济宁青山羊BMP15基因外显子2的克隆与序列分析

本研究对高繁殖力的山羊品种济宁青山羊和低繁殖力的山羊品种内蒙古绒山羊共20只母羊的骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因第2外显子的扩增产物进行了克隆测序及序列比较分析。结果表明：BMP15基因第2外显子的第3对引物扩增片段存在多态。济宁青山羊与内蒙古绒山羊相比，其BMP15基因外显子2差异由2个核苷酸和2个氨基酸改变组成，核苷酸同源性为99%。济宁青山羊与鸡、小鼠、人、猪、牛、绵羊之间BMP15基因外显子2的核苷酸序列同源性为71%～99%，氨基酸序列同源性为43%～99%。     

内蒙古绒山羊褪黑激素受体1a基因外显子1 克隆及序列分析

参考GenBank上已发表的绵羊(登录号:15U14109)、人(登录号:U14108)、牛(登录号:U73327)、鼠(登录号:U52222)等物种褪黑激素受体(melatonin receptor 1a,MTNR1a)基因 cDNA序列设计引物,以内蒙古绒山羊基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到257 bp的基因片段,将扩增产物进行克隆测序后与GenBank数据库进行序列同源性比较。结果表明,绒山羊MNTR1a基因外显子1序列与已发表的绵羊和牛该基因序列同源性分别为99%和96%,说明所得到的序列为绒山羊MNTR1a基因的外显子1序列。利用DNAStar软件分析,得到该基因序列的257个核苷酸。该序列包括5''UTR 23个核苷酸、翻译起始密码子ATG和N端78个氨基酸编码序列。     

辽宁绒山羊BMP-2基因的克隆及序列比较分析

根据GenBank上绵羊的BMP-2基因序列设计特异性引物,以辽宁绒山羊基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应,成功克隆了常年长绒型和季节长绒型辽宁绒山羊BMP-2部分基因片段,丰富了绒山羊BMP-2基因序列。经与绵羊、牛、鼠、猪和人的BMP-2基因进行的比对结果表明,季节与常年长绒型辽宁绒山羊的BMP-2基因同源片段的同源性达到99．7％,二者与绵羊同源性为98．2％和98．4％;与牛同源性为98．2％和97．9％;与鼠同源性为86．3％和86％;与人同源性为88．1％和88．1％。结果表明,辽宁绒山羊BMP-2基因部分核苷酸序列与其他哺乳动物同源性很高,与绵羊、牛的同源性高达97％以上,这与它们的种属关系相近一致。与人、鼠的同源性也在86％以上,说明BMP-2基因在不同物种之间具有较高的保守性。     

西藏牛Y染色体USP9Y基因与mtDNA D-loop区遗传多态性研究

本研究旨在探究西藏牛的Y染色体与mtDNA D-loop区的遗传多态性和起源。采用PCR扩增和限制性内切酶酶切的方法测定30头西藏牛Y染色体USP9Y基因的多态性;采用PCR扩增和测序技术测定30头西藏牛的mtDNAD-loop区序列,利用生物信息学的方法对西藏牛44条D-loop序列(其中14条从Gen Bank下载)进行遗传多态性分析。对30头西藏牛USP9Y基因的PCR产物进行电泳,共检测到471 bp和552 bp 2个片段,且552 bp片段不能被限制性内切酶Ssp I切开,说明西藏牛具有普通牛Y1和Y2 2种单倍型组,其频率分别为0.067和0.933。通过对44条西藏牛mtDNA D-loop全序列进行比对,发现本研究测定的30条西藏牛mtDNA D-loop全序列中,有8条为牦牛序列,说明西藏牛群体中有牦牛的基因渗入。对36条西藏牛mtDNA D-loop全序列进行分析,共检测到62个变异位点,界定了21个mtDNA单倍型,单倍型多样度为0.956 0,核苷酸多样度为0.006 4,表明西藏牛具有丰富的母系遗传多态性。系统发育树显示,西藏牛具有普通牛和瘤牛混合母系起源,且普通牛的单倍型在西藏牛群体中占绝对优势(95.24%)。西藏牛具有丰富的母系遗传多态性,由2个普通牛父系单倍型组构成,应归于普通牛一类,且群体中存在牦牛和瘤牛的基因渗入现象。     

