四川省马铃薯病毒RT-PCR检测体系的建立

根据5种主要的马铃薯病毒外壳蛋白基因序列,分别合成了5对寡聚核苷酸引物,从马铃薯病叶组织中提取出病毒总RNA,进行cDNA合成和PCR扩增,得到了与预期片段长度一致的PCR特异扩增产物。建立了马铃薯病毒检测的RT-PCR体系,并将建立的体系应用于四川省的马铃薯病毒病的检测,在基因水平上为四川省的马铃薯检测提供了新的手段。     

马铃薯卷叶病毒的RT-PCR快速检测

根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。从而建立了快速灵敏的PLRV检测方法,为PLRV的防治及检测提供了有效手段。     

多重RT-PCR快速检测禽流感病毒的研究

参考H1-H15亚型禽流感病毒(AIV)的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因,共设计4对引物,建立了2对引物扩增AIV的NP、HA基因的多重RT-PCR方法.应用此法分别对H5、H6、H9亚型AIV尿囊液RT-PCR,电泳,回收预期片段进行测序,并同Genebank的注册序列进行同源性分析.也对NDV、IBV、IBDV尿囊液以及3种亚型AIV尿囊液的2倍系列稀释样品进行检测.结果表明,3种亚型AIv尿囊液均出现2条特异性条带,经测序确证为目的扩增片段,BLAST的同源性初步判断3种AIV的亚型为H5N1、H6N2、H9N20对NDV、IBV、IBDV的RNA扩增未见2条目的条带,判断为阴性,说明该法特异性强:能对3种亚型AIV尿囊液64～128倍稀释的样品检测出AIV,表明其灵敏度高.该检测法检测的整个过程仅需4h,实现了AIV的快速检测.     

河北省马铃薯Y病毒株系分子鉴定及其RT-PCR检测

根据马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,从感染PVY的马铃薯田间病叶组织中提取出病毒的RNA,进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约800bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的基因片段大小一致,本试验建立了快速、灵敏、简便的PVY检测的方法。将RT-PCR扩增产物克隆到质粒pGEM-T上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由801个核苷酸组成,编码267个氨基酸组成的理论分子量为29kD蛋白,与PVY外壳蛋白的大小一致,与基因库登记的代表性株系相比,它们之间的核苷酸序列同源性为89 6%～98 8%,氨基酸序列的同源性为93 3%～98 5%,说明PVYCP基因具有高度的保守性(记为PVY-HBEI),与国内报道的PVY-CHU、PVY-ZHJ和PVY-ZHOU株系的氨基酸序列同源性分别为96 6%、98 5%和97 8%,与PVYN和PVYO株系的氨基酸序列同源性分别为93 6%和97 8%,从分子水平上确定PVY-HBEI归属于普通株系(PVYO株系)。     

利用斑点杂交法和RT-PCR技术检测甘蔗花叶病毒

利用地高辛标记不同长度的 DNA探针通过斑点杂交法对甘蔗花叶病毒进行检测 .结果表明 ,可检测出2 0 0 mg稀释度为 1/10 4 病叶中的病毒 .但不同长度的探针表现出一定的差异 ,较长的探针显示出较高的灵敏度 .根据克隆所得的病毒基因序列设计特异引物 ,利用反转录 -聚合酶链式反应的方法进行检测 ,同样得到较好的检测效果 ,但灵敏度略低于杂交检测 .     

柑橘主要病毒病的RT-PCR法鉴定

为建立主要柑橘病毒病准确、快速的分子检测体系,在表现柑橘衰退病（CTV）、柑橘裂皮病（CEV）和柑橘碎叶病（CTLV）典型症状的病树上采叶样提取总RNA进行反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分析．病毒鉴定用的特异引物为CTV3对、CEV2对和CTLV1对．通过不同退火温度的测试,发现所有参试引物均能在56℃退火时扩增出相应的病毒特异带,从而在保证鉴定准确性的前提下,极大地简化了鉴定程序．用建立的RT-PCR体系对云南、重庆、湖南等地有衰退病、裂皮病和碎叶病症状的样品进行检测,结果表明该体系均能对相应病毒进行准确检测．     

兰州百合外植体的建立

本试验以兰州百合带腋芽的嫩茎为外植体,通过无菌芽诱导、丛生芽增殖及芽苗生根的培养,对兰州百合进行组织培养及快速繁殖技术研究。研究表明：选用6-BA和NAA两种不同浓度的植物生长调节剂对不定芽进行诱导培养,筛选出诱导不定芽的适宜培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,分化率可达88%,平均苗高为3.1cm;选用6-BA和IBA两种不同浓度的植物生长调节剂进行继代增殖培养时,筛选出丛生芽增殖的适宜培养基为MS+IBA0.3mg/L+6-BA0.5mg/L,增殖倍数可达3.4,平均苗高4.6cm;选用IAA和IBA这两种不同浓度的植物生长调节剂进行诱导生根培养,筛选出生根培养的适宜培养基为1/2MS+IAA0.1mg/L+IBA0.2mg/L,生根率90%,平均生根数3.2条。     

