支气管败血波氏杆菌的间接ELISA诊断方法

我国随着集约化猪场的迅速发展，国外引种及国内种猪的频繁调动，使得猪萎缩性鼻炎在许多猪场发生。在萎缩性鼻炎症状的猪鼻腔分泌物中，61．5％的分离菌为支气管败血波氏杆菌，说明该菌是导致本病的主要病原菌（宋克磊），因此支气管败血波氏杆菌的防制和检测方法的研究显得尤为重要。间接酶联免疫吸附试验（间接ELISA试验）是一种快速、准确、简便的方法，并具有敏感性高、特异性强的特点，且能够同时检验大量血清样品（陈博文），因此间接ELISA方法是检测波氏杆菌抗体的一种优良方法。     

一例禽波氏杆菌病的治疗

禽波氏杆菌是一种主要对火鸡具有传染性的革兰氏阴性需氧杆菌,又叫博代氏杆菌或博得特氏杆菌。能引起禽类的鼻炎和鼻气管炎。它能通过与感染禽及被污染的水、垫料的接触而迅速传给易感禽,也可以经过垂直传播传入下一代。病程1～3周,发病率及死亡率均达100%。本文介绍了一例波氏杆菌病的治疗。     

兔支气管败血波氏杆菌不同感染途径研究

用兔支气管败血波氏杆菌分离株BJL0504菌株(I相菌)经滴鼻、肺内、气管、静脉、皮下对30～40日龄兔攻毒,并进行临床观察和微生物学检查,比较不同攻毒方法的优势。结果显示,经静脉注射的家兔发病率和死亡率高,症状较典型;经肺内注射也可以引起部分发病和死亡;滴鼻和气管注射感染均可以复制到典型的临床症状,但是解剖病变都不明显。由此可见,支气管败血波氏杆菌经静脉攻毒可以较好的复制病例,这对支气管败血波氏杆菌的致病机理的研究、疫苗的研制和评价提供了理论基础。     

猪支气管败血波氏杆菌的鉴定和生物学特性

从某猪场呼吸道症状严重的发病猪病料中分离到4株细菌,经形态和培养特征、生化试验、小鼠致病性试验和PCR方法鉴定为猪支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,4株分离菌对阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素、氧呱嗪青霉素、环丙沙星、氟派酸等敏感,对新霉素、红霉素、壮观霉素、复方新诺明、四环素等不敏感,对小白鼠致病性强弱不一,生物被膜的形成能力不同。     

兔支气管败血性波氏杆菌fimN基因的原核表达

应用PCR方法扩增兔支气管波氏杆菌(Bb)的菌毛蛋白基因( fimN),将fimN基因克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET28a-fimN。将此重组质粒转化受体菌BL21后,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达蛋白分子量大小约为27 kD,与理论预期值相符。用Western-blot试验分析纯化的表达产物,结果表明,该重组蛋白能与Bb阳性血清发生特异性反应。     

兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

对陕西商洛某养殖场病死兔解剖、无菌采取病料,从病料中分离到1株革兰阴性小杆菌,经生物学特性试验和生理生化试验鉴定,为兔支气管败血波氏杆菌.药敏试验结果表明,该分离菌株对环丙沙星、氟哌酸、氧氟沙星等抗生素高度敏感;对氯霉素、红霉素、四环素等抗生素耐药.外毒素试验和动物致病性试验对小白鼠均有致病作用.     

PCR检测兔支气管败血波氏杆菌方法的建立及应用

为建立准确、快速检测兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)的PCR方法,根据Gen Bank中波氏杆菌ptxA基因设计1对特异性引物,用建立的PCR方法扩增兔波氏杆菌,可扩增出870 bp的目的片段。该方法特异性好,仅对波氏杆菌有特异性的扩增,而对大肠埃希菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌等病原菌的扩增结果呈阴性;敏感性较高,最低检测限可达6.8×10~(-7)μg/m L;用建立的PCR方法检测临床疑似感染支气管败血波氏杆菌病兔的脏器及鼻拭子样品,可扩增出目的条带,且与细菌分离的结果一致。可见,建立的检测方法敏感、特异,可用于临床上兔波氏杆菌病的快速诊断及鉴定。     

支气管败血波氏杆菌PRN基因CDS区的生物信息学分析

通过生物信息学软件预测分析支气管败血波氏杆菌PRN基因编码蛋白功能及其调节机制。结果表明,支气管败血波氏杆菌PRN基因CDS区编码911个氨基酸,分子式为C_{4 121}H_{6 556}N_{1 250}O_{1 258}S₁₁,分子质量为13 196,消光系数为95 800,其理论等电点为9.64,不稳定系数为36.24,PRN蛋白的理化性质稳定;PRN蛋白有多个磷酸化位点和糖基化位点;信号肽预测PRN蛋白有1个信号肽,信号肽位置在1～34;PRN蛋白为亲水性蛋白,存在1个跨膜结构;预测二级结构主要由无规则卷曲构成,占39.08%,β-折叠占23.93%,α-螺旋占23.30%,三级结构主要由无规则卷曲和β-折叠构成。上述结果提示,该蛋白具有重要生物学意义,可为进一步开发支气管败血波氏杆菌亚单位疫苗奠定基础。     

