鸡醛化红细胞在鸽Ⅰ型副粘病毒HA和HI试验中的应用

在血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验中，传统的方法采用新鲜红细胞。由于新鲜红细胞容易破碎，保存时间短，每次试验需临时准备，使用很不方便。本文采用醛化红细胞进行鸽1型副粘病毒的HA和HI试验，并与新鲜红细胞进行对照，结果表明，两种红细胞在鸽1型副粘病毒的HA和HI试验中的结果基本一致，而使用醛化红细胞更为便利。现将结果报道如下。1材料与方法l．l鸽1型副粘病毒（鸽A／PMV－1）；鸽A”MV－IZH株由本室鉴定保存，在9－11日龄鸡胚培养后收获尿囊液无菌检查后置4C保存备用。用于HI试验的病毒经0．2％甲醛37C灭活24小时后置…     

醛化红细胞在“兔瘟”快速诊断中的应用

使用醛化人 O 型红细胞与新鲜人 O 型红细胞进行“兔瘟”瓷板 HA 和 HI 定性试验证明,两者检测效果基本相同。为了使试验更快速和方便,在该试验中可以使用醛化红细胞。在用“快速二次醛化法”和改良 Csimas 法醛化的红细胞比较结果表明,前者优于后者,方法简易,醛化时间缩短近20倍。笔者推荐使用“快速二次醛化法”醛化的人 O 型红细胞。     

新城疫HA-HI试验中可用豚鼠醛化红细胞代替鸡新鲜红细胞

在鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验中,将豚鼠红细胞用戊二醛醛化处理后配制成2%细胞悬液,与2%新鲜豚鼠红细胞、1%新鲜鸡红细胞获得的检测结果基本一致.经醛化的豚鼠红细胞在4℃或室温条件下也能长时间保存而不溶血.结果表明,在新城疫HA-HI试验中可以用豚鼠醛化红细胞代替鸡新鲜红细胞.     

兔出血症的免疫诊断及防治

兔病毒性出血症又称兔瘟。自1984年在我国江苏南部地区首次暴发后,短期内迅速蔓延至全国20几个省(市),严重地威胁着养兔生产。为了有效地控制此病,不少院所进行研究并取得了较好效果。本文就我国对此病免疫诊断及防治方面的研究概况综述如下:兔出血症的免疫诊断一、血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验HA 和 HI 是目前诊断兔出血症最基本方法。刘胜江等(1984)使用高速离心的病兔肝悬液为待检物,以1%人○型红血球在96孔 U 型微量反应板上进行了 HA 和 HI 试验,对江苏南部地区暴发的病兔进行检测,证实本病在我国首次流行。张再清等(1989)用戍二醛处理人红细胞代替新鲜人红细胞     

应用反向间接血凝法(IHA)检测冻兔肉产品中兔出血症病毒的研究

兔出血症病毒的常规检测方法是血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验,此法所用新鲜人红细胞均需用前洗涤,较为不便,为此,我们选用双醛化绵羊红细胞做成抗体致敏红细胞以代替新鲜的人红细胞,以利测毒技术的推广应用。一、材料和方法(一)材料1.兔的肌肉及骨髓检测材料由邳县肉联厂提供。2.双醛化绵羊红细胞由南京农业大学兽医微生物教研组或江苏省农科院兽医所提     

不同醛化方法制备的鸡红细胞对新城疫病毒的血凝对比试验

在血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验中,由于新鲜红细胞容易破碎,保存时间短,每次试验需临时准备,使用很不方便。本文采用醛化红细胞进行新城疫的HA试验,并与新鲜红细胞进行对照。结果表明两种红细胞在新城疫的HA试验中的结果基本一致,效果良好。     

用于“兔瘟”HA试验的冻干醛化红细胞的研制

冻干醛化红细胞与新鲜人O型红细胞对“兔瘟”的诊断效果一致,两者呈显著正相关(r=0.9506)。冻干醛化红细胞4℃保存10个月,比在相同条件下保存的醛化红细胞悬液的HA效价高3个滴度。     

“兔瘟”红细胞诊断液的研制

诊断“兔瘟”的醛化人“O”型红细胞可长期保存;提出了病料处理方法,消除了非特异性反应;醛化的与新鲜的人“O”型红细胞诊断液效果相当。“兔瘟”病毒具有凝集人“O 型”红细胞的特性,但使用新鲜的红细胞多为不便。为此,本文就醛化红细胞的使用效果及病料处理方法进行了研究,现报告如下。     

应用间接血凝试验检测兔出血症病毒抗体的研究

应用纯化兔出血症病毒抗原,以戊二醛醛化绵羊红细胞为载体,成功地建立了间接血凝试验用以检测兔出血症病毒抗体.与血凝抑制试验和琼脂双扩散试验比较,其敏感性比血凝抑制试验高32倍,比琼脂双扩散试验高1024倍.致敏红细胞于4°C保存四个月仍有效.     

