大米蛋白胃蛋白酶酶解物体外抗氧化作用的研究

本试验采用正交设计,以羟自由基清除率为评定指标,用胃蛋白酶酶解大米蛋白,旨在确定其酶解物体外抗氧化作用最佳的酶解条件。试验结果表明:当酶解温度为37℃时,影响大米蛋白胃蛋白酶酶解物抗氧化效果的因素大小排序为:pH酶浓度底物浓度酶解时间;最佳酶解条件为:pH1.4、酶浓度5%、底物浓度8%、酶解120min,此条件下酶解物的羟自由基清除率为72.78%,多肽浓度为5.49mg/mL,水解度为15.62%。     

母乳乳清蛋白抗氧化活性肽的研究

母乳是婴幼儿的最佳食物来源,而乳清蛋白是营养和活性物质的基础,其中生物活性肽对人体健康具有重要促进作用.为研究母乳乳清蛋白抗氧化活性肽,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶4种酶制备抗氧化活性多肽,通过单因素试验和响应面分析对乳清蛋白酶解工艺进行优化.结果表明:中性蛋白酶最适于母乳乳清蛋白抗氧化肽的制备,此时的最佳工艺参数为pH 7.21、反应温度50.03℃、酶与底物比(E/S)4 486.68 U/g、酶解时间5h;影响1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率的因素大小为:酶与底物比＞温度＞pH值.利用大孔树脂、葡聚糖凝胶过滤色谱G-25、G-15分析得出组分峰Ⅰ抗氧化活性最强,其DPPH自由基清除率达到了60.31％.     

红三叶寡肽酶解制备工艺研究

本试验以水解度为指标研究不同蛋白酶对红三叶叶蛋白的水解作用.通过单酶筛选试验确定了中性蛋白酶Ⅱ(来源于1398枯草芽孢杆菌)为最佳水解酶,进一步的单因素试验和正交试验结果表明,酶解最佳工艺条件为酶解温度40 ℃,pH值7.6,酶活添加量5000 U/g,底物浓度1%,酶解时间3 h.     

碱性蛋白酶酶解藜麦芽制备多肽工艺的研究

为寻找开发藜麦蛋白，提高藜麦应用价值的最佳条件，本研究以白藜麦芽为原料，采用正交试验法优化碱性蛋白酶酶解藜麦芽制备多肽的最佳工艺条件。以碱性蛋白酶添加量、酶解pH、酶解时间、酶解温度和底物浓度这5个因素进行单因素试验，再通过正交试验分析，获得制备多肽的最佳酶解条件为：加酶量2000 U/g，酶解pH 10.0，酶解温度50 ℃，酶解时间3 h，底物浓度9％，在此条件下进行的验证试验，多肽含量达（0.4105±0.0021）mg/mL，表明该工艺稳定、可行，具有较高的应用价值。 [关键词] 藜麦|酶解|多肽|单因素试验|正交设计     

酶解猪血红蛋白工艺条件的研究

试验选用中性蛋白酶水解猪血红蛋白。通过单因素试验,研究水解温度、pH值、酶加量、底物浓度、水解时间对水解效果的影响。通过正交试验,得出最佳的水解条件为:温度55℃、pH值7.5、酶加量5000U/g蛋白、底物浓度10%、水解时间3h,在此条件下的水解度为22.03%、三氯乙酸可溶性氮含量(SN-TCA指数)为63.83%。     

猪肠膜双酶分步磕解工艺的研究

以猪小肠黏膜提取肝素后的滤渣为原料,利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对猪肠膜进行双酶分阶段水解.在单因素试验的基础上采用正交试验对水解条件进行优化.结果表明木瓜蛋白酶和中性蛋白酶双酶分阶段水解的最佳酶解工艺为木瓜蛋白酶-中性酶的加酶量比为1∶2,总酶量8000U/g蛋白,底物浓度为5%,pH7.0,温度55℃,酶解时间3h.通过喷雾干燥生产出成品,其蛋白质含量为37.5%.     