猪瘟强弱毒鉴别多重RT-PCR方法的建立及应用

【目的】建立一种能够应用于临床样本猪瘟病毒(CSFV)检测的快速、简便且标准化程度高的检测技术,以满足畜牧业生产和兽药市场的需求。【方法】根据GenBank中猪瘟病毒及近源病毒的基因组全序列,选择特异保守区域设计了2对猪瘟病毒引物,借助3′端引物碱基错配对PCR扩增效率的影响,优化筛选了能够鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒疫苗的PCR退火温度,经多重试验组合建立了一套鉴别猪瘟强毒和弱毒的多重RT-PCR鉴别诊断方法。【结果】扩增反应条件的确定试验表明,退火温度为55℃;特异性分析表明,从弱毒C株和石门强毒株的基因组中分别扩增出1条大小为492和178 bp的特异性片段,从强弱毒株混合物中1次扩增出2条大小为492和178 bp的特异性片段,检测不到伪狂犬病病毒的RNA;敏感性分析表明,该方法能检测出0.8 pg的猪瘟病毒RNA;应用试验表明,8份疑似猪瘟病料中5份为强毒感染,2份为弱毒感染,1份为弱毒和强毒的混合感染。【结论】研究建立的多重RT-PCR方法具有敏感性、特异性强、重复性好的特点,对养猪业的发展具有十分重要的意义。     

李矮缩病毒RT-PCR方法建立及检测应用

 以感病和健康指示植物GF305的总RNA为模板，进行cDNA的合成和PCR 扩增，结果从感病材料中扩增出与预期的172 bp大小一致的目的片段，而健康的材料无此扩增产物。对此PCR 扩增产物克隆测序，进一步佐证了RT-PCR检测结果。经过多次试验验证该检测体系，都可得到很好的重演性，从而建立了李矮缩病毒快速、灵敏、准确的RT-PCR检测技术，并进行了实际应用。     

兰州百合与川百合试管苗结鳞茎研究

以兰州百合与川百合组培苗为材料进行了试管内结鳞茎的诱导研究，结果表明：兰州百合试管内诱导形成鳞茎的最适培养基为1／2MS＋0．5mg／LIBA，平均每株结鳞茎数可达3．1个，鳞茎平均直茎为1．0cm，鳞茎形成部位在试管苗的底部。川百合试管内诱导形成鳞茎的最适培养基为1／2MS＋1．0mg／LIAA，平均每株结鳞茎数为1个，鳞茎平均直茎为0．7cm，鳞茎形成部位在试管苗的顶端。     

兰州百合微繁的研究

以兰州百合的鳞茎增殖为基础,进行了离体微繁研究。鳞茎增殖的适宜激素组合为0.9mg/LBA 0.1~0.2mg/LNAA。培养基中总离子浓度和氮浓度过高或过低都会影响兰州百合增殖,3种基本培养基N6、MS、和1/2MS以N6增殖效果最好。适当提高糖浓度对鳞茎增殖有促进作用,在各处理中以蔗糖浓度为40g/L增殖倍数高。兰州百合的适宜生根培养基为1/2MS IBA0.1mg/L,生根率达100%,生根苗移栽成活率达90%。     

兰州百合的研究进展

兰州百合不仅是中国百合中的上品，而且是中国唯一的甜百合，有很高的食用、药用、保健和观赏价值，作者对兰州百日合的化学成分、药用价值、资源开发、质量控制、观赏价值等方面的研究进行了综合归纳和整理，以期为进一步开发利用提供参考。     

低温贮藏过程中百合鳞茎内酚类物质的高效液相色谱法测定

建立了分离7种酚类物质的高效液相色谱条件,对低温贮藏过程中兰州百合鳞茎不同部位的酚类物质成分和含量进行了测定。采用Waters Nova-Pak■C18色谱柱(3.9 mmi.d.×150 mm,4μm),柱温35℃,流动相为乙腈—1%(V/V)乙酸水溶液(15∶85),流速1.0 mL/min,紫外检测波长280 nm,进样量15μL,可使7种酚类物质在20 min内达到完全分离。鳞片、顶芽和鳞茎盘内均可检测到对羟基苯甲酸、阿魏酸、香豆酸、水杨酸和香豆素。其中对羟基苯甲酸的含量显著高于其它酚类物质的含量。不同贮藏时期、不同鳞茎部位酚类物质的种类和含量存在差异。     

