YWHAZ在小鼠早期胚胎发育过程中的作用

为了探究YWHAZ蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的表达、定位和作用,本试验利用RT-PCR和Western blot方法检测Ywhaz基因及其编码蛋白在小鼠早期胚胎发育中的表达;利用免疫荧光技术检测YWHAZ蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的定位;使用特异性的siRNA沉默合子中的Ywhaz,在胚胎发育的1.5,2.5,3.0,3.5,4.5,5.0 dpc分别观察2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚的发育率,阐明在合子中沉默Ywhaz基因对小鼠早期胚胎发育的影响。结果显示,Ywhaz mRNA及其编码蛋白在小鼠1-细胞、2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚中均有表达,YWHAZ蛋白定位在小鼠早期胚胎的细胞质和细胞核中。Ywhaz沉默组的2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚的发育率均极显著低于对照组(P<0.01),沉默组5.0 dpc囊胚率显著高于其4.5 dpc囊胚率(P<0.05)。结果表明,Ywhaz mRNA及其编码的蛋白在小鼠早期胚胎中有表达,其蛋白主要定位在早期胚胎的细胞核和细胞质中;在合子中沉默Ywhaz基因可导致小鼠早期胚胎发育率降低且存在明显...     

小鼠早期胚胎发育过程中的DNA去甲基化

表观遗传修饰在基因转录与表达、细胞生长与分化以及动物个体正常发育等过程中都具有重要的调控作用。表观遗传修饰发生异常,会引起机体生长发育中的各种异常。哺乳动物从精卵受精到附植前的胚胎早期发育阶段会发生重要的表观遗传重编程,主要包括DNA甲基化和组蛋白修饰。精卵受精后DNA发生主动和被动2种方式的去甲基化。本文主要综述了与DNA甲基化相关的蛋白和早期胚胎发育过程中的去甲基化机制,并对小鼠附植前胚胎发育过程中的DNA甲基化的动态变化进行了详细的论述。     

小鼠胚胎早期发育过程中OCT4作用的研究进展

OCT4属于POU转录因子。目前对于OCT4基因的研究认为在鼠和人体内,OCT4主要表达于胚胎干细胞及生殖细胞中,对于维持胚胎干细胞的多能性和自我更新有十分重要的作用,对于胚胎早期发育具有重大意义。但是目前OCT4在小鼠早期胚胎中的结合位点还不清晰,应进一步深入研究OCT4基因构建OCT4在小鼠早期胚胎发育过程中的调控网络,为揭开胚胎早期发育调控机制的面纱提供重要参考。     

应用于小鼠早期胚胎细胞的ChIP-seq体系中基因组水解酶的筛选

在过去的十几年中,染色质免疫共沉淀测序技术(ChIP-seq)成为了分析表观基因组和鉴定DNA相关蛋白重要结合位点的主要技术。然而,ChIP-seq技术目前仍存在一些技术难点。其中一个重要限制是ChIP-seq需要大量的起始材料,需要至少数百万个细胞才能启动,然而实验中有两个关键步骤往往会造成所使用的样本丢失,即染色质制备和免疫沉淀。本实验通过从染色体制备入手,通过选择两种不同核酸水解酶DNase和MNase,设计不同实验组验证最佳酶切浓度,以优化ChIP-seq体系。结果证明0.1U/μL的MNase为本实验中ChIP-seq最佳酶切浓度。结果为ChIP-seq体系的优化提供了参考,对ChIP-seq技术在小鼠早期胚胎细胞中的应用以及发展有一定的积极意义。     

黄芪多糖对小鼠腹腔巨噬细胞iNOS基因表达及NO生成的影响

研究黄芪多糖(APS)在体内对小鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达及产生一氧化氮(NO)的影响。分别按5、25、50、100、200mg/kg体重,连续1周以腹腔注射方式给予小鼠APS。分离小鼠腹腔巨噬细胞,QRT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞中iNOS的基因表达量;培养细胞24h,硝酸还原酶法检测上清中的NO含量,培养的单层巨噬细胞做吞噬中性红试验。结果显示,APS(100mg/kg和200mg/kg)可显著地促进巨噬细胞iNOS基因的表达和NO的产生,并显著(50、100、200mg/kg)增强巨噬细胞吞噬中性红功能,APS的作用呈浓度依赖性。体内条件下APS增强巨噬细胞功能的机制之一可能是促进巨噬细胞iNOS基因的表达进而催化产生NO。     