超声波辅助双酶法制备黑豆多肽的工艺优化及其抗氧化活性研究

试验以黑豆蛋白为原料,采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合水解黑豆蛋白制备黑豆多肽,同时以超声波辅助水解过程。以蛋白水解度为表征指标进行单因素试验,研究超声功率、复合酶比例、底物浓度、加酶量、反应时间等5种因素对黑豆蛋白水解度的影响,进一步通过正交试验进行黑豆蛋白肽制备工艺的优化。结果显示,超声波辅助复合酶水解黑豆蛋白的最佳工艺参数为：超声功率200 W、酶配比7∶3、反应pH值为7.5、反应温度为52℃、底物浓度5%、加酶量800 U/g、反应时间4 h。黑豆多肽对超氧阴离子自由基（·O2-）、羟自由基（OH·）、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基（ABTS+·）具有一定的清除能力,具有良好的体外抗氧化活性。     

酶解猪血制备氨基酸液体肥工艺条件优化

试验以猪血为原料,利用风味蛋白酶水解猪血中的蛋白,以水解率为指标,得到酶解血液的最佳条件。通过单因素试验研究料液比、酶添加量、pH值、温度和水解时间对猪血蛋白水解率的影响;正交试验确定水解的较佳工艺条件为:料液比1∶10.5 g/mL、pH值6、水解温度50℃、酶浓度12 000 U/g蛋白、水解时间7 h。在此条件下,水解率为40.42%。     

猪小肠黏膜加工下脚料酶解工艺的研究

以猪小肠黏膜提取肝素后的下脚料为原料,利用木瓜蛋白酶对肠黏膜蛋白质进行水解。在单因素分析的基础上采用正交实验对水解条件进行优化,得出最适酶解条件为:酶加量3000 U/g底物蛋白,底物浓度6%,pH值7.5,温度45℃,水解时间3h。在此条件下的水解度为20.63%。     

猪肠膜双酶分步酶解工艺的研究

以猪小肠黏膜提取肝素后的滤渣为原料,利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对猪肠膜进行双酶分阶段水解。在单因素试验的基础上采用正交试验对水解条件进行优化。结果表明:木瓜蛋白酶和中性蛋白酶双酶分阶段水解的最佳酶解工艺为:木瓜蛋白酶-中性酶的加酶量比为1:2,总酶量8000U/g蛋白,底物浓度为5%,pH7.0,温度55℃,酶解时间3h。通过喷雾干燥生产出成品,其蛋白质含量为37.5%。     

双酶水解对脱脂牛乳致敏性的影响

以水解度、分子质量分布及酶解产物对免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）和患者血清IgE结合能力为 指标,采用双酶水解方法研究酶对脱脂牛乳体系主要蛋白致敏性的影响。结果表明：双酶一步水解E/S为3 000 U/g、 碱性蛋白酶与风味蛋白酶配比为3∶1、酶解80 min条件下脱脂牛乳中主要致敏乳蛋白酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋 白的IgG结合能力分别显著下降74.93%、97.24%、93.46%（P＜0.05）;酶解破坏脱脂牛乳蛋白高级结构,使α-螺 旋、β-转角结构增加,β-折叠结构减少,游离巯基含量显著增加至14.29 μmol/g（P＜0.05）,表面疏水性增强,结 构趋于松散;脱脂牛乳体系中粒子发生聚集,平均粒径显著增加至346.90 nm（P＜0.05）,稳定性降低;酶解产物 对牛乳蛋白过敏患者血清IgE结合能力显著降低23.53%（P＜0.05）,综合致敏性显著下降69.60%（P＜0.05）。因 此双酶水解是降低脱脂牛乳致敏性的有效方法。     

