鸡十二指肠中T淋巴细胞及其亚群发育的研究

通过免疫组织化学法,应用CD3、CD4和CD8单克隆抗体研究了CD3+T淋巴细胞及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群在鸡盲肠扁桃体中的出现、迁移、组织定位分布及数量变化规律等一系列发育过程。结果显示:CD3+、CD8+T淋巴细胞最初于11胚龄时出现,而CD4+T淋巴细胞在15胚龄时出现。在定位分布变化上,CD3+主要分布在黏膜上皮中,CD4+主要分布在黏膜固有层中,CD8+在黏膜固有层和黏膜上皮内都有大量分布。在数量变化上,1～7日龄雏鸡各种阳性细胞的数量都骤然增加;而到7日龄时,雏鸡CD3+淋巴细胞的数量明显减少,CD4+、CD8+T细胞的数量无明显变化;从21日龄开始直到35日龄,雏鸡CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的数量持续增加。试验证明,鸡在出壳后初期十二指肠的细胞免疫功能增强。     

禽网状内皮组织增生症病毒感染雏鸡血液T细胞数量和细胞因子含量变化

为探索禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染对雏鸡外周血液细胞免疫功能及其相关细胞因子的影响,将60只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和未感染REV的对照组,应用流式细胞术结合ELISA等免疫学方法,通过血液T淋巴细胞亚型数量与比值变化,以及其免疫相关因子含量等动态变化的检测,系统地研究REV感染对SPF雏鸡血液细胞免疫功能的影响。结果显示,REV感染SPF雏鸡外周血液CD4~+T淋巴细胞在整个试验期间均明显低于对照雏鸡(P0.05),而CD8~+T淋巴细胞数量除病毒感染后第7天明显增加(P0.01)外,其余被检时间点均显著低于对照雏鸡(P0.05或P0.01), CD4~+与CD8~+T淋巴细胞比值在病毒感染早期较对照雏鸡明显增加,而病毒感染后期显著低于对照雏鸡,与相应对照雏鸡比较,REV感染SPF雏鸡血液IL-2和IFN-γ含量明显降低(P0.05),而IL-4和IL-10含量显著上升(P0.05)。结果表明,REV感染所致的SPF雏鸡血液免疫功能抑制与其降低雏鸡外周血液免疫增强因子含量,增加免疫抑制因子含量及减少CD4~+和CD8~+T淋巴细胞数量密切相关。     

日粮高硒对雏鸡外周血T淋巴细胞增殖功能和亚群的影响

300只1日龄艾维茵肉鸡健雏随机分为5组,分别喂以基础日粮(日粮Se含量0.2 mg·kg-1,对照组)和高硒日粮(Se 1 mg·kg-2,高硒Ⅰ组;Se 5 mg·kg-1,高硒Ⅱ组;Se 10 mg·kg-1,高硒Ⅲ组;Se 15 mg·kg-1,高硒Ⅳ组)6周,用流式细胞术和MTT法研究高硒对外周血T淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖功能的影响.结果显示,当雏鸡日粮硒水平达5 mg·kg-1以上时,外周血CD3+ T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞百分比不同程度地降低;高硒Ⅲ、Ⅳ组的T淋巴细胞增殖能力下降,血清IL-2含量降低,与对照组间差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01).结果表明,5 mg·kg-1以上的日粮硒降低雏鸡细胞免疫功能.     

