2株枯草芽孢杆菌协同降解黄曲霉毒素B_1的效果

旨在研究2株枯草芽孢杆菌协同降解黄曲霉毒B1(AFB1)的作用。将2株枯草芽孢杆菌进行生理生化特性鉴定和16SrRNA序列测定后,以AFB1降解率为依据,分别进行优化培养并观察协同降解作用。结果表明:菌株K-3优化条件为装液量50mL/250mL、温度37℃、4%接种量、初始pH7.0、发酵周期48h,150r/min振荡培养,对AFB1降解率为88.07%(P<0.05);菌株K-TM装液量为50mL/250mL、温度37℃、6%接种量、初始pH7.0、发酵周期60h,150r/min振荡培养,对AFB1降解率为84.81%(P<0.05);K-3、K-TM按体积1∶2组合,对AFB1协同降解率达到88.43%。本研究为益生菌在降解黄曲霉毒素中的应用奠定理论基础及试验依据。     

玉米赤霉烯酮降解菌的分离、鉴定及其适宜降解条件的研究

试验旨在利用微生物降解法对饲料中存在的玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）进行快速、有效的消减。从不同地区采集了牛粪、羊粪及土壤样品共70份,并从中分离出164株菌株。利用环戊酮作为唯一碳源对这164株菌株进行初筛,再以ZEN作为唯一碳源对初筛菌株进行复筛并获得了8株ZEN降解菌株。采用高效液相色谱法（HPLC）对复筛得到的8株ZEN降解菌株进行ZEN降解率的测定,得到1株降解效果良好的菌株即NF-PJ-5号菌株。该菌株经16S rDNA序列比对、构建系统发育树、菌落形态观察及生理生化试验鉴定后确定为多食鞘氨醇杆菌（Sphingobacterium multivorum）。分别研究该菌株在不同温度、不同pH及不同菌液浓度条件下对ZEN的降解能力,评估菌株性质;同时,初步探究该菌株对ZEN的清除机理。结果显示,在28~32 ℃,pH 6.5~7.5,菌液浓度在2×10⁹ CFU/mL以上时,该菌株对ZEN保持较高的降解率。在30 ℃、pH 7.0、160 r/min培养48 h后,该菌株对初始浓度为10 μg/mL的ZEN降解率达到83%。综上,本试验筛选到1株ZEN降解能力较强的菌株,经鉴定为多食鞘氨醇杆菌。初步推测该菌株可通过产生胞外酶降解ZEN,同时该菌细胞壁对ZEN具有一定吸附能力。     

玉米赤霉烯酮降解菌株的筛选及鉴定

本试验旨在从土壤中筛选出能降解玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)的菌株。将土壤中分离的菌株接种至含2μg/m L ZEN的LB液体培养基中,37℃,180 r/min,培养24 h。采用间接竞争ELISA法检测ZEN的残留量,计算菌株的ZEN降解能力。并将降解ZEN能力较强的菌株进行形态学、生化特性和16S r DNA基因序列分析鉴定。结果显示:筛选出的菌株JM-1降解ZEN的能力可达26.27%,显著高于其他菌株(P0.05)。经形态学、生化特性和16S r DNA基因序列分析,菌株JM-1鉴定为蜡样芽孢杆菌。     

玉米赤霉烯酮降解菌的筛选及其活性检测

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是危害动物健康的重要真菌毒素之一,笔者旨在筛选出能够有效降解ZEN的微生物,并对其降解特性以及降解产物的致毒活性进行检测,以期筛选出高效降解ZEN的菌株。以ZEN为唯一碳源进行初筛,以菌株发酵液对ZEN的降解率为复筛指标,对降解率最高的菌株进行16SrRNA基因测序分析;并对筛选出的菌株对ZEN的降解特性进行研究,对其降解产物在MCF-7细胞上进行活性检测。初筛获得40株能生长良好的细菌,复筛筛选出降解率最高H6菌株,经16SrRNA基因测序分析,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。在37℃、180r·min-1、72h时,该菌株发酵液对1μg·mL~(-1) ZEN的降解率为95.6%,其上清液和菌悬液的降解率分别为68.93%和28.70%,对20μg·mL~(-1) ZEN的降解率为85.8%;菌株上清液经蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理后,其降解活性明显降低;该菌株ZEN的降解产物在MCF-7细胞上的增殖率显著降低。结果表明,本研究筛选出能有效降解ZEN的菌株H6,经鉴定判断为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens),该菌株分泌的胞外酶能够降解ZEN,使其类雌激素毒性显著降低。     