野菊花提取物对小鼠血清NO、NOS的影响

目的：探讨野菊花提取物对小鼠血清中一氧化氮（NO）、一氧化氮舍酶（NOS）的影响，以研究野菊花对动物心血管系统的药理作用机理。方法：将小鼠随机分为试验组和对照组，试验组小鼠腹腔注射野菊花提取物（2ml／kg），l：K／d，连续7d。用Griess试剂法测定血清中NO的含量；化学比色法测定血清中NOS的含量。结果：试验组小鼠血清中NO、NOS含量均显著高于对照组（P〈0．05）。结论：野菊花提取物通过增强NOS活性而增加NO含量，这可能为其舒张血管内皮、降低血压的作用机理之一。     

昆明小鼠早期胚胎发育时程

以昆明种小鼠为对象,在严格控光条件下,对交配后阴道栓形成时间、排卵时间、精子入卵与原核形成时间以及2-细胞至囊胚的发育时程等进行了系统研究。结果如下:(1)从注射hCG 当天(0 d)21:00(hCG后6 h)至次日(第1 天)1:00(hCG 后10 h),有84.2% 的超排小鼠形成阴道栓;(2)大部分小鼠(66% ～100% )排卵从hCG后第1 天2:00(hCG 后11 h)开始,至3:00～4:00(hCG后12～13 h)结束;(3)从hCG 后第1 天7:00(hCG后16 h)至11:00(hCG 后20 h),小鼠卵受精率为5.6% ～82.4% ;(4)从hCG后第1 天7:00(hCG 后16 h)至11:00(hCG 后20 h),原核形成率为4.4% ～67.5% ;(5)从hCG 后第1 天21:00(hCG 后30 h)至第2 天1:00(hCG后34 h),2-细胞形成率为14.9% ～83.1% ;hCG后第2 天19:00(hCG后52 h)至23:00(hCG后56 h),4-细胞形成率为12.9% ～85.7% ;hCG 后第3 天6:00(hCG后63 h)至10:00(hCG 后67 h),8-细胞形率为12.8% ～88.2% ;(6)从hCG 后第3 天10:00(hCG 后67 h)至24:00(hCG后81 h),8～16 细胞(早期桑葚胚)形成率由100% 下降到42.9% ;从hCG 后第3 天24:00(hCG 后81 h)至第4 天4:00(hCG后85 h),17～32 细胞(晚期桑葚胚)形成率由57.1% 增加到90.0% ;(7)从hCG 后第4 天6:00(hCG后87 h)至8:00(hCG后89 h),囊胚形成率从11.4% 上升到60.9% 。     

排卵不同阶段氯胺酮麻醉对昆明小鼠卵母细胞和早期胚胎的影响

主要研究排卵不同阶段氯胺酮III期麻醉深度对昆明小鼠卵母细胞和早期胚胎的影响。结果表明:排卵前麻醉(150mg/kg体重)造成卵母细胞和早期胚胎数量的极显著下降(P<0.01),而排卵期间麻醉及排卵后麻醉对排卵及早期胚胎数量影响不显著(P>0.05),排卵不同阶段麻醉均造成一定数量异常卵母细胞和非正常胚胎出现。因此,排卵期间麻醉小鼠相比排卵前及排卵后麻醉小鼠对卵母细胞和早期胚胎的影响最小,但仍有可能造成卵母细胞异常、胚胎畸形的发生。     

3种中药有效成分对小鼠胚胎体外发育的影响

以mCZB添加抗生素为对照组,以分别添加0.1 mg/L小檗碱(berberine,BR)、0.5 mg/L川芎嗪(ligustrazine,Lig)和4 mg/L黄芩苷(baicalin,Bai)为试验组,比较各组胚胎孵化率、微滴中一氧化氮(Nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及孵化胚胎的细胞数量,从而探讨中药有效成分对小鼠早期胚胎体外发育的影响。结果显示,Bai组(80.2%,81.3%)、Lig组(78.9%,77.6%)及BR组(76.7%,71.6%)胚胎孵化率极显著高于对照组(50.7%、47.8%)(P<0.01)。各组间NO含量,72 h较24 h均有减少,而120 h又均有增加且最高。各组间MDA含量,72 h和120 h与24 h比较呈现增加趋势,除Bai组120 h外,对照组均高于试验组。孵化胚胎细胞计数结果显示,BR组(87.2±8.6)、Lig组(83.9±7.7)和Bai组(81.9±6.2)与对照组(77.4±5.6)差异极显著(P<0.01)。结果表明:3种中药有效成分均能促进小鼠早期胚胎的体外发育及胚胎细胞增殖,并对NO和MDA含量有一定影响。     