在鸡新城疫HA和HI试验中使用醛化红细胞的试验观察

长期以来,在鸡新城疫(ND)血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验中均使用新鲜鸡红细胞,由于这种新鲜红细胞保存时间短,使用之前临时采血洗涤,费时又不方便;同时因不同批次或不同鸡只个体红细胞的差异而影响检测结果。而醛化红细胞具有保存时间长(一年左右)、不溶血、不易破碎和使用方便等优点。笔者在鸡新城疫 HA 和 HI 试验中使用醛化红细胞替代新鲜红细胞进行了试验观察,获得满意的效果,现报告如下。     

Hemagglutination and antigenic comparison of rabbit hemorrhagic disease virus

The hemagglutinating activity and serological properties of three strains of rabbit hemorrhagic disease virus, Chinese, Korean and Shizuoka, which was first isolated in Japan, were examined by hemagglutination (HA) and cross hemagglutination inhibition (HI) test with human erythrocytes. Similar results were observed between the Chinese and Korean strains, both of which gave positive HA at 4 degrees C with O, A, B and AB, and at 22 degrees C with B and AB blood groups. In the Shizuoka strain, positive HA was observed at 4 degrees C with O, A, B and AB, at 22 degrees C with A, B And AB, and at 37 degrees C with B blood group. In experimentally infected rabbits, HI antibody in these animals showed a titer of 16,384 or 32,768 at 4 weeks after inoculation. No serological difference was observed in three strains by cross HI test.     

兔病毒性出血症病毒“LQ”株的分离鉴定

对成都龙泉某兔场疑似兔病毒性出血症(RHD)发病兔的病料进行细菌学检查以及血凝性、特异性鉴定,并进一步进行致病性鉴定。结果表明:RHDV LQ株对人"O"型红细胞具有高度血凝性,血凝效价达10×212;RHDV抗血清可特异性抑制RHDV LQ株对人"O"型红细胞的凝集;RHDV LQ株对家兔的LD50为10-6.87/mL,是一株对家兔具有高致病力的强毒株。     

猪体内筛选RHDV VP60 T细胞表位的优势区

应用戊二醛醛化的人＂O＂型红细胞纯化兔出血症病毒（RHDV）,对非免猪进行3次免疫后,分离外周血淋巴细胞经不同段重组杆状病毒（共分5段表达）、纯化的病毒、Con A刺激后进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测。结果显示,纯化病毒的血凝效价为28,与未纯化的RHDV毒价相差1个滴度;WST检测结果为免疫组经3段重组杆状病毒刺激的值最高;IFN-γ和IL-2检测结果也是3段重组杆状病毒刺激的值最高;IL-4检测结果为3段重组杆状病毒刺激的值最低。由此表明病毒经纯化后效果好,3段重组杆状病毒区域为T细胞表位优势区,这为RHDV T细胞表位的进一步研究奠定基础。     

Study on the Characteristics of Two Low Hemagglutinating Activity H9N2 AIV Strains

To study the characteristics of 2 low hemagglutinating activity H9N2 avian influenza virus (AIV) strains.2 strains were identified by HA/HI,electron microscope observation,HA and NA sequencing.The virus characteristics were studied by morphology,chemistry and biology.2 isolates were identified as H9N2 AIV.The observations demonstrated that the virions expressed various shapes of spherical,oval,elongated forms and polymorphism with diameters in a range of 80 to 120 nm.Hemagglutinin(HA) of the 2 strains was medium-stable to heat,and they were heat-resistant under 50 ℃.2 isolates could agglutinate cock and human O type red blood cells.The agglutination did not appear on the original isolates,but recovered with the passage of virus gradually.2 isolates did not agglutinate pig,cattle,sheep,rabbit and horse red blood cells.2 strains were not sensitive to the ether and chloroform,and only one isolate was sensitive to acids.2 strains were not fatal to the chicken embryo,and the EID₅₀ were both 1×10^-7/0.2 mL.The small White mice showed no clinical symptoms and no deaths after being inoculated with the viruses via respiratory route in our experiment.Serum antibody HI titers of the survived mice were measured after inoculated 14 d,and the antibody of H9N2 AIV were positive.Some tolerant H9N2 strains existed in live animal markets of Shanghai area.     

2株弱血凝活性H9N2亚型禽流感病毒特性的研究

试验旨在对2株血凝活性较弱的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)进行病毒特性的研究。采用HA/HI、电镜观察、HA和NA测序等方法对2株分离株进行了病毒的鉴定;采用形态学、化学和生物学方法对这2株分离株进行研究。2株病毒被确定为A型H9N2亚型AIV;病毒粒子在透射电镜下为圆形、椭圆形、杆状并呈多型性,大小为80~120 nm;血凝素(HA)均为中等耐热型;病毒50 ℃均耐热;均能凝集公鸡和人O型红细胞,但凝集作用开始并未出现,而是随着病毒的传代逐渐恢复;均不凝集猪、牛、羊、兔和马红细胞;2株病毒均对乙醚、氯仿不敏感,只有1株病毒对酸敏感;病毒对鸡胚无致死性,EID₅₀均为1×10^-7/0.2 mL;经鼻腔途径感染小白鼠,均未导致小鼠出现症状和死亡,接种后第14天在小鼠血清中可检出相应病毒的抗体。研究结果表明,上海地区活禽交易市场存在对环境条件具有较强耐受性的H9N2亚型AIV。     

