解淀粉芽孢杆菌液体发酵动态变化规律的研究

研究采用自行分离纯化的M-01解淀粉芽孢杆菌菌株,利用自行研制的液体发酵器进行培养,在温度(35±0.2)℃自动控制条件下,研究其发酵液p H、活菌数、芽孢率、还原糖、氨基氮及微生物总蛋白的动态变化规律,并同时对发酵液温敏脱水后的干燥物进行相关指标的质控检测。结果表明,菌株液体培养24 h,活菌数(146.68±4.05)亿CFU/m L,芽孢率(91.76±1.50)%;干燥物芽孢数(141.05±1.70)亿CFU/g、含水率(5.70±0.04)%及杂菌率(0.585±0.004)%。     

实时荧光定量PCR技术及其在蜜蜂疾病诊断中的应用前景

实时荧光定量PCR技术是一种建立在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术,它不仅实现了对DNA模板的定量,而且具有灵敏度高、特异性和可靠性强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、实时性和准确性的特点,目前已广泛应用于基因表达、基因检测、单核苷酸多态性的测定、诊断遗传缺失、细胞因子的表达分析、动物疾病诊断等现代生物医学领域方面的研究。对实时荧光定量PCR技术的原理、技术发展、优缺点及其在蜜蜂疾病诊断中的应用与研究进展进行简要概述。     

芽孢杆菌在豆粕固态发酵中的应用研究

研究利用芽孢杆菌对豆粕进行固态发酵试验,通过监测发酵前后的酸溶性蛋白(TCA-N)含量的变化来评价发酵的效果。菌株组合JM1+JM3正交实验后得到的最佳发酵工艺条件为:料水比为1:0.6,初始发酵温度为34℃,接种量为10%,菌种比(JM1:JM3)为1:1,灭菌时间为20 min,发酵时间为48 h。发酵后样品中粗蛋白含量从50.6%增加到54.1%,TCA-N含量从2.4%增加到38.8%,大豆肽含量从1.8%提高到29.5%,乳酸含量从0.7%增加到4.7%,游离氨基酸含量从5.57 mg/g增加到92.65 mg/g。SDS-PAGE电泳分析的结果表明,发酵后大豆抗原已经完全被分解,大分子蛋白质基本上都被降解成10 kD以下的小分子肽,各种主要抗营养因子的降解率达90%以上。     

解淀粉芽孢杆菌在畜禽养殖中的应用

解淀粉芽孢杆菌是自然界中广泛存在的非致病性革兰氏阳性需氧菌。该菌在代谢过程中可以产生大量的生物活性物质,有抑菌、免疫、抗氧化等作用,该菌可产生多种消化酶等,并对环境有极强的适应性和抗逆性,故而被广泛应用于畜禽养殖中。本文针对解淀粉芽孢杆菌的特点,总结分析其在畜牧、水产养殖业中的应用现状,以期为今后研究和开发利用解淀粉芽孢杆菌提供一定的参考。     

快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价

为建立一种能快速鉴定炭疽杆菌的检测技术,本研究根据炭疽杆菌染色体上的TJHP和BA5345 2个靶点,分别设计4对引物和2个探针,对10份已知浓度的炭疽杆菌DNA和阴性对照菌株DNA进行检测,将浓度最大的炭疽杆菌DNA进行10倍倍比稀释,用于检测4对引物及其探针的灵敏度,并选出2个针对TJHP和BA5345靶点的特异性强及灵敏度高的引物和探针进行重复性实验。结果显示,4对引物及其探针特异性较强,FP2/RP2和FP4/RP4 2对引物的灵敏度为4.513×10^-5 ng/μL;该荧光定量PCR方法重复性好(t=1.178,P=0.332)。FP2/RP2和FP4/RP4 2对引物及其探针可用于炭疽杆菌感染初期的快速筛查以及临床辅助诊断。     

