五指山猪小群体遗传学检测

本研究利用26个微卫星基因座对中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所保种场的五指山猪小群体58个样本进行了遗传学检测,用非变性(中性)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星的PCR扩增产物,统计了群体平均基因纯合率、等位基因数,利用等位基因频率计算出各群体的平均遗传杂合度(H)、多态信息含量(PIC).统计结果:全群平均基因纯合率为66.5%;平均多态信息含量、平均观测杂合度为、平均期望杂合度分别为0.807、0.338、0.835;每个位点平均等位基因数为11.92,此结果说明该群体虽然近交程度较高,但仍具有丰富的遗传多样性,遗传变异较大.     

五指山小型猪近交系微卫星等位基因遗传规律的研究

利用14对微卫星DNA引物,以五指山小型猪（Wuzhishan Miniature pig,WZSP）F13~F18世代的3个近交家系为研究对象,通过估算基因杂合度（H）、多态信息含量（PIC）和等位基因数（N）等参数,对其遗传变异规律进行探讨,寻找其遗传稳定性的理论依据。结果表明：在14个微卫星基因座上共检测到38个等位基因,总群体的平均H为0.42、平均PIC为0.37、平均N为2.71个;3个家系的平均H分别为0.41、0.45和0.42,平均N分别为2.36、2.29和2.50;F13~F18世代的平均H分别为0.31、0.42、0.36、0.41、0.37和0.20,平均N分别为2.21、2.57、2.43、2.57、2.36和1.64;Sw71、Sw510和Sw2409 3个基因座在WZSP 3个近交家系的13世代时已经完全纯合,而Sw205、Sw874和Sw936等基因座在这3个近交家系的6个世代中仍未能纯合。研究结论：初步揭示了WZSP近交家系中14个微卫星基因座上等位基因的变化规律;最重要的发现是有少数几个基因座,如Sw874和Sw936等一直处于出乎预料的高度杂合状态,这可能与WZSP近交家系的种质特异性有关,推测与这些基因座处于同一连锁群的某些功能基因在维持极高近交水平下WZSP的基本生存能力中起着关键作用。     

微卫星DNA标记技术及其在猪近交系遗传检测中的应用前景

首先对家畜核基因组中DNA微卫星标记作了简要的介绍 ,包括微卫星标记的定义、结构、分布、组成、保守性、优点及丰富的多态性等。其次主要介绍微卫星DNA标记技术在猪近交系遗传检测方面的应用。微卫星标记出现以前 ,只能通过公式来简单的计算近交系数 ,现在通过微卫星标记技术结合PCR(聚合酶链式反应 )技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,可以计算出近交系猪的等位基因频率 ,进一步得到它的多态信息含量。从而可以从分子水平上真正验证近交系猪的基因纯合度及同基因性 ,在转基因研究、异体器官移植和其实验动物化等方面奠定了坚实的遗传学基础     

五指山猪IGF-1基因部分序列的SNP分析

为了揭示小型猪的生长发育规律和矮小遗传机理,试验采用PCR产物直接测序法对五指山猪、滇南小耳猪、香猪、梅山猪和大白猪共60个样本的IGF-1基因5'侧翼区部分片段的单核苷酸多态性(SNP)进行研究.找到2个SNP,分别为1个碱基颠换G22C和1个碱基转换G89A.针对这2个SNP位点得到5种组合基因型,各SNP位点基因及基因型频率统计结果显示:IGF-1基因G22C位点在总群体、五指山猪、滇南小耳猪、香猪、大白猪、梅山猪内的优势等位基因型均为GG型,优势等位基因均为G,具有较高的一致性;G89A位点在总群体、五指山猪、大白猪、梅山猪内的优势等位基因型均为AA型,优势等位基因均为A,而滇南小耳猪、香猪该位点的优势等位基因型均为GG型,优势等位基因均为G.     

五指山猪FUT1基因SNP检测及生物信息学分析

为获得五指山猪FUT1基因序列并分析其基因结构,检测FUT1基因中的单核苷酸多态性(SNP)位点在五指山猪群体中的分布情况,本试验利用PCR扩增猪FUT1基因组序列,通过基因测序寻找该基因中的SNP位点,使用PCR-RFLP方法对120头五指山猪进行了FUT1基因型检测,并运用生物信息学方法对FUT1基因序列进行分析。在猪FUT1基因组中共发现两个单碱基突变,分别位于编码区(A+307G)和3'非翻译区(A+1856C);在FUT1基因A+307G突变位点上,五指山猪均为GG基因型;此外,FUT1基因启动子区域和第2外显子处存在CpG岛。本研究成功获得五指山猪FUT1基因序列信息,为下一步五指山猪FUT1基因的功能研究奠定基础。     