中国首例兔出血症病毒2型(RHDV2/b/GI.2)的鉴定及病理学观察

本试验旨在鉴定四川金堂某兔场疑似兔出血症病毒2型（RHDV2）感染疫情的病原,并分析病兔的病理组织学变化。利用血凝试验和RT-PCR检测病死兔内脏组织中的病原,取病变组织制作病理切片,观察分析各组织的病理组织学变化,同时应用病兔肝脏悬液感染幼兔,分析该毒株的致病力。血凝试验结果显示,所采集病死兔肝脏样品能凝集人"O"型血红细胞;RT-PCR扩增及测序结果显示,多对引物均能从样品中扩增出RHDV2特异性条带;病理组织学观察结果显示,病兔多脏器严重出血、肿胀,淋巴细胞和中性粒细胞大量浸润,气管黏膜、肝脏、肺脏出血尤为严重;动物试验结果显示,该毒株毒力较强,含毒肝脏悬液能在24 h内迅速致死幼兔。本研究经临床诊断、核酸检测及测序证实了此次疫情确由RHDV2感染引起,动物试验和病理组织学观察表明该毒株毒力较强,可引发脏器严重出血,造成病兔急性死亡,RHDV2的出现提示病毒的跨境传播情况不容乐观,应引起更大的重视。     

兔出血症病毒镇江株的分离鉴定及VP60蛋白活性表达

试验旨在分离兔出血症病毒（rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）镇江株,分析其遗传进化变异,并表达具有良好活性的重组VP60蛋白。通过排除细菌感染、血凝（HA）和血凝抑制（HI）检测、动物攻毒试验与病毒传代、LD₅₀测定等方法,自江苏省镇江市某兔场发病死亡动物肝脏组织样品中分离病原并鉴定;RT-PCR方法获得VP60基因,通过分析VP60基因核苷酸及氨基酸序列研究其遗传进化;将VP60基因与pCold-Sumo载体连接,构建低温诱导、融合Sumo标签原核表达载体,15℃、IPTG诱导表达重组VP60蛋白并对表达产物进行反应原性鉴定。结果显示,分离鉴定获得RHDV ZJ2015毒株,该毒株能凝集人"O"型红血球,HA效价为11log2,其血凝性能被RHDV （AV33）抗血清抑制,该毒株的LD₅₀为10^-6.38/mL,具有较强的毒力;RT-PCR扩增得到大小约为1 740 bp的特异性条带,系统进化树分析显示,该毒株属于RHDV1抗原遗传变异株（RHDVa）,与RHDV1和RHDV2 VP60基因核苷酸序列同源性分别为89.4%~97.6%和81.1%~81.5%,氨基酸序列同源性分别为93.8%~98.3%和87.4%~87.6%。构建的低温原核融合表达质粒pCold-VP60在大肠杆菌Rosetta （DE3）中成功表达,通过SDS-PAGE及Western blotting分析,在分子质量74 ku处有特异性表达蛋白条带,且与抗血清发生特异性抗原抗体结合反应,说明重组蛋白具有良好的反应原性。本研究为开展兔病毒性出血症流行病学研究、开发新型重组疫苗与诊断试剂提供参考依据。     

应用单克隆抗体ELISA阻断试验快速检测兔出血症病毒抗体的研究

利用抗兔出血症病毒(RHDV)的特异性单克隆抗体(McAb)建立了ELISA阻断试验用以检测血清抗体,并与血凝抑制(HI)和琼脂扩散试验(ID)进行了比较。结果ELISA阻断试验敏感性超过HI,更远胜于ID,具有灵敏、特异、准确等优点,适于大批血清样品的快速检测。     

2000～2004年间广西新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

近年来从广西不同地区规模化鸡场的13个肉鸡群病死鸡中分离到13株有血凝性的病毒,这13株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制,经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验和RT-PCR检测结果确定为新城疫病毒.13株病毒的生物学特性测定实验结果证明该13株病毒均为新城疫病毒强毒株.     

豚鼠醛化红细胞在人流感病毒血凝活性测定中的应用

在流感疫情监测中,血凝试验是最常用的检测方法.针对鸡红细胞不能凝集流感病毒"O"相毒株,新鲜红细胞需现采现配、麻烦、费时,易溶血、不易保存等问题,本试验对豚鼠醛化红细胞制备方法的筛选和制备条件的优化进行研究,并以新鲜豚鼠红细胞为对照,用于流感病毒不同型别血凝试验.结果表明,戊二醛固定法制备的豚鼠醛化红细胞不溶血、结果稳定性好、保存期长、血凝活性与新鲜豚鼠红细胞基本一致,可以替代新鲜豚鼠红细胞用于血凝试验.