短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯与性质研究

将短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)Zkud202-4液体的发酵液离心去菌体,用硫酸铵盐析得粗酶,透析除盐后进行Sephadex G-75柱层析得到电泳纯碱性蛋白酶,用该法提纯的碱性蛋白酶比活力从粗酶液的155.5 U/mg提高到了954 U/mg,回收率为27.6%.该酶水解酪蛋白的最适反应温度为50℃,最适作用pH为10,且该酶具有较高的热稳定性和耐碱性.经SDS-PAGE测定,其分子质量约为2.5 ku.     

碱性蛋白酶PB92在枯草芽孢杆菌中高效转化方法的建立及其分泌表达

枯草芽孢杆菌转换效率低一直制约着该菌基因改造技术的应用,本研究比较了化学法和高渗电转化法对枯草芽孢杆菌转化率的影响,发现高渗电转化法的转化效率较高.从Bacillus alcalophillus PB92中扩增出碱性蛋白酶基因Mapr,构建成重组分泌型表达载体pWB980-Mapr,碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌DB104中得到表达.SDS-PAGE 分析,重组蛋白酶的分子量为 28 000.pWB980-Mapr在枯草芽孢杆菌中表达的酶活为1 563 U/ml.     

枯草芽孢杆菌W-QX-1碱性蛋白酶的性质及其抗烟草花叶病毒活性初步研究

为发现新的天然源抗植物病毒活性物质,从枯草芽孢杆菌W-QX-1的发酵液中粗提了碱性蛋白酶,并初步测定了其抗TMV活性及其酶学性质。结果表明,W-QX-1碱性蛋白酶作用最适温度为50℃;在硼酸-硼砂缓冲液中的作用最适pH为7.8;在Tris-HCl缓冲液中的作用最适pH为8.0;在pH6~10范围内,45℃以下酶的性质稳定;对干酪素、明胶、牛血清白蛋白和精炼丝素均具有一定的降解能力,其中对干酪素的降解力最强。采用半叶法测定了其抗烟草花叶病毒TMV的活性,发现该酶对TMV的体外钝化作用明显,在酶液浓度为50 mg/L时,其钝化效果即可达到53.40%;而该酶对TMV的初侵染和体内复制增殖也具有一定的抑制能力。试验结果表明,在TMV侵染前24 h施用浓度为200 mg/L碱性蛋白酶液抑制其侵染力的效果达到50.35%,而在TMV侵染后抑制其复制增殖的作用并不明显。可见,该酶是一种性质稳定的广谱性蛋白水解酶,并具有一定的抗TMV活性。     

芽孢杆菌碱性蛋白酶工业废水对河流的污染与防治

用从碱性蛋白酶工业废水的受纳水体中检出废水原有芽孢杆菌的方法，进行废水芽孢杆菌对水体污染度分析．结果表明，污染面主要在受纳水体下游．与上游相比其芽孢杆菌数、细菌总数、非离子氨、ＢＯＤ５、ＣＯＤｃｒ分别高１０．２１、１．７１、９．０、２．６９、０．５５倍，溶解氧降低１／４，采用碱式氯化铝和聚丙烯酰胺的絮凝处理工艺，除菌率达９９％以上     

芽孢杆菌碱性蛋白酶工业废水对河流的污染与防治

用从碱性蛋白酶工业废水的受纳水体中检出废水原有芽孢杆菌的方法，进行废水芽孢杆菌对水体污染度分析。结果表明，污染面主要在受纳水体下游，与上游相比其芽孢杆菌数、细菌总数、非离子氨、ＢＯＤ５、ＣＯＤｃｒ分别高１０．２１、１．７１、９．０、２．６９、０．５５倍，溶解氧降低１／４，采用碱式氯化铝和聚丙烯酰胺的絮凝处理工艺，除菌率达９９％以上。     

高产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌的研究进展

碱性蛋白酶(Alkaline protease)广泛存在于微生物中,最早发现在猪的胰脏中,1913年Rhom首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。1945年瑞士的Dr．Jagg等发现了微生物碱性蛋白酶,使其成为洗涤剂的主要添加剂之一。碱性蛋白酶在丝绸、制革工业、饲料工业、动物食品加工中也有广泛用途,     