布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验,并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳,该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88～89℃,结核杆菌Tm值为90～91℃,对其他供试的菌株则为阴性;该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝.μL-1,结核杆菌为50拷贝.μL-1,两病原都存在时为100拷贝.μL-1,比常规PCR高100倍。利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR,对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测,符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌,并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。     

化脓隐秘杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

本试验旨在建立检测化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes,A.pyogenes)特异、灵敏的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank公布的化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)基因高保守序列,设计特异性引物和探针建立检测体系,用于化脓隐秘杆菌的快速检测,并对该方法的特异性和灵敏度进行检测。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法仅对化脓隐秘杆菌的检测结果为阳性;该方法最低检测DNA浓度为77.6 fg,最低检测细菌浓度为63 CFU/mL。采用本研究建立的方法检测23份林麝临床病例样品,共鉴定出16株化脓隐秘杆菌,与API Coryne生化鉴定方法的结果相同。本研究为化脓隐秘杆菌的检测提供了一种灵敏、特异、快速的检测方法,其可用于化脓隐秘杆菌的诊断和流行病学调查。     

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术.它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点.文章就常用的4种方法,即DNA结合染色、水解探针、分子信标和杂交探针的原理和特点进行介绍,同时综述了荧光定量PCR技术在实践中的应用.     

解淀粉芽孢杆菌抑菌作用及在养猪业中的应用

随着生猪产业的快速发展,肠道健康问题备受关注。病原微生物感染和各种应激造成猪腹泻、肠道功能紊乱,甚至导致猪死亡。通过使用微生态制剂等营养调控因子可以缓解这些问题。在前人的研究中,从解淀粉芽孢杆菌中分离纯化了多种有效抑菌物质,并明确了其中部分物质的组成结构,为进一步阐明解淀粉芽孢杆菌对细菌和真菌抑制能力提供了理论基础。本文结合解淀粉芽孢杆菌抑菌机理,对其在养猪业中的应用情况进行综述,为开发解淀粉芽孢杆菌作为益生素的应用价值提供参考。     

实时荧光定量PCR技术

荧光定量PCR技术是一种目前国内外应用较为广泛的定量PCR技术,是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的,具有灵敏度高、特异性强、线性关系好、操作简单等优点,不但能够用于基因定量检测,还能准确定量疾病相关基因的表达,现已广泛应用于人类和动物疾病的快速检测、定量分析、早期诊断、基因分型等方面。它可以采用绝对定量和相对定量2种方式实现定量检测,但都有各自的优缺点,需根据具体的试验选择合适的定量方式,从而得到更准确的试验结果。提高荧光定量PCR技术的特异性和灵敏度需从多方面着手,主要指特异性探针及引物的设计,选择合适的Mg2 浓度、引物和探针浓度、循环数等。     

发酵豆粕在断奶仔猪生产中的应用研究

早期断奶仔猪的消化酶系统尚未发育完全,对于植物蛋白质的消化能力弱,且对抗营养因子较敏感,普通豆粕难以适应断奶仔猪饲养需要,而发酵豆粕作为一种新型的蛋白质饲料原料,基本不舍有抗营养因子,却富含多种小肽和益生素,因此近年来发酵豆粕被应用到仔猪的生产中,且收到较好的效果.本文就发酵豆粕的营养特性、在断奶仔猪生产中的应用效果及...     

荧光定量聚合酶链反应检测乳品中肉毒梭菌

通过实时荧光定量聚合酶链反应方法检测乳粉与乳清粉中的A、B、E、F四型肉毒梭菌,对肉毒梭菌荧光定量聚合酶链反应试剂盒中的阳性对照品及10、102、103、104倍梯度稀释的阳性对照品做出AB混合型和EF混合型的标准曲线,循环域值具有极好的特异性、重复性和准确性.对通过国标方法与中华人民共和国出入境检验检疫行业标准方法检测长出疑似菌落的82份乳粉与乳清粉采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测,均检测不到样品中含A、B、E、F四型肉毒梭菌.     