昆明小鼠早期胚胎G6PDH在CZB和KSOM中的转录与表达

根据小鼠肌肉 6 -磷酸葡萄糖脱氢酶 (G6 PDH)的 c DNA序列 ,设计并合成内外 2对引物 ,以巢式 RT- PCR检测了昆明小鼠体外培养的 2 -、4 -细胞期早期胚胎 G6 PDH m RNA的表达情况。结果显示 ,以不含葡萄糖的培养液 CZB体外培养发育至 2 -、4 -细胞阶段昆明小鼠早期胚胎 G6 PDH m RNA经反转录后 ,均能以外引物扩增产物为模板通过内引物扩增出 1条 378bp特异性条带 ;而以含葡萄糖的培养液 KSOM体外培养发育至 2 -、4 -细胞阶段昆明小鼠早期胚胎G6 PDH m RNA经反转录后 ,通过内外 2对引物均不能扩增出特异性条带。表明 CZB液培养的昆明小鼠 2 -、4 -细胞期胚胎 G6 PDH基因已转录与表达 ,磷酸戊糖途径已是其代谢葡萄糖的主要方式之一 ;而以 KSOM液培养的昆明小鼠2 -、4 -细胞期胚胎 G6 PDH基因没有转录与表达。说明培养液中含有葡萄糖的昆明小鼠 2 -、4 -细胞期胚胎不存在磷酸戊糖代谢途径 ,不含葡萄糖的则存在磷酸戊糖途径。     

Balb/c小鼠肺组织一氧化氮及一氧化氮合酶的动态变化

为探讨Balb/c小鼠正常生理状况下肺组织中一氧化氮自由基含量以及一氧化氮合酶活性的动态变化,采用电子自旋共振法直接测定了一氧化氮自由基含量,采用分光光度计法测定了一氧化氮合酶的活性.结果表明:在第3,6,7,12天Balb/c小鼠肺组织的一氧化氮自由基含量、一氧化氮合酶活性均无显著性差异(P＞0.05).说明生理状态下,Balb/c小鼠肺组织一氧化氮自由基的产生维持动态平衡.     

鸭胚与小鼠的破骨细胞特性比较

本文分别采集鸭胚与小鼠的破骨细胞(osteoclast,OC),通过检测TRAP阳性细胞数及骨吸收陷窝面积,比较鸭胚与小鼠的OC形态、数目及活性。结果表明,鸭胚OC形状不规则、体积较大、核多且主要分布于胞质,而小鼠OC形状较规则、体积小、核多且大多分布于细胞边缘;随机选取视野中,鸭胚与小鼠OC数差异不显著;而鸭胚OC骨吸收陷窝面积显著大于小鼠OC骨吸收陷窝面积(P0.05)。表明鸭胚与小鼠OC均具有OC的普遍特征,但两者在骨吸收活性方面存在差异。     

Functional role of type VI collagen during early feather development of the chicken embryo in vitro

The regulatory function of type VI collagen during early feather development in embryonic chickens was investigated at the cellular and organ levels. Immunohistochemical studies of embryonic chicken skin showed that type VI collagen was distributed in spatial‐specific and temporal‐specific manners related to early feather development. To clarify the role of type VI collagen, we studied the feather development in intact, reconstituted and reconstituted gel skin cultures. When ethyl‐3,4‐dihydroxybenzoate (EDHB) was added to the medium of intact skin as an inhibitor of type VI collagen synthesis, the feather buds did not elongate and the number of neural cell adhesion molecule (NCAM)‐positive cells was reduced. However, the magnitudes of both suppressive effects of EDHB were reduced by the addition of liquid type VI collagen. Similar improvement was also observed in the reconstituted skin with liquid type VI collagen and in the reconstituted gel skin with solid type VI collagen at a low concentration. Moreover, type VI collagen promoted feather bud development in the absence of EDHB. However, a high concentration of solid type VI collagen in the reconstituted gel skin arrested the feather bud elongation, and antitype VI collagen antibodies caused feather buds to become longer and smaller in the reconstituted skin. At the cellular level, type VI collagen affected the proliferation, migration and NCAM expression of mesenchymal cells. These results suggest that type VI collagen regulates early feather development by controlling mesenchymal cell behavior.     