枯草芽孢杆菌固体发酵豆粕条件的优化

本试验采用枯草芽孢杆菌对豆粕进行固体发酵,通过正交试验探讨不同碳源组合、发酵时间、培养温度、水分比例、接种菌量等因素对发酵豆粕粗蛋白质增加率和蛋白质水解度的影响。结果表明,影响枯草芽孢杆菌固体发酵豆粕粗蛋白质增加率的条件因素的主次顺序为玉米粉比例>培养时间>温度>麸皮比例>水分比例>次粉比例>接种菌量,表观分析固体发酵条件最佳组合为A₃B₁C₃D₃E₂F₂G₁,粗蛋白质增加率达到28.05%;影响发酵豆粕蛋白质水解率的条件因素的主次顺序为温度>培养时间>玉米粉比例>接种菌量>麸皮比例>次粉比例>水分比例,表观分析固体发酵条件最佳组合为A₂B₃C₁D₃E₃F₃G₁,蛋白质水解度达到46.46%。枯草芽孢杆菌固体发酵豆粕的粗蛋白质增加率与蛋白质水解率存在明显的正相关(R²=0.556)。     

Evaluation of the critical parameters of a sensitive ELISA test using purified infectious bovine rhinotracheitis virus antigens

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the survey or titration of bovine sera for the presence of IgG antibodies against infectious bovine rhinotracheitis (IBR) virus was developed. The optimal conditions of serum dilution, antigen concentration, conjugate dilution, substrate concentrations, and reaction time were established using the signal/ noise (S/N) ratio as the determining criterion. Equilibrium density gradient purified IBR virus was used as antigen at an optimal concentration of 0.60 μg/cuvette. The use of purified antigen allowed the testing of sera at a 1 : 10 dilution without nonspecific reaction.The conditions of conjugate dilution, substrate concentration and reaction time were shown to have significant effects on the ELISA test. Results from 35 sera showed this optimized ELISA procedure to be as much as 1000-fold more sensitive than the serum neutralization plaque reduction assay. Numerous sera showing no neutralizing titer to IBR virus were found to be positive when examined by this ELISA method.     

Effects of different variables on whole blood cholinesterase analysis in dogs.

The influence of several variables such as sample and reagent storage, anticoagulants, reaction temperature, pH, and substrate concentration on whole blood cholinesterase determination was studied. Storage of nondiluted whole blood samples at room temperature or under refrigeration (4 C) was adequate for short-term storage (3 days to 2 weeks). However, freezing would be more appropriate for long-term storage (> or = 1 month), and successive thawing and freezing did not produce any loss of cholinesterase activity. All reagents (2,2'-dithiodipyridine as chromophore and acetylthiocholine and butyrylthiocholine as substrates) were stable for 3 months when frozen. Heparin and ethylenediaminetetraacetic acid were the most suitable anticoagulants for whole blood acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase determination, because citrate yielded lower acetylcholinesterase values and fluoride inhibited butyrylcholinesterase. Increases in reaction temperature and pH yielded higher cholinesterase values but also increased nonenzymatic substrate hydrolysis. Higher cholinesterase and nonenzymatic substrate hydrolysis values were obtained as higher substrate concentrations were used.     

Effect of various enzyme-substrate ratios on trypsin activity in the presence of trace elements

In vitro experiments were conducted with trypsin and Na-Benzoyl-l-arginine-p-nitroanilid (L-BAPA) as substrate. The aim of the work was to explore the influence of additional Cu2+, Zn2+, Co2+, Ni2+ and Fe3+ ions in the reaction mixtures on the trypsin activity at different enzyme-substrate ratios (E : S = 1 : 100; 1 : 50; 1 : 10; 1 : 5). The reaction conditions were chosen according to the steady-state conditions of the tryptic hydrolysis. The trypsin activity increased by adding small amounts (4.5 X 10(-7) mol Cu2+/l) and decreased by adding higher amounts of Cu2+ ions. There was no influence of the E : S ratio. The tryptic activity was only partly influenced by the substrate concentration when the other trace elements were added to the reaction mixtures. These results may explain in part the improved protein digestibility which is reported when 250 mg Cu/kg are added to pig feeds.     