枯草芽孢杆菌固体发酵豆粕条件的优化

本试验采用枯草芽孢杆菌对豆粕进行固体发酵,通过正交试验探讨不同碳源组合、发酵时间、培养温度、水分比例、接种菌量等因素对发酵豆粕粗蛋白质增加率和蛋白质水解度的影响。结果表明,影响枯草芽孢杆菌固体发酵豆粕粗蛋白质增加率的条件因素的主次顺序为玉米粉比例>培养时间>温度>麸皮比例>水分比例>次粉比例>接种菌量,表观分析固体发酵条件最佳组合为A₃B₁C₃D₃E₂F₂G₁,粗蛋白质增加率达到28.05%;影响发酵豆粕蛋白质水解率的条件因素的主次顺序为温度>培养时间>玉米粉比例>接种菌量>麸皮比例>次粉比例>水分比例,表观分析固体发酵条件最佳组合为A₂B₃C₁D₃E₃F₃G₁,蛋白质水解度达到46.46%。枯草芽孢杆菌固体发酵豆粕的粗蛋白质增加率与蛋白质水解率存在明显的正相关(R²=0.556)。     

枯草芽孢杆菌及其发酵豆粕对蛋鸡肠道菌群和粪便中N、S含量的影响

研究旨在探讨枯草芽孢杆菌及其发酵豆粕对海兰褐蛋鸡日粮、胃肠道内容物和粪便中pH、微生物菌群数量和N、S含量的影响。选取486只健康海兰褐蛋鸡,随机分为对照组(玉米-豆粕基础日粮)、试验1组(添加0.05%枯草芽孢杆菌)和试验2组(添加2.5%枯草芽孢杆菌发酵豆粕),采集胃肠道内容物和粪便样本,以稀释涂平板法测定菌群数量,并分别以凯氏定氮法和硝酸镁法测定N、S含量。结果显示,枯草芽孢杆菌及其发酵豆粕能减少日粮中大肠杆菌等有害菌群数量,显著增加枯草芽孢杆菌和乳酸菌等有益菌群数量(P<0.05),降低pH值(P<0.05);饲喂56d后,蛋鸡胃肠道内容物和新鲜粪便中大肠杆菌等有害菌群数量显著下降(P<0.05),乳杆菌、枯草芽孢杆菌和乳酸菌等有益菌群数量显著增加(P<0.05),pH值显著下降;将粪便自然放置7d后,其N损失显著下降(P<0.05)。结果表明,枯草芽孢杆菌及其发酵豆粕能增加蛋鸡日粮中有益菌群数量,改善肠道微生态系统,减少粪便放置过程中的N损失。     

利什曼原虫实时荧光定量PCR方法的建立

以利什曼原虫的小环状动基体DNA(Leishmaniak DNA)为靶基因,建立实时荧光定量PCR检测利什曼原虫的方法。根据GenBank报道的利什曼原虫小环状动基体DNA保守序列设计合成特异性引物,经PCR扩增后与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞。挑选阳性克隆重组质粒经鉴定正确后,作为模板建立SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线。结果构建的标准曲线线性关系良好,相关系数为0.996,而且特异性强,重复性好。本研究成功建立了实时荧光定量PCR检测利什曼原虫的方法,该方法可用于利氏曼原虫病的诊断、流行病学监测和科学研究。     

荧光定量PCR技术在疾病检测上的应用

实时荧光定量PCR技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,以直接探测PCR过程中荧光信号的变化获得定量的结果。因其具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点,成为当前疫病检测广泛采用的分子生物学诊断技术。本文就实时荧光定量PCR技术在疾病检测上的应用作一综述。     

发酵豆粕在犊牛饲料中的应用进展

豆粕是一种优质的植物性蛋白来源,含有丰富的氨基酸,但也含有胰蛋白酶抑制因子、抗原蛋白以及大豆凝集素等抗营养因子,容易引起犊牛消化功能紊乱,造成营养性腹泻,限制了其在犊牛上的使用量。微生物发酵可以改善豆粕的营养价值,使抗营养因子得到充分的降解,生成的小肽和有机酸有利于犊牛消化吸收和肠道健康,进而提高犊牛断奶日增重和免疫能力,降低犊牛的腹泻率和断奶应激。本文综述了豆粕经过发酵后带来营养价值的变化,并就发酵豆粕在犊牛上的应用进行概述,为其今后在犊牛中的应用提供参考。     