一株高效降解蚕蛹蛋白的菌株筛选与初步鉴定

筛选、鉴定能高效降解缫丝蚕蛹蛋白的菌株,用于提高缫丝蚕蛹生产食品和动物饲料的营养价值。从蚕蛹储藏车间及周围的土壤中收集细菌,经富集培养、干酪素平板初筛和发酵蚕蛹蛋白复筛,获得一株产蛋白酶活性较高的菌株,命名为CY21。该菌株在32℃、pH 7.0条件下培养60 h后所产蛋白酶的比活力可达到272.7 U/mg。通过形态学观察、经典生理生化试验以及16S rDNA序列系统发育分析,初步确定该菌株为芽孢杆菌属(Bacillus)与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)亲缘关系很近的一个菌株。     

梅花鹿瘤胃纤维素降解菌的分离鉴定及其酶活力测定

为获得来源于梅花鹿瘤胃的高效纤维素降解菌,本试验采集了3锯龄健康梅花鹿的新鲜瘤胃液,用羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基分离筛选纤维素降解菌,综合其形态学、生理生化特征和16SrDNA基因测序等对分离菌株进行分类学鉴定,利用DNS法对菌株的产纤维素酶条件进行初步研究,并探讨以不同物质为底物时的纤维素酶酶学特性,为后期菌株的应用提供理论数据。结果显示,本试验从梅花鹿瘤胃液中分离的菌株N-11是一株高效纤维素降解菌,经鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。产酶性质研究结果表明,该菌株产纤维素酶活力在30~45℃(最适温度为40℃),pH为6.0~7.0(最适pH 6.0),碳源含量为2%~5%(最佳接种量5%)较高;培养36h时达到产酶高峰,纤维素酶酶活力(CMCA)和滤纸酶酶活力(FPA)分别为12.563、12.414U/mL,在20~50℃或pH 6.0~8.0环境下作用1h,其相对酶活力均保持在80%以上,稳定性较好。以上结果表明,蜡样芽孢杆菌N-11具有较高的纤维素酶活力,在纤维素利用方面具有较高的应用价值。     

纳豆芽孢杆菌液体发酵培养条件的优化

研究以实验室选育的纳豆芽孢杆菌为出发菌株,采用单因素及正交试验法对纳豆芽孢杆菌的液体摇瓶发酵培养条件进行优化,确定最适发酵培养条件为种龄21 h,接种量3.5%,装液量60 mL/250 mL,转速210 r/min,温度35℃,初始pH 7.0,摇瓶发酵周期为18 h。在此条件下发酵活菌数可达790亿CFU/mL。     

降解赤霉烯酮芽孢杆菌的筛选、鉴定及性质研究

为了获得一株饲用的高效降解赤霉烯酮(ZEN)的芽孢杆菌菌株,试验通过平板扩散法和酶联免疫法进行筛选,并对降解率较高的菌株进行种属鉴定、性质和产酶情况研究。结果表明:通过筛选共得到7株功能菌,其中菌株Y-1d的降解率最高,经菌落菌体形态、16S rDNA序列分析和生理生化鉴定确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株在p H值为4.5~6.5、温度为27~47℃的范围内生长良好,对胆盐有一定的耐受性,能够产生淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶。说明试验获得一株性质优良的可用于饲用的赤霉烯酮降解菌株。     