产碱性蛋白酶菌株ZK202的鉴定及其诱变

[目的]为产碱性蛋白酶菌株在生产中的应用提供依据。[方法]从河南省兰考县盐碱地土壤中分离1株产碱性蛋白酶的菌株ZK202,通过形态观察、生理生化试验和16SrDNA序列分析对其进行鉴定。经紫外照射和DES处理后,测定诱变菌株的酶活力。[结果]菌株ZK202的形态符合芽孢杆菌属的特征,其16SrDNA序列与短小芽孢杆菌的同源性在99%以上。该菌株为短小芽孢杆菌一个新亚种,命名为Bacillus pumilus ZK202,属中等嗜盐菌。ZK202在氯化钠浓度0～12.5%条件下均能生长,以浓度5.0%时最佳。ZK202在碱性环境中生长良好,当培养基pH值在11.0以上时仍能生长,也属嗜碱性菌。经复合诱变后,菌株Zkud202-4发酵液的酶活力达321U/ml,比出发菌株高3.9倍。[结论]Zkud202-4具有稳定的产酶性能,可作为产碱性蛋白酶的突变菌株。     

贵阳腐霉Prl蛋白酶的初步纯化及其酶学特性研究

将Prl粗酶液通过凝胶过滤层析、SDS-PAGE等方法进行了初步的纯化。在凝胶过滤层析后,发现两种分子量不同的Prl同工酶（PrlEl,PrlE2）。以Suc-（Ala）2-Pro-Phe-PNA为底物时,Prl酶的Km值为0．0176μmol·L^-1,50μL粗酶液反应10min时的Vmax为0．1446;PrlEl和PrlE2最适反应温度均为50％;PrlEl和PrlE2最适反应pH均为8．2。Prl酶的最佳保存温度在-20℃与-80℃。     

枯草芽孢杆菌C-36纤维索酶的纯化及酶学性质

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶经硫酸铵、SephadexG-75、SephadexG-100分离纯化后,得到一个电泳纯的葡聚糖内切酶。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量约为35kD。最适反应温度和pH分别为65℃和pH6.8,Zn2+、Pb2+、Fe3+对酶有抑制作用,Ba2+、Fe2+对酶有激活作用,在50℃,pH6.8条件下,酶对CMC-Na的米氏常数Km为0.34g/L,最大反应速度Vmax为0.17mg/(min.mL)。     

猪源枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其特性研究

为筛选高生物活性的益生菌菌株,通过热处理从健康猪肠道内容物、粪便、土壤等来源筛选具有较高抗逆性的菌株,综合形态特征、生理生化特性及16S r DNA序列分析进行鉴定;通过耐人工胃液、耐人工肠液、耐胆盐、耐高温、产酶试验、药敏试验、抑菌试验来研究菌株的特性。综合鉴定菌株ZZS16-3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其在p H为2.0的人工胃液中,存活率可达到65.8%,在胆盐浓度为0.3%时存活率为51.2%,在100℃处理3 min后其存活率达到11.2%,可产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等,对于绝大多数的药物是敏感的,对金黄色葡萄球菌则有明显的抑菌效果。枯草芽孢杆菌ZZS16-3具有较强的抗逆性和潜在的益生性能,为研制微生态制剂提供了优良的菌种参考。     

Purification and characterization of an extracellular protease from Clonostachys rosea

An extracellular protease from Clonostachys rosea (syn . Gliocladium roseum) was purified to SDS-PAGE homogeneity with 14-fold purification by ultrafiltration、ammonium sulfate precipetation、hydrophobic interaction chromatography and anion exchange chromatography. The molecular weight of the protease was 32 kDa as estimated by SDS-PAGE. The N-terminal sequence of first 10 amino acids was A-T-Q-S-N-A-P-W-G-L. This enzyme exhibited pH and temperature optima of 9-10 and 60 ℃, res…     