沙门菌感染雏鸡调节性T细胞变化的分析

旨在分析雏鸡沙门菌感染后其脾调节性T细胞(Tregs)比例变化。本研究以京星黄鸡H系为试验群,将1日龄雏鸡随机分为对照组(n=40)和感染组(n=80),相同环境无菌饲养。7日龄时,感染组接种沙门菌建立感染模型,对照组以生理盐水代替沙门菌。感染48 h后,分别对两组雏鸡盲肠扁桃体免疫反应相关基因表达水平、血清炎症因子进行测定,并分别从中随机抽取雏鸡(对照组n=25,感染组n=34)检测其脾中CD4~+T细胞、Tregs/CD4~+T细胞比例。结果显示:感染组与对照组相比,脾中CD4~+T细胞比例无显著性差异(P0.05)。感染组与对照组CD4~+CD25~+/CD4~+(%)分别为0.93±0.12与3.22±0.59(P0.01);CD4~+TGF-β~+/CD4~+(%)分别为0.55±0.07与1.42±0.25(P0.01);CD4~+CD25~+TGF-β~+/CD4~+(%)分别为0.29±0.04与0.76±0.14(P0.01),均呈现显著性差异。雏鸡感染沙门菌后,脾中CD4~+T细胞比例无显著性差异,而Tregs/CD4~+T细胞比例较对照组明显下降(P0.01)。本研究提示调节性T细胞可能参与雏鸡沙门菌感染的发病过程,为进一步研究雏鸡抗沙门菌感染机制提供理论依据。     

奶牛围产期外周血T淋巴细胞亚群动态及细胞因子IL-2、IL-4基因转录水平分析

通过检测奶牛C D3+、CD4+和CD8+淋巴细胞亚群的动态及细胞因子IL-2、IL-4在分娩前后21d内的基因转录水平的变化,以探讨此阶段奶牛免疫机能受损的机理.应用流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞亚群的动态变化及实时荧光定量检测细胞因子IL-2、IL-4 mRNA的表达量.结果表明:血液中CD3+淋巴细胞的比例在产前21 d内占(50.8±4.61)％,产后14 d内降低到(39.21±4.98)％,两者差异极显著(P＜0.01) ;CD4+淋巴细胞在产前21 d内保持较高水平,达(21.38±0.65)％,产后21 d内维持在(6.89±0.32)％的较低水平,且与产前差异显著(P＜0.05) ;CD8+淋巴细胞的比例在产犊前逐渐升高,到产犊时达到最高水平(16.90±2.02)％,差异显著(P＜0.05) ;CD4+/CD8+淋巴细胞的比率在产前＞1,产后＜1.IL-2 mRNA的表达量在产后0～14 d内下调,之后上升.IL-4 mRNA的表达量分娩时期达到最高,随后下降,至第7天降到最低.奶牛在围产期阶段尤其是分娩前后14 d内机体处于免疫抑制状态,可能是由于自身的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的亚群的数量和比例发生改变及细胞因子IL-2、IL-4 mRNA表达量下调引起的.     

禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡血液和局部淋巴组织CD4+/CD8+细胞及相关细胞因子表达的影响

旨在探讨禽网状内皮组织增生病病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）对SPF雏鸡血液和局部淋巴组织中T淋巴细胞数量以及相关细胞因子表达的影响。将96只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,应用流式细胞术、酸性α-醋酸萘酯酶染色（acid α-naphthyl acetate esterase,ANAE）、荧光定量PCR等方法对上述指标进行检测。试验数据表明,与对照组相比,感染组雏鸡血液CD4⁺T淋巴细胞数量在第7~35天显著降低、CD8⁺T淋巴细胞数量在第7~28天显著升高,CD4⁺/CD8⁺比值在第7~28天显著降低（均P<0.05或P<0.01）;局部淋巴组织哈德尔腺（Hader’s gland,HG）、派伊尔结（Peyer’s patch,PP）和盲肠扁桃体（caecal tonsil,CT）中ANAE⁺T淋巴细胞数量均显著降低（均P<0.05或P<0.01）;GH、PP和CT中细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α 转录量都有不同程度升高。本研究表明,REV感染引起雏鸡血液中CD4⁺ T淋巴细胞数量降低、CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比例失衡、局部淋巴组织中T淋巴细胞数量相对减少及细胞因子TNF-α转录持续升高与REV造成感染雏鸡细胞免疫功能显著降低密切相关。     

益生菌联合新城疫疫苗应用雏鸡消化道局部黏膜组织CD4~+CD8~+T细胞数量变化

100只艾维因肉雏鸡随机分为益生菌组、新城疫(ND)疫苗组、益生菌联合ND疫苗组和对照组。采用组织石蜡切片及免疫组织化学法分别测定ND疫苗免疫后第0天、7天、14天、28天和第42天盲肠扁桃体、十二指肠和回肠派伊尔结CD4+、CD8+T细胞数量的变化。结果表明,益生菌联合ND免疫雏鸡、ND疫苗单独免疫雏鸡上述免疫组织的CD4+T和CD8+T细胞数量分别于免疫后第14天和第7~14天明显高于对照雏鸡和益生菌雏鸡(P0.05或P0.01),表明益生菌作为免疫增强剂,与疫苗联合应用可显著增强机体消化道局部黏膜免疫组织对ND疫苗的细胞免疫应答。     