猪支气管败血波氏杆菌FlaA基因克隆与序列分析

参考相关资料,针对支气管败血波氏杆菌Bordetella bronchiseptica FlaA基因上游序列选择合成1对特异性引物,对贵州分离株（B8株和B27株）进行PCR扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体上,并转化到DI-L5a感受态细胞中,提取重组质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序。结果获得分子长为237bp的特异性DNA片段;核苷酸同源性分析表明,贵州分离株间的同源性高达99．1％,与Bb参考株的同源性为97．8％～99．6％,与Bpp参考株的同源性为95．6％-97．4％;系统进化树分析表明,贵州分离株与Bb参考株亲缘关系较近,而与Bpp参考株亲缘关系远。     

支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立和应用

根据支气管败血波氏杆菌ptxA基因设计1对引物,扩增特异的872 bp核酸片段,建立了应用PCR检测支气管败血波氏杆菌的方法.特异性试验结果表明,3株支气管败血波氏杆菌参考菌株均能扩增出872 bp特异性的核酸片段,兔源性的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄菌的扩增结果均为阴性.敏感性试验结果表明,PCR的最低检出限量为210个支气管败血波氏杆菌.利用建立的PCR检测方法对22株从山东省泰安地区某兔场采集的疑似兔支气管败血波氏杆菌病病兔鼻黏液棉拭子进行检测,结果19株为阳性.并同时进行普通血清学方法和细菌学方法,对检测结果进行了比较,结果显示,PCR方法阳性检出率高于其他检测方法.     

用双层平板和双温培养法分离支气管败血波氏杆菌

自行设计双层平板选择培养基并用双温培养法分离猪支气管败血波氏杆菌。用加有１％葡萄糖的麦康凯琼脂作为基础培养基，从猪鼻腔采取病料以环形或３点形接种到该基础培养基，在３７℃培养８～１０ｈ后，再在该培养过的基础平板上倾注一层约３ｍｍ厚的经灭菌并冷至４５～５０℃的半固体培养基，于２５℃再正放培养１４－１６ｈ。其后在培养基表面挑选单个或扩散生长的菌落接种上述基础平板培养基进行初步验证，再取这些验证过的菌落作     

兔波氏杆菌病

兔波氏杆菌病是由兔波氏杆菌引起的一种兔的传染病。本文综述了该病的发病特点,临床症状与病理变化以及防治措施。     

兔支气管败血波氏杆菌OMP-ELISA抗体检测方法的建立

为简便快速检测支气管败血波氏杆菌(Bb),建立了一种特异、敏感的间接ELISA方法。通过应用超声波裂解和超速离心法提取了支气管败血波氏杆菌Ⅰ相菌外膜蛋白(OMPs),并用该蛋白包被酶标板,经特异性、敏感性和重复性试验优化后建立间接ELISA方法。结果表明,试验确定抗原的包被浓度为14.44μg/ml,可检测血清最高稀释度达1：400;该方法有很高的特异性和敏感性,与微量凝集试验相比,敏感性提高约33倍;该方法重复性良好。     

兔支气管败血波氏杆菌双夹心ELISA检测方法的建立

为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果表明,兔抗Bb IgG的最佳稀释度为1∶6 400,浓度为2.5 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为5.0 mg/L。特异性试验和重复性试验结果表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见病菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。     

猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

 【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌。经生化鉴定,药敏试验、血凝试验及动物试验等方法进行检测和分析。【结果】在中国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系。Bb最常见的共感染菌依次是链球菌（55.9%）、副猪嗜血杆菌（50.0%）、大肠杆菌（43.1%）、巴氏杆菌（25.5%）、绿脓杆菌（17.6%）和沙门氏菌（11.8%）。在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌。对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验。结果表明：各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死。【结论】在中国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高。     

广西猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为掌握广西猪传染性萎缩性鼻炎（AR）发病情况、猪支气管败血波氏杆菌（Bb）流行血清型及耐药情况,分别从广西南宁、上林、贵港、武鸣等地4个规模化猪场和1个屠宰场采集到247份猪鼻腔分泌物样品,径常规细菌分离获得57株Bb可疑菌株,以生理生化试验和PCR鉴定等方法对可疑菌株进行鉴定,并根据O、K抗血清凝集试验进行分型.结果表明,57株可疑菌株均确定为Bb,其中6株为Ⅰ相Bb、14株为Ⅱ相Bb、37株为m相Bb,且Ⅰ相Bb毒力较Ⅱ相、Ⅲ相Bb毒力强;药敏试验结果表明,大多数Bb对复方新诺明、阿米卡星、新霉素、庆大霉素和环丙沙星等高度敏感,对阿莫西林、青霉素、痢特灵、氨苄青霉素、呋喃妥因、头孢氨苄、林可霉素、头孢噻吩、恩诺沙星、万古霉素和利福平等不敏感.     

支气管败血波氏杆菌dnt基因的克隆、表达及活性鉴定

通过PCR扩增获得支气管败血波氏杆菌的全长4 395 bpdnt基因,并利用pET-28a/BL21系统对其进行了融合表达。Western-blot检测结果表明,表达产物具有良好的免疫学活性。使用His-band purification kit纯化后,得到纯度为93.2%的融合蛋白HIS6-DNT。在乳鼠皮肤坏死试验中,表达产物HIS6-DNT和天然DNT均能导致乳鼠皮肤产生坏死性病变。在乳鼠皮肤坏死阻断试验中,兔抗HIS6-DNT血清能中和天然DNT,使其失去对乳鼠皮肤的坏死毒性。试验结果表明,重组蛋白具有天然DNT的生物学毒性和免疫原性,所产生的抗体具有中和活性,为DNT的结构和功能研究奠定了基础。