重组枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的纯化和性质研究

研究嗜热枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组酶的纯化和性质。该基因序列全长723bp,编码240个氨基酸。根据基因同源性分析,该壳聚糖酶与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168的壳聚糖酶前体基因的同源性最高,为98%。粗酶液经Ni-IDA亲和层析得到电泳级纯酶,比活力高达1 051.8U/mg。经测定,该酶反应最适温度为45℃,最适pH为6.0,在40℃和pH 4.5～8.0下稳定。该酶为内切壳聚糖酶,能够高效降解壳聚糖,生成一系列的壳寡糖,在壳寡糖的制备生产方面具有广阔的应用前景。     

斑点叉尾鮰鱼肠蛋白酶的分离纯化及其酶学性质

以斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus鱼肠道为原料提取蛋白酶,对分离条件进行了优化,并对部分酶学性质进行了研究。结果表明：鱼肠内的蛋白酶在硫酸铵饱和度为70%时,所得沉淀中酶活力最高。经过阴离子交换层析分离后,蛋白酶的纯化倍数达到了218倍。该蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH为7.5,具有良好的低温稳定性和酸碱稳定性,米氏常数为5.4 g/L。K^＋和Ca^2＋离子对该蛋白酶活性有较弱的激活作用,Mg^2＋则能显著激活蛋白酶活性;Na＋和Zn2＋对蛋白酶的活性有较弱抑制作用,而Cu^2＋和EDTA能显著抑制蛋白酶活性。     

几种离子和有机化合物对枯草芽胞杆菌蛋白酶活力的影响

研究了不同浓度的金属离子及有机化合物对枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）蛋白酶活力的影响，结果：①在5种金属离子中，Mg^2 、Na^ 、K^ 对酶有激活作用，其中Mg^2 浓度为2mmol/L时，激活作用最大。随着金属离子浓度的降低，K^ 和Na^ 对酶的激活作产减弱，Ca^2 对Zn^2 对酶活力有抑制作用。②在7种重金属离子中，除Mn^2 对蛋白酶有激活作用外，Cu^2 、Pb^2 、Cd^2 、Co^2 、Cr^3 和Cr^6 均对蛋白酶有抑制作用。③在有机化合物中，半胱氨酸和EDTA对酶均有激活作用，且在20mmol/L时最为强裂。④Na^ -K^ 、Ca^2 -Mg^2 和Cu^2 -EDTA共同作用时对蛋白酶活力均有不同程度的抑制作用。     

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶的纯化及酶学性质

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶经硫酸铵、SephadexG-75、SephadexG-100分离纯化后,得到一个电泳纯的葡聚糖内切酶。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量约为35kD。最适反应温度和pH分别为65℃和pH6.8,Zn2 、Pb2 、Fe3 对酶有抑制作用,Ba2 、Fe2 对酶有激活作用,在50℃,pH6.8条件下,酶对CMC-Na的米氏常数Km为0.34g/L,最大反应速度Vmax为0.17mg/(min.mL)。     

侧孢短芽孢杆菌碱性蛋白酶基因BLG4在枯草芽孢杆菌WB600中的高效表达

侧孢短芽孢杆菌G4菌株在侵染线虫的过程中可以分泌蛋白酶,降解线虫体壁,从而帮助细菌侵入宿主体内.在本文中,侧孢短芽孢杆菌的胞外蛋白酶BLG4基因经克隆后插入到改造后的枯草芽孢杆菌表达载体pWT22中,构建重组表达质粒pWT22-BLG4.构建成功的重组质粒通过化学转化法转入枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株WB6000中,转化...     

纳豆激酶分离纯化及性质研究

在实验室条件下,通过生理盐水浸提、硫酸铵分级沉淀、亲和层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤层析,从纳豆中提取纳豆激酶。纯化后的纳豆激酶样品在SDS-PAGE银染中呈单一条带,纯度经密度扫描证实在95%以上,纤溶活性总收率达到52.9%。纳豆激酶性质研究结果发现,其最适pH值为7.5,对温度变化敏感,纤溶活性可被Ca2+,Ba2+,Na+等金属离子激活。纳豆激酶在水溶液中受EDTA强烈抑制及低离子强度条件下产生自我降解现象。