金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官T淋巴细胞及其亚群以及B淋巴细胞的影响

为了研究金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官T淋巴细胞及其亚群以及B淋巴细胞的影响,本试验以21日龄雏鸡为研究对象,随机分成感染组、中药治疗组、空白组。中药治疗组饮水给予复方金银花制剂。应用流式细胞仪检测技术,细胞培养技术研究了金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官(胸腺、脾脏、腔上囊)T淋巴细胞及其亚群以及B淋巴细胞的影响,旨在揭示金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官细胞免疫和体液免疫功能的影响及其机理。研究结果发现,金银花复方制剂能够提高人工感染NDV雏鸡免疫器官胸腺及脾脏CD3~+、CD4~+T淋巴细胞百分率,使CD4~+/CD8~+T淋巴细胞值升高,提高免疫器官脾脏及腔上囊B淋巴细胞百分率,表明金银花复方制剂能够提高雏鸡的免疫功能。     

板蓝根多糖对缺乳仔鼠免疫器官发育及T淋巴细胞亚群的影响

应用流式细胞仪检测缺乳仔鼠CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞含量,研究添加不同剂量的板蓝根多糖(RIP)对缺乳仔鼠免疫器官及T淋巴细胞亚群的影响。结果表明,RIP可以提高缺乳仔鼠胸腺指数和脾脏指数,对胸腺指数和脾脏指数效果最佳的RIP剂量随日龄增大而减小;RIP可以增加缺乳仔鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量,CD3+T淋巴细胞数量在7-28日龄时,A、C、D组与B组差异显著(P0.05);CD4+T淋巴细胞数量在7-21日龄时,A、C、D组与B组差异显著(P0.05);各处理组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量以及CD4+/CD8+比值随着日龄的增加有所下降。结果表明,一定剂量的RIP可以促进缺乳仔鼠免疫器官发育,提高T淋巴细胞亚群的水平。     

雏鸡应用益生菌后消化道黏膜组织T_(ANAE+)及CD_4~+、CD_8~+T淋巴细胞数量变化

50只艾维因雏鸡随机分成益生菌组和对照组,采用酸性α-醋酸萘酯酶(acid nonspecifica-naphthyl acetate esterase,ANAE)染色法和免疫酶组织化学法,通过盲肠扁桃体、十二指肠和回肠派伊尔结T_(ANAE+)及其CD_4~+、CD_8~+T淋巴细胞亚型数量动态变化的检测,研究益生菌应用对雏鸡消化道局部黏膜组织的细胞免疫功能的影响。结果发现,1日龄雏鸡服用益生菌后1-14 d,其盲肠扁桃体、十二指肠及回肠派伊尔结的T_(ANAE+)、CD_4~+、CD_8~+T淋巴细胞数量均不同程度地高于未服用益生菌的对照雏鸡,表明益生菌应用可促进雏鸡消化道局部黏膜免疫组织的细胞免疫功能。     