耐热木聚糖酶水解法制备木寡糖的研究

为探讨耐热木聚糖酶水解自制甘蔗渣木聚糖制备木寡糖的工艺条件和分析水解液的寡糖成分,试验以产耐热木聚糖酶的基因工程菌1020为原料,水解自制的甘蔗渣木聚糖,分别研究水解过程中酶的用量、木聚糖的浓度及酶解温度对酶解反应的影响,并采用高压液相色谱和质谱联用技术对水解液成分进行分析。试验结果表明,2%的木聚糖浓度,水解温度95℃,酶液用量100U/g,酶解3h后DP值可降至2.94,满足生产木寡糖对聚合度的要求;并且水解液的成分主要为木糖、木二糖和木三糖,没能检测到木四糖。耐热木聚糖酶在高温下酶解木聚糖对酶法制备木寡糖具有重要的应用价值。     

鲑鳟鱼骨提取胶原肽工艺与产品生物活性研究

从9种备选酶中选取胃蛋白酶(Pepsin)和风味蛋白酶(Flavourzyme),以脱钙的鲑鳟鱼骨制取Mr3000Da活性胶原肽,并进行抗性测定。结果EDTA微波复合脱钙效果最佳,浓度、时间、微波功率等对脱钙效率和胶原损失影响较大;最佳酶解工艺为先Pepsin1.2%,料液比1:30,T65℃,pH2.2,提取6h,提取率达8.68%,DH2.23%,后调料液比至1:35,Flavourzyme1.2%,T57℃,pH6.4,提取4h,提取率为6.96%,DH5.81%;经粗滤、微滤、超滤、浓缩、干燥过筛等得到成品,其纯度为84.08%,羟脯氨酸(Hpro)含量为6.22%。产品FRAP值为3.80mmol/L,DPPH.清除率为13.33%,.OH清除率为11.24%。     

微波辅助提取苜蓿黄酮方法的研究

为充分利用紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中的黄酮类物质,应用微波辅助提取技术,分别对影响其黄酮提取量的乙醇浓度、微波功率、固液比、提取时间和提取次数进行单因素试验,并在此基础上对各因素的互作效率进行正交试验。结果表明:固液比和乙醇浓度是影响提取量的主要因素,微波功率和其它因素影响较小;微波提取苜蓿黄酮的最佳工艺为:40%乙醇浓度,1:30固液比,微波500 W功率下作用60s;在此工艺条件下,黄酮提取量的理论值为4.92mg/g,接近于实际测定值4.88mg/g。     

组合酶水解羽绒加工副产物工艺参数的优化

本研究旨在对来源于地衣芽孢杆菌CP-16的重组角蛋白酶和二硫键还原酶协同酶解羽绒加工副产品最佳工艺条件进行探讨。试验探讨角蛋白酶与二硫键还原酶组合水解羽毛角蛋白的适宜比例，并研究蒸汽压力处理时间、酶解时间、组合酶添加水平和水分含量等单一因素对酶解效率的影响，再利用L9（3⁴）正交试验进一步优化处理工艺条件。结果显示，当角蛋白酶与二硫键还原酶的酶活比例为80：1，角蛋白酶终浓度为90 U/mL时，组合酶酶解羽绒加工副产品效率最佳；经压力处理2 h更有利于提高酶解效率；水解60 h酶解率最高，但与48 h差异不显著（P>0.05）；总反应体系中缓冲液为5.5 mL时酶解效率显著高于对照组（P<0.05），但与4.5 mL组差异不显著（P>0.05）。正交试验优化酶解羽绒加工副产品条件发现，影响组合酶酶解效率的因素由大到小依次为压力处理时间、酶解时间、酶剂量；酶解羽绒加工副产品最适条件为：角蛋白酶与二硫键还原酶活性比例为80：1，121℃高压处理2 h，角蛋白酶终浓度为90 U/mL，50℃酶解48 h，此时1 g羽绒加工副产品产生的上清液可溶性蛋白含量为352.72 mg，比对照组提高640.26%。综上，利用多种处理工艺相结合更有利于提高组合酶水解羽绒加工副产品的效率。本试验结果可为羽绒加工副产品资源开发利用提供理论指导。