促进兰州百合生长和抗旱性内生真菌的初步研究

[目的]分离培养兰州百合根中内生真菌,筛选具有促进生长和抗旱作用的菌株。[方法]利用真菌一兰州百合幼苗共培养体系筛选益生菌,研究干旱条件下益生真菌对兰州百合幼苗生长和抗旱性的影响。[结果]获得1株可以在干旱胁迫条件下明显促进兰州百合幼苗生长和抗旱的内生真菌。[结论]利用内生真菌抵御干旱胁迫是一种新的策略,具有良好的发展前景。     

摘顶对兰州百合光合物质分配和鳞茎品质的影响

在大田栽培条件下,研究了不同摘顶时间对兰州百合植株的生长特性、鳞茎产量和品质的影响.结果表明,摘顶有利于提高百合植株的百合茎粗、叶面积、干物质总产量、鳞茎产量和商品品质;与不摘顶处理相比,现蕾初期摘顶处理的百合茎粗、叶面积、鳞茎总产量、大鳞茎鲜重和鳞茎淀粉含量分别较对照提高了20.94%、38.31%、24.52%1、4.23%和28.57%,因此现蕾初期是百合理想的摘顶日期.     

种植模式对兰州百合生长特性和产量的影响

在2003~2004年进行了坡耕地田间试验,研究了平播、垄作和渗水膜覆盖3种种植模式下兰州百合的生长特性和产量.结果表明,渗水膜覆盖可以有效提高兰州百合的生物学产量;覆膜条件下,鳞茎所占百分比达最大,2003年和2004年分别为86.75%和89.58%;同样,子鳞茎产量在覆膜下也最高,2003年和2004年分别为4 701.70 kg/hm2和7 292.14 kg/hm2,由此可见覆膜可有效提高百合产量.     

兰州百合组织培养和高频繁殖

采用人工低温及自然冬季萌芽两条路线进行兰州百合（L．davidiivat．unicolor（Hoog）Cotton）鳞片外植体初代诱导培养，以MS＋0．0～1．0mg／LBA＋0．0～0．1NAA为初代培养基，成功实现了南方高温地区兰州百合组织培养初代诱导。低温冷藏有利于鳞芽诱导，但不是鳞芽诱导的必要条件。采用MS＋0．0～0．5BA＋0．0～0．1NAA继代培养基，高温（28～29℃）培养与丛芽继代方式实现了兰州百合高频繁殖，其繁殖系数达3．0～5．0，继代周期为16～18d；组培生根苗的分单株大田移栽方法提高了成活率，降低了用苗量；为工厂化生产其组培苗及炼苗移栽提供了技术支持。     

施钾对兰州百合叶片抗旱性生理指标的影响

采用田间试验,研究了钾肥对兰州百合开花期叶片抗旱生理指标的影响.结果表明,施钾量在0~150kg/hm2范围内,随着钾肥施入量的增加,丙二醛含量降低,可溶性糖含量、过氧化氢酶活性和脯氨酸含量增加,但施钾量超过150 kg/hm2时,丙二醛含量略有上升,可溶性糖含量、过氧化氢酶活性和脯氨酸含量有所下降.在施氮量225 kg/hm2和施磷量150 kg/hm2的不打顶处理下叶片丙二醛含量低于其它处理,脯氨酸含量、过氧化氢酶活性和可溶性糖含量高于其它处理;且在施氮量225 kg/hm2、施磷量150 kg/hm2和施钾量150 kg/hm2的不打顶处理下,丙二醛含量出现最小值,脯氨酸含量、过氧化氢酶活性和可溶性糖含量呈现最高值.     

贮藏温度对兰州百合生长及鳞茎碳水化合物代谢的影响

以兰州百合为材料,研究了百合种球经不同贮藏温度处理后,植株生长及鳞茎碳水化合物代谢的变化。结果表明:随着贮藏温度的降低,百合各个生育阶段均提前,总生育期缩短,同时百合株高和茎粗的生长加快,叶面积和鳞茎鲜重增加;母鳞茎和新鳞茎淀粉、总可溶性糖含量增加。蔗糖是百合鳞茎内糖分积累和转运的主要形态,其含量变化与总糖变化趋势基本一致。淀粉酶活性变化与淀粉含量变化趋势相反。结合鳞茎鲜重的变化可知,在本试验范围内,2℃贮藏百合种球101d有利于鳞茎发育。