五指山猪H-FABP基因不对称PCR-SSCP研究

以海南五指山猪为试验材料,采用不对称PCR-SSCP和测序相结合技术,对海南五指山猪心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因第3内含子(intron 3)进行多态检测,并分析其与生长性状(体重、体高、体长、胸围)的相关性。结果表明:在五指山猪H-FABP基因in-tron 3中发现了3种基因型,分别命名为AA、AB、BB,对其中的纯合子AA、BB进行测序,发现intron 3的第335位点处发生了突变,都是由碱基A→G的转换造成。AA、AB、BB三种基因型频率分别为63.5%,18.2%,18.2%,A、B等位基因频率分别为73%和27%。不同基因型个体各生长性状的方差分析表明,不同基因型之间的生产性状无显著差异。     

五指山猪种质特性及开发利用研究

历时近20年,对濒临灭绝的五指山猪（WZSP）进行异地保种繁育、种质测定、实验化培育、分子遗传学等基础性研究。目前已培育成为世界上少有的小型猪近交群体,发现有诸多特异性。结果表明,WZSP是理想的实验动物模型和人类疾病的“替难者”,并将在异种器官移植研究和应用中发挥独特作用。     

贵州白香猪选育群体遗传结构变化分析

为了开发贵州白香猪的利用价值,试验采用微卫星标记对白香猪选育群体和原始种群的遗传变异进行了检测.结果表明:2个种群的平均等位基因差距较大,平均杂合度、PIC和平均近交系数均有明显变化,说明贵州白香猪选育群体已成为一个稳定的遗传群体,符合封闭群动物的遗传特征.     

猪微卫星座位杂合度与肌肉肌苷酸含量的关系

英系大白猪和梅山猪产生的139头F2代个体用作试验猪。分析猪1、2和6号染色体的24个微卫星座位与肌肉肌苷酸的关系,发现5个座位与肌苷酸含量显著关联(P<0 05)。它们分别是1号染色体的Sw2185、2号染色体的Sw2516、S0170、Sw1883和Sw2192。6号染色体9个微卫星座位均没有显著的相关(P>0 05)。这提示2号染色体的一些基因或QTL对肌苷酸含量有较大的遗传作用。分别以24个座位分类、以5个显著关联座位分类和以19个中性座位分类来研究基因杂合度与肌苷酸含量的关系,结果均表明随着基因杂合度增加,肌苷酸含量呈下降趋势。其中前两者分析结果大体一致。基因杂合度在0 5～0 8范围内,每增加0 05则肌苷酸含量下降幅度大约是群体肌苷酸均值的1 2%～7 5%。提示显著关联座位在肌苷酸的杂种优势中可能具有重要的遗传效应。同时,在应用微卫星标记估计基因杂合度与肌苷酸含量的关系时,尽可能选用显著关联座位,可以作到多快好省。     

SNP Detection and Bioinformatics Analysis of FUT1 Gene of Wuzhishan Pig

This study was aimed to detect FUT1 gene,analyze its structure,and reveal the distribution of SNP in Wuzhishan pig.FUT1 gene was amplified by PCR.Then the gene mutation was identified by sequencing.PCR-RFLP method was used to detect the FUT1 gene of 120 Wuzhishan pigs.Some characters of FUT1 gene were analyzed by bioinformatics tools.Two mutations were detected in the FUT1 genomic fragment,one in the coding region (A+307G) and the other in the 3'regulatory region (A+1856C).At the A+307G locus of coding region in FUT1 gene,100% of Wuzhishan pigs were GG genotype.In addition,bioinformatics analysis revealed that FUT1 gene promoter and the second exon region contained CpG islands.In this study,we obtained the sequences of FUT1 gene which laid a foundation for further studying its functions in Wuzhishan pig.     

五指山猪线粒体控制区序列分析及遗传多样性研究

为了研究五指山猪遗传多样性和系统地位,本研究采用PCR产物直接测序法得到55条五指山猪线粒体控制区(mtDNA D-Loop)全序列,并结合GenBank中发表的1条五指山猪mtDNA D-Loop全序列进行结构分析、遗传多样性研究及系统发育分析。结果发现,56条序列中出现21次保守区变异,即"TTATAAAACAC"序列重复,共定义13个单倍型,发现14个变异位点,单倍型多样度(Hd)和核苷酸多样度(Pi)分别为0.838和0.00334,表明五指山猪遗传多样性较丰富。五指山猪线粒体控制区序列构建的系统发育树和Network网络分析呈现两大分支,推测有两个母系起源,且与GenBank中其他23个猪种的聚类结果表明,五指山猪与长江流域以南地区的猪种有着较近的亲缘关系。     

Complete Mitochondrial DNA D-Loop Sequence and Genetic Diversity of Wuzhishan Pig

In order to research the genetic diversity and phylogenies of Wuzhishan pig, 56 complete mtDNA D-Loop were analyzed.55 sequences were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and 1 sequence was downloaded from GenBank.The results showed that repetitive sequence "TTATAAAACAC" appeared in the conservative regions of 21 mtDNA D-Loop sequences.13 haplotypes and 14 variable sites were observed in 56 sequences.Haplotype diversity and nucleotide diversity (Hd =0.838 and Pi=0.00334) indicated that Wuzhishan pig had high genetic diversity.Two branches in the phylogenetic tree and Network analysis diagram indicated that there were two maternal origins in Wuzhishan pig.The phylogenetic tree of Wuzhishan pig and other 23 species showed that Wuzhishan pig had close genetic relationship with the pig breeds in the south region of the Yangtze river.     