静脉注射L-氨基胍对肉鸡肺动脉压及其相关指标的影响

按常规饲养条件饲养AA雄性肉鸡120羽，30日龄时随机分为试验组（T组）和对照组（C组）。T组肉鸡静脉注射L-AG（40mg／kg），C组肉鸡静脉注射生理盐水。分别在注射L-AG和生理盐水1、2、4h后测定平均肺动脉压（mPAP）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性、原生型一氧化氮舍酶（cNOS）活性、一氧化氮（NO）含量、红细胞压积（PCV）、电解质浓度、pH、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量。结果显示：（1）试验组mPAP、NO含量和iNOS活性均显著或极显著低于对照组（P〈0．05或P〈0．01）；（2）PCV和Ca^2＋在给药后2h和4h与对照组差异显著（P〈0．05）；（3）K^＋浓度在给药1h和2h后显著或极显著低于时照组（P〈0．05或P〈0．01）。结果表明，L-AG通过抑制iNOS活性，引起肉鸡肺动脉压的升高，从而推测iNOS具有调节肉鸡体内mPAP的作用并与肉鸡肺动脉高压综合征发生有着密切的联系。     

L-苯丙氨酸对小鼠妊娠早期胚胎发育及子宫局部肥大细胞的影响

为了研究交感神经对小鼠胚胎着床和发育的作用机制,本文筛选出合适的L-苯丙氨酸浓度(320 mg/kg体重),处理孕鼠,观察胚胎着床和发育,通过甲苯胺蓝染色检测子宫局部肥大细胞的变化.研究结果显示,320 mg/kg体重L-苯丙氨酸能显著降低胚胎着床数目,分别下降了45％ (E7)和58％(E9),并且显著延缓胚胎的发育;与对照组相比,着床后子宫局部肥大细胞数目显著降低,分别在E5～E9降低了36.62％、64.59％和23.30％,差异显著.由本研究结果可以推断一定浓度的L-苯丙氨酸可以激活交感神经,影响妊娠早期子宫局部肥大细胞数量,从而改变子宫局部微环境,影响胚胎着床和发育.     

肺动脉高压综合征发病过程中肉鸡血清和肺脏iNOS和cNOS活性变化

常规饲养条件喂养的大群AA肉鸡，按临床症状分为肺动脉高压组（M组），肺动脉高压腹水组（S组）和正常对照组（C组）。分别测定21、28、35和42日龄S组、M组和C组肉鸡的腹水心脏指数（AHI）、全心与体重比（WH／BW）、平均肺动脉高压（mPAP）、血清一氧化氮（NO）水平、肺脏和血清cNOS和iNOS活性。试验结果表明：（1）S组和M组全心与体重比值（TV／BW）以及S组血清NO水平均从28日龄起显著或极显著高于C组（P〈O．01或P〈0．05）；（2）S组肺组织cNOS水平显著或极显著低于C组（P〈0．01或P〈0．05）；（3）S组肺组织iNOS在21、35和42日龄显著或极显著高于C组（P〈0．01或P〈0．05）；（4）S组从28日龄起血清中cNOS和iNOS与C组差异显著或极显著（P〈0．01或P〈0．05）；（5）正常对照组肉鸡血清中iNOS活性在21、35和42日龄均显著或极显著低于血清中cNOS活性（P〈0．01或P〈0．05）。此研究结果提示cNOS和iNOS活性的变化与PHS发病机理有着密切的关系，并在其中发挥着重要的作用。     