基因外显子2的克隆与序列分析

 本研究对高繁殖力的山羊品种济宁青山羊和低繁殖力的山羊品种内蒙古绒山羊共20只母羊的骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因第2外显子的扩增产物进行了克隆测序及序列比较分析。结果表明：BMP15基因第2外显子的第3对引物扩增片段存在多态。济宁青山羊与内蒙古绒山羊相比，其BMP15基因外显子2差异由2个核苷酸和2个氨基酸改变组成，核苷酸同源性为99%。济宁青山羊与鸡、小鼠、人、猪、牛、绵羊之间BMP15基因外显子2的核苷酸序列同源性为71%～99%，氨基酸序列同源性为43%～99%。     

内蒙古绒山羊BMP-2基因片段克隆与序列分析

该试验以内蒙古绒山羊基因组DNA为模板，利用聚合酶链式反应（PCR技术），对绒山羊BMP-2基因序列进行扩增，并进行序列分析。将质粒测序，所得结果表明，序列与GenBank数据库进行序列同源性比较，绒山羊BMP-2基因与绵羊BMP-2序列比较二者同源性达到99．4％，而与人BMP-2同源区段的同源性达到89％，从而说明最终获得的片段为绒山羊的BMP-2基因片段，并且绒山羊BMP-2基因序列和其他物种的同源性非常高。     

内蒙古阿尔巴斯绒山羊与蒙古绵羊BMP2部分基因片段的克隆及分析

从阿尔巴斯绒山羊及蒙古绵羊血中提取基因组DNA,根据已报道的BMP2基因的保守序列设计上下游引物,扩增山羊及蒙古绵羊的BMP2基因部分序列,将此片段克隆到pMD18-T载体中,筛选阳性克隆,提取质粒DNA,进行序列测定,并将两者序列进行比对.结果山羊该核苷酸片段与绵羊的同源性达99%,与人的同源性87%,与小鼠的同源性85%,与牛的同源性98%.说明该基因在不同物种间具有较高的保守性,尤其是山羊与绵羊之间具有更高的保守性.     

绒山羊精子特异性膜蛋白Izumo的克隆及其序列分析

精子膜蛋白Izumo在精卵融合的过程中具有重要的作用。为了探讨Izumo基因在内蒙古白绒山羊精卵融合中的作用,根据GenBank中发表的牛的核苷酸序列,设计并合成了扩增Izumo基因的1对引物,经RT-PCR扩增获得了Izumo基因部分序列,并对Izumo基因进行了克隆和序列分析。结果显示,获得484 bp的Izumo基因cDNA序列,与牛的Izumo基因同源性高达98%。     

猪链球菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆和序列分析

对猪链球菌2型、7型、9型的标准菌株和7株猪链球菌2型分离菌的谷氨酸脱氢酶(GDH)基因进行PCR扩增,经回收纯化后克隆到PMD18-T载体,筛选阳性克隆菌后测序并对其进行序列分析。结果,PCR扩增出1300bp左右的片段,包括GDH基因的整个开放阅读框,而测序结果表明,其序列与GenBank中的猪链球菌GDH基因序列一致,进一步序列分析表明,GDH的核苷酸序列在相同血清型之间同源性高达99%以上,而在不同血清型之间的同源型也达到了96%以上,而其氨基酸序列同源性则都在99%以上,且都具有GDH1型家族的功能区域。说明猪链球菌GDH基因及其蛋白具有高度的保守性,为进一步研究与应用提供了重要依据。     