海南五指山猪Myf5与MyoD基因多态性分析

为研究海南五指山猪Myf5和MyoD基因的多态性分布情况,本试验通过PCR-RFLP方法对80头海南五指山猪进行了Myf5和MyoD基因型检测,并运用生物信息学方法对这两个基因的序列进行分析.结果发现,在Myf5基因第1外显子的HhaⅠ-RFLP位点上,五指山猪以CC和CG基因型为主;在Myf5基因第1外显子的Hsp92Ⅱ-RFLP位点上,五指山猪以AA基因型为主;在MyoD基因第1内含子的DdeⅠ-RFLP位点上,等位基因A在五指山猪中是优势等位基因.此外,Myf5和MyoD基因启动子区域和第1外显子处存在CpG岛.本研究得到海南五指山猪Myf5和MyoD基因的序列信息,为下一步五指山猪Myf5和MyoD基因的功能研究奠定基础.     

Polymorphism Analysis of Myf5 and MyoD Genes in Hainan Wuzhishan Pig

This study was aimed to investigate the distribution of genetic polymorphisms of Myf5 and MyoD genes in Hainan Wuzhishan pig.PCR-RFLP method was used to detect the Myf5 and MyoD of 80 Wushishan pigs.Some characters of Myf5 and MyoD genes were analyzed by bioinformatics tools.The main results were as follows at the HhaⅠ-RFLP locus of exon 1 in Myf5 gene,CC and CG genetypes were major in Wuzhishan pig.At the Hsp92Ⅱ-RFLP locus of exon 1 in Myf5 gene,AA genetype was major in Wuzhishan pig.At the DdeⅠ-RFLP locus of intron 1 in MyoD gene,allele A was predominant in Wuzhishan pig.In addition,bioinformatics analysis revealed that Myf5 and MyoD genes promoter and exon 1 region contained CpG islands.In this study,we obtained the sequences of Myf5 and MyoD genes which laid a foundation for further studying their functions in Hainan Wuzhishan pig.     

五指山猪背最长肌和半腱肌DNA甲基化检测分析

DNA甲基化作为真核生物基因组重要的表观遗传学修饰,对生物体基因的表达有重要的调控作用。为了研究五指山猪肌肉组织基因组DNA的甲基化程度,试验利用MSAP技术,使用筛选的10对引物扩增,检测五指山猪背最长肌和半腱肌的甲基化程度。结果显示:1月龄、2月龄、4月龄五指山猪背最长肌的平均甲基化率分别是44.78%、41.58%、38.92%;1月龄、2月龄、4月龄五指山猪半腱肌的平均甲基化率分别是41.70%、39.39%、38.81%。研究结果为五指山猪生长发育规律、系统选育及矮小机制等方面的研究提供表观遗传学依据。     

利用微卫星标记分析溧阳鸡的群体遗传变异

选用30对微卫星引物分析了溧阳鸡的等位基因组成,计算了各座位的基因杂合度和多态性信息含量。结果30个微卫星座位共检出156个等位基因,基因频率分布在0.0088-0.5之间,平均每对引物可检测5.2个等位基因,30个微卫星座位的平均杂合度为0.681,平均多态性含量为0.623,表明溧阳鸡群体遗传变异大,遗传多样性丰富。     

近交陆川猪的遗传稳定性研究

旨在探讨高度近交陆川猪的遗传稳定性。本试验采集20头近交和6头非近交陆川猪的耳组织样品进行个体基因组重测序,通过扫描全基因组SNPs分析近交陆川猪群体的遗传多样性,并基于基因组纯合度挖掘近交陆川猪群体中特异的纯合区域（region of homozygosity,ROHs）及相关基因。结果表明,近交陆川猪群体的观察杂合度（0.373）小于期望杂合度（0.491）,推测其发生了选择或者近交;系统进化树和群体遗传结构分析发现,近交陆川猪群体在近交过程中分化成为两个近交家系,且230、236、239、132、130及126号个体亲缘关系最近;在近交群体中,基因组纯合度和基因组长纯合片段比例的均值分别为59.64%和0.12,都极显著高于非近交群体53.18%和0.05（P<0.01）,说明该近交陆川猪群体已达到高度近交;近交群体和非近交群体中分别有1 250和633个ROHs,重叠分析结果显示,特异存在于近交群体中的阳性纯合区域（positive region of homozygosity,pROHs）有224个,其中由于近交产生的纯合突变可能影响参与激素合成过程、胰液分泌、膜脂代谢过程、IgA产生的肠道免疫网络及纹肌细胞分化等相关的1 322个基因。结果提示,近交陆川猪群体的遗传多样性低、基因组纯合度高且已达到高度近交,说明该群体的遗传稳定性高。此外,近交陆川猪群体在近交过程中产生的纯合突变可能与机体的免疫、生长等生产性状相关。