褐藻多糖对仔猪抗氧化能力、肠道菌群和细胞因子的影响

为研究褐藻多糖对仔猪抗氧化能力、肠道菌群和肠细胞因子的影响,试验选用24头28日龄三元杂交断奶仔猪,随机均分为3个处理组(C、T1和T2组),C组饲喂基础日粮,T1组和T2组分别在基础日粮中添加200 mg/kg和400 mg/kg的褐藻多糖。试验期为21 d。结果表明:C组、T1组和T2组仔猪末重、日增重、日采食量和料重比均无显著差异(P0.05);T2组仔猪血浆总抗氧化能力(T-AOC)显著高于C组(P0.05);T1组仔猪血浆丙二醛(MDA)水平显著低于C组(P0.05),T2组仔猪血浆MDA水平极显著低于C组(P0.01);C组、T1、和T2组盲肠大肠杆菌、沙门氏菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数量均无显著差异(P0.05);T1组盲肠白介素-1β(IL-1β)和白介素-22 (IL-22)水平均显著或极显著低于C组(P0.05或P0.01),T2组盲肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β和IL-22水平均显著或极显著低于C组(P0.05或P0.01),T1、T2及C组盲肠白介素-10 (IL-10)水平均无显著差异(P0.05)。结果提示,饲料中添加褐藻多糖能提高仔猪抗氧化功能,降低盲肠TNF-α、IL-1β和IL-22水平;褐藻多糖的添加量以400 mg/kg为最佳。     

重组鸡白细胞介素-2对禽流感灭活疫苗免疫增强作用的研究

为研究重组鸡白细胞介素-2(IL-2)对H5N1亚型禽流感灭活苗的免疫效果,将重组IL-2蛋白和禽流感灭活疫苗联合免疫14日龄SPF鸡,免疫后每周测定一次血清抗体效价﹑脾脏T淋巴细胞亚群,最后计算攻毒保护率。试验结果表明:重组IL-2蛋白具有增强禽流感疫苗免疫效果的作用,提高了血清中的抗体水平﹑增加了脾脏T淋巴细胞CD4+﹑CD8+亚群数量。     

玉屏风散对雏鸡传染性法氏囊病疫苗免疫效果的影响

为了验证传统中药方剂玉屏风散对鸡传染性法氏囊病(IBD)疫苗免疫效果的影响,将玉屏风散以高(A)(1%)、中(B)(0.75%)、低(C)(0.5%)剂量拌料饲喂7日龄雏鸡,连喂12 d;14日龄用法氏囊疫苗免疫,分别于21、28、35、42和49日龄用ELISA法测定外周血IBDV抗体;于21和35日龄用流式细胞术测定外周血CD4+和CD8+T细胞亚群;于21、35和49日龄用碳粒廓清试验测定外周血巨噬细胞的吞噬活性.结果表明,玉屏风散可显著提高血清IBDV抗体水平,28日龄后A组抗体水平显著高于其他各组(P<0.05),35日龄后B、C组抗体水平明显高于对照组(P<0.01);CD4+数量及CD4+/CD8+值在21日龄时A、B组显著高于C组和对照组(P<0.05或P<0.01),35日龄时A组显著高于其余各组(P<0.01);玉屏风散也能提高鸡外周血巨噬细胞的吞噬活性,A组效果最好(P<0.05或P<0.01).结果提示,玉屏风散可提高雏鸡的特异性体液免疫和非特异性细胞免疫水平.     

死亡受体通路在黄曲霉毒素B_1致雏鸡胸腺细胞凋亡中的作用

旨在探究摄食黄曲霉毒素(AF)后,死亡受体通路活化对雏鸡胸腺细胞过度凋亡的信号调控机制。将90只1日龄健康雏鸡随机分为两组,分别饲喂对照日粮和AFB_1日粮(在对照日粮中添加0.6mg·kg~(-1) AFB_1)。于7、14和21日龄时,检测雏鸡胸腺的脏器指数、T淋巴细胞亚群、细胞凋亡率及死亡受体通路上相关基因的mRNA相对转录量。结果显示,与对照组比较,AFB_1组雏鸡胸腺的脏器指数降低,CD3~+、CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+T淋巴细胞的百分率减少,胸腺细胞凋亡率升高,死亡受体通路上RIP1、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、Fas、FasL、ASK1、IKIP和JNK的mRNA相对转录量升高,Bcl-2、NF-κB_1和Bid的mRNA相对转录量降低。本试验中,雏鸡胸腺细胞凋亡上调的过程中,死亡受体通路上的三条下游信号途径均有参与:(1)通过Fas-FasL-FADD-Caspase-8-Caspase-3途径直接诱导凋亡;(2)通过Fas-ASK1-JNK-Bcl-2途径,并在线粒体的介导下,启动下游调控因子Caspase-9和Caspase-3诱导细胞凋亡;(3)通过TNF-α-RIP1-IKIP-NF-κB_1-Caspase-3信号途径诱导凋亡。     