日本和牛Y染色体USP9Y基因多态性与父系起源研究

【目的】为了分析日本和牛Y染色体USP9Y基因遗传多态性与父系起源。【方法】利用PCR扩增与限制性酶酶切方法。【结果】对8头日本和牛纯种及19头和秦F1代杂种牛进行Y染色体USP9Y基因多态性及父系起源研究,结果表明:日本和牛与其杂种牛都具有USP9Y基因多态性,USP9Y基因的PCR产物均显示471bp和552bp两种带型,其中552bp带型不能被SspI酶酶切,则这2种带型对应Y1和Y2两种普通牛单倍型组,表明日本和牛含有Y1和Y2两个父系支系,有2个普通牛父系起源。日本和牛和杂种牛单倍型多样度分别为0.5714±0.0945和0.1988±0.1121,提示日本和牛具有较高的父系遗传多样性。【结论】日本和牛具有较高的父系遗传多样性及2个普通牛父系起源。     

褪黑激素受体1a基因在内蒙古绒山羊垂体中的表达

本试验从内蒙古绒山羊脑垂体中提取总RNA,根据已发表的相近物种褪黑激素受体1a(melatonin receptor 1 a,MTNR1a)基因序列设计引物,利用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(real-time quantitative,RT-PCR)技术、组织原位杂交技术检测MTNR1a基因在内蒙古绒山羊垂体中的表达。结果显示,通过RT-PCR方法检测到MTNR1a基因在内蒙古绒山羊垂体中表达,利用原位杂交技术进一步确定MTNR1a基因在垂体中表达分布。结果提示,垂体是褪黑激素作用的靶器官,褪黑激素对绒山羊季节性繁殖的影响有可能是与垂体分泌的某些激素相互作用而发挥作用的。     

南疆绒山羊的培育

南疆白绒山羊是通过对当地山羊的选育和杂交改良，经过近20年的努力育成的。通过本品种选育，横交固定，饲养管理等技术的实施，培育出了体型外貌一致，生产性能高，遗传性能稳定的新品种白绒山羊7．6万余只，并且建成年生产种羊达1000只的种羊生产基地，采取边培育边推广的方法，使阿克苏地区绒山羊平均个体产绒量达175．6g，取得了明显的经济，社会效益。     

Molecular Cloning,Characterization of Porcine IZUMO1, an IgSF Family Member

IZUMO1, belonging to the family of mammalian immunoglobulin proteins, has been well characterized in the mouse. Here, we describe the molecular cloning and expression analysis of porcine IZUMO1 (pIZUMO1). Partial sequence information published in the National Center for Biotechnology Information (NCBI) database was used to generate the full‐length sequence for IZUMO1 using rapid amplification of cDNA ends (RACE). A search of the porcine genomic sequence in the NCBI database identified a bacterial artificial chromosome (BAC) encoding the pIZUMO1 gene. This BAC is derived from porcine chromosome 6 and is syntenic with the corresponding regions of mouse, bovine, and human genomes encoding the IZUMO gene family. This BAC was found to encode an IZUMO1 protein with a predicted amino acid sequence having high similarity with mouse and human IZUMO1. Western blot analysis of proteins from porcine tissues indicated that pIZUMO1 was specifically expressed in the sperm. Furthermore, to confirm whether pIZUMO1 forms complexes, we overexpressed pIZUMO1 in HEK293 cells. The recombinant pIZUMO1 from cell extracts was found to form complexes. Our finding suggests that pIZUMO1 forms homodimeric complex on the sperm membrane. Furthermore, an IVF inhibition assay with an antibody for the porcine IZUMO1 Ig‐like domain showed that Ig‐like domain effectively prevented pig sperm–egg interactions.     

山羊BMP15基因FecX-L突变的检测

采用PCR-SSCP方法在高繁殖力山羊品种（济宁青山羊、波尔山羊和文登奶山羊）和低繁殖力山羊品种（内蒙古绒山羊、安哥拉山羊和辽宁绒山羊）中检测骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因的FecX-L突变,同时研究该基因突变对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明这6个山羊品种都没有发生与Lacaune绵羊相同的FecX-L突变（C53Y）。可见BMP15基因中影响Lacaune 绵羊高繁殖力的突变位点对济宁青山羊的高繁殖力没有显著影响。     