一株短小芽胞的分离鉴定及其对屠宰牛血液的降解功能研究

本试验旨在通过筛选高效降解牛血液的菌株,以生物方式降解血液中大分子蛋白物为多肽、氨基酸等小分子产物,再制备为含氨基酸水溶肥料,从而实现屠宰牛血液的无害化环境处理和废弃蛋白资源再利用。本研究以屠宰场血液污泥为分离基质,通过酪素培养基平板和哥伦比亚血琼脂平板筛选出1株能够高效降解血液蛋白的菌株,经形态学特征、生理生化和16S r DNA序列鉴定为短小芽胞（Bacillus pumilus NWMCC0302）,该菌株的16S r DNA序列在GenBank中登录号为OL636364。通过单因素试验确定短小芽胞降解牛血液的关键因素,再采用PlackettBurman试验和Box-Behnken试验设计优化其最佳降解工艺条件。结果表明：降解的关键影响因素为初始pH、麦麸浓度、温度和接种量。最佳降解工艺条件为初始pH 7.39,牛血液体积分数10%(V/V),麦麸浓度21.31 g/L,接种量2.05%(V/V),降解温度38.11℃,对牛血液蛋白的降解率为53.83%。试验筛选出的短小芽胞具有高效降解牛血液蛋白的能力,可以为屠宰废弃血液资源的生物方式处理和循环利用提供候选菌株。     

一株同时降解玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B_1的谷氨酸棒状杆菌及其降解特性研究

试验旨在筛选同时降解玉米赤霉烯酮(ZEN)和黄曲霉毒素B_1(AFB_1)的菌株,并研究其对两种毒素的降解特征。从土壤及鸡、驴的食糜中筛选出9株可同时降解ZEN和AFB_1的菌株;编号为406的菌株经形态学观察和16S rDNA鉴定为谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamate)。谷氨酸棒状杆菌406降解ZEN和AFB_1活性成分存在于发酵上清液中,其对ZEN和AFB_1的降解率分别为50%和58%。通过热、胰蛋白酶、十二烷基硫酸钠(SDS)处理,初步确定降解活性物质为一种胞外酶。上清液对ZEN和AFB_1的最适降解温度为67℃,最适pH值为8。本研究筛选到的同时降解ZEN和AFB_1的谷氨酸棒状杆菌菌株406为食品和饲料中ZEN和AFB_1的生物降解提供菌种资源。     

玉米赤霉烯酮降解菌的分离与鉴定

以被霉菌毒素污染的饲料、健康家畜粪便、土壤等为样本,采用玉米赤霉烯酮(ZEN)毒素为唯一碳源进行ZEN毒素降解菌的驯化富集培养,并用高效液相色谱法对分离到的细菌进行ZEN毒素降解能力检测。结果显示:共筛选到14株具有能够降解ZEN的菌株,降解率在8.3%~87.1%之间,其中从石油污染土地筛选到的菌株SYA13在72 h对液体培养基中的ZEN毒素的降解能力达87.1%以上,明显高于其他菌株;对SYA13菌株从形态、生理生化特性以及16S rRNA序列进行分析,初步鉴定SYA13菌株为红球菌(Rhodococcus)。ZEN高效降解菌SYA13菌的分离鉴定,为继续研究其降解机制及实际应用奠定了基础。     

堆肥用产蛋白酶菌株的筛选、鉴定及产芽孢条件优化

为了提高畜禽粪便腐熟的效率,试验采用平板扩散法和Folin-酚试剂比色法筛选耐热产蛋白酶芽孢杆菌菌株,并对其进行种属鉴定和产芽孢条件优化。结果表明:得到一株耐热产蛋白酶活性较高的芽孢杆菌菌株N62,初步鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus);最适的培养基组成为玉米粉1.0%,黄豆饼粉1.0%,MgSO_4·7H_2O 0.02%,FeSO_4·5H_2O 0.02%;最适的培养条件为初始pH值7,装液量50 mL/250 mL,接种量8 mL,发酵时间72 h;优化后芽孢产率为95.0%。     

