选得到了27条可用于藏獒RAPD分析的随机引物.     

降香黄檀SRAP分子标记的引物筛选

采用改良CTAB法提取降香黄檀基因组DNA,选用4个降香黄檀DNA作模板,对256个SRAP引物组合进行筛选。以条带清晰、多态性丰富为引物筛选原则,最后共筛选出25个组合作为降香黄檀SRAP分子标记的核心引物,为后续SRAP分析提供依据。     

决明DNA提取、SRAP-PCR优化及引物筛选

以决明幼叶为试验材料,对6种DNA提取方法进行比较,并通过单因子梯度比较试验,对SRAPPCR扩增体系中DNA和引物浓度进行优化,在此基础上再对引物进行筛选,随后对不同方法提取的DNA运用优化的SRAP-PCR体系再次进行扩增验证。结果表明改良CTAB法是决明DNA提取的最佳方法;20μL的SRAP-PCR体系中模板最佳质量浓度为2.5mg/L,引物浓度为0.4μmol/L;运用优化体系从180对引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物72对。     

绣线菊属植物的DNA提取和RAPD引物筛选

以10种绣线菊属植物资源为材料,分别用SDS法、高盐低pH法及改良的CTAB法对幼嫩叶片进行DNA提取并进检测比较,利用经过检测的模板对RAPD引物进行筛选。结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA可以用于RAPD分析。对200条10碱基的RAPD引物进行了初筛和复筛,筛出了30条扩增多态性强、稳定性好的引物,作为全部基因组的扩增引物。     

牡丹的基因组DNA提取与ISSR引物筛选

为了研究牡丹种质资源的遗传多样性和DNA鉴定,采用ISSR标记的方法来进行试验,即采用改良的CTAB法从成熟干燥的牡丹叶片中提取基因组DNA,其质量检测采用琼脂糖凝胶电泳法和超微量分光光度计法,用优化的ISSR-PCR反应系统,对加拿大哥伦比亚大学(University of British Columbia,UBC)...     

云南紫苏的种子DNA提取和RAPD引物筛选

 以保存多年的云南紫苏种子为材料,对其DNA提取和RAPD引物筛选进行了研究。结果表明:从活力很低的紫苏种子提取的DNA也有较高的质量,可以用于RAPD分析;从86个随机引物中筛选出了42个显示紫苏遗传差异的多态性引物。     

猕猴桃属植物通用型SSR分子标记引物的筛选及应用

【目的】基于猕猴桃全基因组数据,开发、筛选一批多态性高、通用性强的SSR引物,为猕猴桃属种质资源遗传多样性分析、品种鉴定等奠定基础。【方法】基于‘红阳’猕猴桃全基因组序列,设计并合成435对SSR引物,采用荧光标记毛细管电泳进行等位变异检测。首先,采用遗传差异较大的5份猕猴桃种质资源对引物进行有效性筛选;其次,选择9个物种或杂交组合的16份猕猴桃种质资源开展引物复筛;最后,利用所选引物对国家猕猴桃种质资源圃内猕猴桃属51个类型共225份种质资源进行基因分型及亲缘聚类分析。【结果】从435对引物中初筛到216对有效性引物,经复筛确定分布于29条染色体上的67对引物为最终核心引物。67对引物在16份种质中共得到842个等位变异,每个位点检测到等位变异6—18个,平均等位基因数（Na）为12.57个;有效等位基因数（Ne）为3.27(A-Geo-149)—13.84(A-Geo-407)个,平均为8.18个;观测杂合度（Ho）为0.60(A-Geo-073)—0.93(A-Geo-158),平均为0.77;期望杂合度（He）为0.72(A-Geo-149)—0.92(A-Geo-101、A-...     

亚麻耐盐碱ISSR标记引物筛选的研究

为选育耐盐碱亚麻品种,探讨亚麻耐盐碱分子辅助育种手段,以亚麻耐盐碱材料7000 ha-1和不耐盐碱材料原05-10为材料,对100条ISSR引物进行了筛选。结果表明：筛选出25条在两个品种间有特异性的引物,为进一步ISSR标记应用于亚麻群体分析奠定基础。     

玉米叶面微生物DNA提取方法及PCR引物的筛选

传统的微生物培养方法在反映叶面微生态信息上具有局限性,因此逐渐被分子生态学所代替,而获得高质量、大片段、无偏好的总DNA是研究叶面环境微生物的基础。本文采用改进的Sambrook法、CTAB法、改良的化学法以及试剂盒法对玉米生长初期、中期、末期的叶面微生物总DNA进行提取,并对4种方法提取的DNA片段的大小和产量进行综合评价。将得到的DNA用引物357/518以及984/1387对细菌16S rDNA进行扩增;用5种常见引物NS1/fung、ITS1-F/ITS2、NS1/AM1、EF4/fung5、SSU-0817/SSU-1196对真菌18SrDNA进行扩增。结果表明:4种方法提取的DNA片段均适用于PCR,但DNA的得率和纯度有一定差别,其中以试剂盒提取效果最好。PCR结果显示,除化学法外,其他3种方法提取的DNA均能够获得目的条带;并通过比较得出引物984/1387对16S rDNA以及ITS1-F/ITS2对18S rDNA扩增效果较好且扩增量最大。     

SRAP分子标记及其应用

相关序列多态性(SRAP)是近年来发展起来的一种新型分子标记系统,具有简便、稳定、中等产率、高共显性、易于测序等优点.它利用独特的引物设计对ORFs进行扩增,正、反引物分别与外显子和内含子(或启动子)区域配对,因不同物种、不同个体的内含子、启动子与间隔区长度不等而产生多态性.SRAP-PCR扩增程序采用复性变温法,前5个循环复性温度为35℃,后35个循环为50℃.目前SRAP已在植物图谱构建、遗传多样性评价、基因定位和比较基因组学等方面成功应用.     

煤绒菌(Fuligo sp.)DNA提取方法的研究及用于扩增EF1A基因片段的引物设计

采用氯化苄法提取煤绒菌的基因组DNA,并成功获得PCR产物.同时采用Primer 5.0软件设计得到延长因子EF1A特异性引物EF243、ER824和ER1001,用这些引物对煤绒菌的延长因子EF1A基因进行半巢式PCR扩增获得成功.     

长果种黄麻DNA的提取及SRAP分子标记体系的建立

以宽叶长果和甜麻杂交产生的F2代为材料,研究长果种黄麻DNA的提取方法和SRAP分子标记技术中的主要影响因素(包括模板DNA浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度及上下游引物浓度).最终建立了适于长果种黄麻DNA提取的CTAB法与SRAP-PCR反应体系(25 μL):模板DNA 100 ng,引...