早期限饲对肉鸡血浆NO水平、红细胞比容和心脏指数的影响

试验测定了常温和低温下限饲肉鸡和非限饲肉鸡体内一氧化氮(NO)含量、红细胞比容(PCV)和心脏指数的变化,以探讨早期限饲降低肉鸡肺动脉高压综合征(PHS)发病率的机理。试验结果显示低温下肉鸡的PCV值、心脏指数和PHS的发病率显著升高,NO水平在低温早期显著降低,然而随着低温时间的延长,低温处理组肉鸡的血浆NO水平反而代偿性升高。早期限饲显著降低了肉鸡生长早期的红细胞压积值,并显著降低了42日龄心脏指数和PHS的发病率。限饲鸡在限饲期间血浆NO水平显著降低,但其他阶段与非限饲鸡差异不显著。这提示早期限饲能够缓解肉鸡肺动脉高压和右心肥大的产生,其机理可能与NO和PCV改变所致的血流动力学变化有关。     

Functional indispensability of fibronectin associated on the mesenchymal cell surface during the early period of feather development in the chick embryo in vitro

To clarify the role of fibronectin (FN) during the early period of feather development, reconstituted skin consisting of intact epithelium and isolated mesenchymal cells from embryonal chick skin was used. In early feather development, FN was localized around mesenchymal cells of the dermal condensation. Isolated mesenchymal cells had associated with FN on their surfaces. FN on the cell surface dissociated following EDTA treatment, and EDTA‐treated cells re‐associated with exogenous FN. The intact epithelium also bound to exogenous FN at the placode. When FN‐associated or FN‐reassociated mesenchymal cells were used, the reconstituted skin formed feather rudiments only at the positions where the epithelial placode existed originally, and the locality of tenascin transferred from the placode to the mesenchyme during the period of feather bud formation. However, in reconstituted skin using FN‐dissociated mesenchymal cells, feather rudiments did not form. Additionally, the epithelial placodes disappeared, and tenascin was distributed uniformly on the surface of the epithelium and not localized in the mesenchyme. These findings suggest that FN associated on the surfaces of mesenchymal cells maintains the functions of mesenchymal cells as dermal condensation and mediates epithelial‐mesenchymal interactions during the early period of feather development. The results also suggest that reconstituted skin is a useful tool for functional studies on the extracellular matrix.     

Endometrial nitric oxide synthase activity in mares susceptible or resistant to persistent breeding‐induced endometritis and the effect of a specific iNOS inhibitor in vitro

Emerging research suggests that the nitric oxide system may play a role in persistent breeding‐induced endometritis (PBIE) in the mare. Differences in uterine nitric oxide (NO) levels between mares susceptible or resistant to PBIE and a dose‐dependent inhibitory effect of NO on uterine contractility have been demonstrated. The objectives of this study were to investigate the difference in total nitric oxide synthase (NOS) activity of the endometrium between susceptible and resistant mares and the effect of a specific inducible nitric oxide synthase (iNOS) inhibitor on the endometrial NOS activity in vitro. Six susceptible and six resistant mares were selected based on preset criteria and the results of an intrauterine challenge with killed spermatozoa during oestrus. Endometrial biopsy samples were collected 24 hr post‐challenge and cultured at 37°C for 24 hr in L‐arginine supplemented minimum essential medium with or without a specific iNOS inhibitor (1,400 W dihydrochloride, 1 mM). The medium and the cultured endometrial tissue were collected after 24 hr of culture and assayed for NO and total protein, respectively. Total NO content of the medium, normalized to endometrial tissue wet weight or total protein, was used as a measure of endometrial NOS activity. Non‐parametric tests were applied for statistical analysis. Susceptible mares had significantly greater endometrial NOS activity than resistant mares. The iNOS inhibitor treatment significantly reduced NOS activity in endometrial samples derived from susceptible and resistant mares. These findings provide a basis for in vivo testing of specific iNOS inhibitors as preventative or therapeutic options for PBIE in mares.     

一氧化氮在动物低氧适应中的生理和分子机制

近年来,国内外学者在对高原民族和高原动物低氧适应相关基因的探索中揭示了藏族的低氧适应生理机制;高含量的一氧化氮(nitric oxide,NO)舒张血管并导致高速度的血流,高速度的血流弥补了高海拔低氧。可见一氧化氮在动物低氧适应中起着重要的作用。作者对低氧条件下一氧化氮的合成、传递、生物学效应及调控表达机制进行了综述。