羽毛降解菌的筛选及其降解特性研究

本试验旨在从实验室保藏菌株中筛选出可用于羽毛降解的菌株并优化其培养条件,应用于羽毛的生物降解。以酪蛋白培养基进行菌株初筛,以羽毛为唯一有机营养源制作的羽毛培养基进行菌株复筛;通过细菌形态学观察和16S rDNA序列测定进行菌株鉴定,并对所筛菌株在羽毛培养基中的培养条件进行优化研究。结果表明：1)通过酪蛋白培养基筛选出8株能产生降解圈且透明度高的菌株。2)通过单根羽毛培养基和羽毛降解液指标测定联合方法筛选出1株可3 d降解羽毛、产可溶性蛋白的菌株NLG1。3)经鉴定并命名为贝莱斯芽孢杆菌NLG1(Bacillus velezensis NLG1)。4)菌株NLG1培养优化条件为羽毛底物浓度2.5%(m/v),初始pH 10,接种活菌数109CFU/mL,温度27℃,外加碳源为可溶性淀粉,发酵时间3 d。5)优化条件下降解羽毛,测得发酵液中可溶性蛋白含量为(32.76±0.07)μg/mL,水解氨基酸总量由27.41 mg/g提升到112.18 mg/g,测得游离氨基酸及衍生物的种类由25种增加至31种(增加的氨基酸为胱氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、α-氨基丁酸、β-氨基异丁酸、β-丙氨酸),...     

黄芪发酵菌的筛选鉴定及纤维素酶学性质试验

为分离发酵黄芪菌株,试验采取黄芪样品接种营养琼脂,置30℃环境培养。取分离菌接种纤维素刚果红琼脂,筛选能形成较大降解圈的细菌进行鉴定,并测定其纤维素酶性质。结果表明,筛选菌为解淀粉芽孢杆菌,该菌株降解圈直径(H)与菌落直径(C)的比值(H/C)为4.03。在37℃环境培养36 h酶活力达到高峰,为32.16 U/m L。在低于60℃及pH值6.0~8.0环境纤维素酶较稳定,可保持酶活力90%以上。     

豆粕植酸降解菌的筛选及发酵优化

为研究红树林中的菌株对豆粕中抗营养因子植酸的降解效果，本试验从红树林根系土壤中分离筛选到一株可降解植酸的菌株，编号为a A8，经形态、生理生化和16S rDNA基因序列检测分析确定该菌株为右旋乳酸芽孢乳杆菌(Sporolactobacillus laevolacticus)。对菌株a A8的产酶能力进行探讨，并将aA8接种于以豆粕为唯一氮源培养基中，采用L₁₆(4⁵)正交试验，对a A8植酸降解率进行优化。结果表明：植酸降解率由15.3%提高到89.1%；其最佳发酵条件为发酵碳源蔗糖，37℃发酵24 h，接种量10%(V/m)，料水比1:1.2。结果显示，aA8可高效降解豆粕中的植酸，有利于提高豆粕的营养效价及饲用价值，为活体养殖中以豆粕为原料进行饲喂提供了理论基础。     

产纤维素酶地衣芽孢杆菌的诱变选育及其产酶条件优化

为提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌(Bacillus lincheniformis)的产酶能力,本试验以前期分离的产纤维素酶地衣芽孢杆菌LY02作为出发菌株,通过紫外线对该菌株进行了诱变选育,筛选高产纤维素酶的突变株,并分别对其接种量、培养温度、培养时间、培养基初始pH和金属离子等产酶条件进行了优化。结果显示,经诱变选育后突变菌株的纤维素酶活力较出发菌株提高了34.31%。其最佳产酶培养条件为:接种量1.5%,培养温度37℃,培养时间24 h,培养基初始pH 5.0,K⁺和Ba²⁺对纤维素酶的产生有激活作用。本研究为进一步将高产纤维素酶的突变株开发为生产菌株提供了基础条件。     