枯草芽孢杆菌及其发酵豆粕对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响

试验将486只54周龄海兰褐蛋鸡随机分为3组,每组6个重复,每个重复27只,分别饲喂基础日粮(对照组)、添加枯草芽孢杆菌(试验1组)及含枯草芽孢杆菌发酵豆粕(试验2组)日粮,试验期54d。结果表明,试验1组及试验2组产蛋率比对照组分别提高2.18%(P<0.01)和4.73%(P<0.01);试验2组料蛋比和破软蛋率分别比对照组降低3.98%(P<0.05)和0.53%(P<0.01);对照组及试验2组平均蛋重比试验1组分别增加0.79%(P<0.05)和0.68%(P<0.05);试验1组及试验2组蛋黄颜色比对照组分别提高32.8%(P<0.01)和37.2%(P<0.01);试验1组及试验2组蛋壳比例比对照组分别降低3.14%(P<0.01)和4.98%(P<0.01);试验2组血清尿素氮(BUN)含量显著低于其他各组(P<0.05)。说明蛋鸡日粮中添加枯草芽孢杆菌及其发酵豆粕可以显著提高生产性能和改善蛋品质。     

Aspergillus oryzae发酵豆粕对肉仔鸡生长性能及免疫功能的影响

选用160只1日龄的罗斯肉仔鸡,随机分为2个处理组,每组设4个重复,研究Aspergillus oryzae发酵豆粕(FS-BM)对肉仔鸡生长性能及免疫机能的影响。结果表明:与对照组比较,FSBM改善了肉仔鸡的生长性能与免疫功能,日增重和日采食量提高了6.78%(P<0.05)和3.09%(P<0.05),饲料转化率提高了2.98%(P<0.05);血清IgA、IgM含量增加45%(P<0.05)和33.33%(P<0.05),法氏囊和胸腺指数分别提高了44.27%(P<0.01)和10.57%(P<0.05),外周血液的T淋巴细胞转化率提高了11.59%(P<0.05)。     

发酵豆粕替代豆粕对鲤鱼生长性能和肠道组织结构的影响

本试验旨在研究发酵豆粕替代豆粕对鲤鱼生长性能和肠道组织结构的影响。选择初始均重为(49.44±0.38) g的鲤鱼720尾,随机分为3组,每组设3个重复,每个重复80尾鱼。Ⅰ组为对照组,饲喂豆粕含量为39%的基础饲料;Ⅱ和Ⅲ组为试验组,分别饲喂用发酵豆粕替代基础饲料中50%和100%豆粕的试验饲料。试验期为75 d。结果表明：1)发酵豆粕替代50%或100%的豆粕对鲤鱼的特定生长率和饲料系数均无显著影响(P>0.05),但在50%替代水平下鲤鱼的蛋白质效率显著提高( P<0.05)。2)发酵豆粕替代50%或100%的豆粕对鲤鱼的肥满度和内脏比无显著影响( P>0.05),但可使肝胰脏指数显著升高( P<0.05)。3)发酵豆粕替代50%或100%的豆粕对鲤鱼的肠长指数和中肠皱襞高度无显著影响( P>0.05),但在100%替代水平下鲤鱼的后肠皱襞高度显著升高( P<0.05)。4)电镜观察发现,豆粕组(Ⅰ组)鲤鱼的中肠和后肠均出现了轻微的病理性损伤,包括中肠出现少量上皮细胞脱落,固有层和黏膜下层中细胞成分增多,后肠上皮细胞纹状缘融合,杯状细胞减少;发酵豆粕组(Ⅲ组)的肠道组织结构比较正常。由此得出,发酵豆粕替代豆粕后对鲤鱼的生长性能没有明显的促进作用,但有利于保证肠道组织结构的正常。