KAP6.3基因与西藏绒山羊生产性状关系的研究

研究采用PCR-SSCP及DNA测序技术,对西藏绒山羊KAP6.3基因编码区和3＇-UTR区进行多态性检测;利用SPSS13.0软件对发现的多态位点与体尺和产绒性能进行了相关性分析。结果发现,西藏绒山羊KAP6.3基因扩增区存在7个SNPs,分别为C134T、G148A、G170A、T210C、A217G、A229C和T284G。分别导致了Cys30Tyr、Ser51Pro、Tyr53Cys和Tyr57Ser共4处错义突变。数据统计结果表明,母羊在体高、十字部高等体尺性状方面显著优于公羊（P〈0.05）,而公羊在产绒性能如毛长和产绒量方面显著高于母羊（P〈0.05）。由此可见,KAP6.3基因可能是影响西藏绒山羊生产性能的主效基因或与之紧密连锁,可作为西藏绒山羊生产性状的辅助选择标记。     

农区养殖绒山羊技术要点

在农区开展绒山羊养殖，在遵守绒山羊一般养殖规律的前提下，还要考虑到农区养殖绒山羊的特殊性，其中包括饲草饲料来源、放牧特点、羊只运动、寄生虫感染、防疫、养殖规模的确定等因素。笔者根据农区的气候、资源、经济条件、绒山羊生理要求等方面，对农区养殖绒山羊的主要技术要点简要进行总结，为促进农区绒山羊养殖活动提供参考。     

Deep insemination with sex‐sorted Cashmere goat sperm processed in the presence of antioxidants

Flow cytometrically sex‐sorted sperm have been widely used for improving reproductive management in the dairy industry. However, the industrial application of this technology in other domestic species is largely limited by the lower fertility after insemination. The aim of this study was to investigate effects of antioxidant supplementation during the sex‐sorting and freezing process on the quality and functions of sorted sperm from Liaoning Cashmere goats. We tested the effects of antioxidant supplementation during sex‐sorting and freezing process, including ascorbic acid‐2‐glucoside AA‐2G, glutathione, melatonin and vitamin C (VC), on the quality and functions of sex‐sorted fresh and frozen‐thawed sperm. Based on these experiments, we performed deep insemination with sex‐sorted sperm using our improved strategy, in comparison to unsorted sperm. In Experiment 1, compared with control group and other antioxidants, AA‐2G supplementation significantly alleviated the degradation of motility and viability of fresh sperm after sorting and showed the highest percentage of sperm with normal morphology. In addition, AA‐2G supplementation showed an evident protection against the sorting process‐induced membrane and acrosome damage. In Experiment 2, AA‐2G supplementation was most effective in protecting motility, while melatonin supplementation appears to facilitate the degradation of quality of frozen‐thawed sex‐sorted sperm. In Experiment 3, we performed deep insemination with sperm that were sorted and frozen in the presence of AA‐2G and obtained a satisfying pregnancy rate comparable to that from unsorted sperm. The results showed that AA‐2G supplementation efficiently protects quality and function of both fresh and frozen‐thawed sex‐sorted sperm of Cashmere goats, thus obtaining a satisfying pregnancy outcome.     

蒙古绵羊Brachyury基因的克隆与生物信息学分析

为了对蒙古绵羊Brachyury基因DNA序列进行研究,试验主要利用PCR技术对蒙古绵羊Brachyury基因序列进行扩增并克隆,首次获得了完整的Brachyury 基因序列。利用NCBI网站上的BLAST功能将测序结果同已发表绵羊Brachyury基因序列进行比对,结果显示同源性高达99%,大部分序列完全一致。将该序列与GenBank数据库中登录的牛、人、大鼠、小鼠、山羊、猴和蝾螈等10个不同物种的Brachyury分子序列进行了比对分析。结果显示,蒙古绵羊Brachyury氨基酸序列与牛Brachyury氨基酸序列同源性最高,为96.30%;最低的则是来源于蝾螈的Brachyury氨基酸序列,仅为58.45%。遗传进化分析进一步证实蒙古绵羊与牛的Brachyury亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。此外,序列分析发现蒙古绵羊Brachyury基因高度保守,仅个别碱基发生突变。研究结果表明,蒙古绵羊Brachyury基因序列与其他脊椎动物的Brachyury基因序列也具有高度的保守性。