梅花鹿瘤胃纤维素降解菌的分离鉴定及其酶活力测定

为获得来源于梅花鹿瘤胃的高效纤维素降解菌，本试验采集了3锯龄健康梅花鹿的新鲜瘤胃液，用羧甲基纤维素钠（CMC-Na）培养基分离筛选纤维素降解菌，综合其形态学、生理生化特征和16S rDNA基因测序等对分离菌株进行分类学鉴定，利用DNS法对菌株的产纤维素酶条件进行初步研究，并探讨以不同物质为底物时的纤维素酶酶学特性，为后期菌株的应用提供理论数据。结果显示，本试验从梅花鹿瘤胃液中分离的菌株N-11是一株高效纤维素降解菌，经鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。产酶性质研究结果表明，该菌株产纤维素酶活力在30~45℃（最适温度为40℃），pH为6.0~7.0（最适pH 6.0），碳源含量为2%~5%（最佳接种量5%）较高；培养36 h时达到产酶高峰，纤维素酶酶活力（CMCA）和滤纸酶酶活力（FPA）分别为12.563、12.414 U/mL，在20~50℃或pH 6.0~8.0环境下作用1 h，其相对酶活力均保持在80%以上，稳定性较好。以上结果表明，蜡样芽孢杆菌N-11具有较高的纤维素酶活力，在纤维素利用方面具有较高的应用价值。     

猪粪除臭菌的筛选、复配以及培养条件的优化

为探索治理畜禽粪便所产生恶臭气体对环境污染的新途径,本研究从新鲜猪粪、堆肥猪粪中分离筛选了3株对NH_3具有高效降解的菌株,分别标记为XA12、XB2、XB9。经过形态学观察、生理生化实验、16S rDNA和26S rDNA序列分析,分别鉴定为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)。通过将XA12、XB2和XB9进行复配并利用单因素试验最终确定复合微生物除臭剂的最佳除臭条件:最佳培养温度32℃,最佳接种量为10%,最佳除臭时间为54h,最适初始培养基pH为7.0。本试验通过复配制备成具有高效除臭功能的复合菌剂,为养猪场生物除臭提供依据。     

贝莱斯芽孢杆菌生物学特性及体外降解霉菌毒素研究

为了筛选一株抗逆性强、抑制致病菌、产酶及维生素等益生物质且可降解霉菌毒素的益生菌，对自主筛选得到的贝莱斯芽孢杆菌（BLS-1）进行最适温度、pH、生长曲线及产酶、抑菌能力、抗逆性研究，并通过发酵罐发酵，对发酵液中多种酶及维生素含量进行了考察；通过体外降解的方式考察BLS-1对多种霉菌毒素的降解能力。结果表明：自主筛选的贝莱斯芽孢杆菌BLS-1在pH 2.5～3.5、胆盐浓度0.1%～0.5%及胃液肠液环境中具备良好的耐酸、耐胆盐、耐胃肠液能力；最适温度37℃、最适pH为6、培养时间24～30 h时芽孢形成率最高，生长进入稳定期并于28 h达到芽孢量顶峰；菌株发酵液代谢产物及菌体对大肠杆菌具有中敏的抑制作用；发酵液中含有多种酶、维生素等益生物质，且对玉米赤霉烯酮（ZEN）、呕吐毒素（DON）、黄曲霉毒素（AFB1）、伏马毒素（FB）、赭曲霉毒素（OT）有降解作用。贝莱斯芽孢杆菌BLS-1生物学特性良好，抗逆性强，可抑制大肠杆菌，同时对玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、黄曲霉毒素、伏马毒素具有降解作用。     

产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料发酵参数的优化

研究旨在优化产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料的发酵参数,试验采用4因子5水平正交设计和二因子有重复观察值的设计方法进行,通过测定发酵底物中的植酸酶活性,确定生物饲料发酵条件参数和发酵底料组成及接种比例.研究结果表明,产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料优化发酵条件参数为温度37℃,时间周期72 h,底物初水分30%,初始pH 7.0;底料组成和接种量的优化结果:底料组成为棉粕90%和玉米10%;接种量为7.0 mL/100 g.