氯化镍对雏鸡盲肠扁桃体影响

本研究采用显微组织学、超微组织学以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)等方法,研究了日粮中高水平氯化镍(NiCl_2)对雏鸡盲肠扁桃体的影响。结果表明,NiCl_2处理组与对照组相比,盲肠扁桃体发育受到明显抑制;淋巴滤泡内弥漫排列的淋巴细胞明显减少。超微结构和TUNEL检测发现,900 mg/kg处理组盲肠扁桃体凋亡细胞增多,淋巴细胞线粒体肿胀或空泡化,同时也观察到淋巴细胞核膜扩张。结果表明,日粮中NiCl_2水平超过300 mg/kg时,可抑制盲肠扁桃体的生长,引起组织结构和细胞器的损伤,提示过量NiCl_2可使盲肠扁桃体正常发育和功能受损,从而导致雏鸡消化系统黏膜免疫功能降低。     

外源性核酸对感染IBDV雏鸡免疫功能和抗氧化能力的影响

300只20日龄健康海兰白雏鸡随机分为6组,Ⅰ组为对照组,Ⅱ～Ⅵ为试验组,Ⅱ、Ⅴ组饲料中分别添加0.1%核酸,Ⅲ和Ⅵ组分别添加0.2%核酸,Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组于27日龄感染传染性法氏囊病毒(IBDV),分别于30,33,36,39,42日龄心脏采血测定T淋巴细胞转化率,白细胞的吞噬率,SOD、GSH-Px和CAT活性,用流式细胞仪测定鸡脾脏T淋巴细胞亚群的变化;时处死雏鸡,测定免疫器官法氏囊和脾脏指数,观察其组织结构.结果表明,日粮中添加不同剂量的核酸均可提高T淋巴细胞转化率和T淋巴细胞数,法氏囊和脾脏的相对质量均明显增加,并能促进法氏囊和脾脏的快速发育,提高脾淋巴细胞中CD3+、CD4+和CD8+T细胞百分率,改变CD4+/CD8+比值促进对机体免疫系统的调控,增强白细胞的吞噬功能;可显著提高鸡血清中SOD、GSH-Px和CAT活性.IBDV感染组与病毒感染加核酸组之间上述指标差异显著,感染IBDV组可使上述指标明显下降,感染IBDV加核酸组的上述指标接近正常对照组,说明核酸能补偿IBDV对雏鸡免疫系统的抑制作用,具有一定的抗氧化能力,而且能促进雏鸡修复组织损伤.     

高锌对雏鸡免疫功能影响的研究

1日龄艾维茵肉鸡健雏200只随机分为4组，Ⅰ组(基础日粮，Zn100mg／kg)、Ⅱ组(基础日粮 Zn1400mg／kg)、Ⅲ组(基础日粮 Zn1900mg／k)和Ⅳ组(基础日粮 Zn2400mg／k)，试验期7周。病理组织学观察可见免疫器官的淋巴细胞减少，淋巴滤泡形成较少，其皮质变薄、髓质增宽并可见髓质部淋巴细胞减少。淋巴器官发育和外周血淋巴细胞的分裂增殖受抑，外周血T淋巴细胞的成熟率显著降低并引起其亚群CD4、CD8数量和组成的变化，导致机体细胞免疫和体液免疫功能的降低；雏鸡红细胞C3b受体花环率下降和免疫复合物花环率升高，引起红细胞免疫黏附功能降低。结果表明，日粮高锌可致雏鸡免疫功能受损。     

传染性支气管炎病毒结构蛋白免疫鸡对CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的影响

为了比较传染性支气管炎病毒3种主要结构蛋白免疫鸡后对CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的不同影响.本试验以pVAX1载体为携带工具,制备分别含有IBV主要结构蛋白基因的质粒免疫健康雏鸡,采用流式细胞仪(FACS)对免疫鸡外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数进行检测.结果显示:各试验组间,携带N蛋白基因的质粒在免疫后3周内CD4+T淋巴细胞数和CD8+T淋巴细胞数均高于其他组,且差异极显著(P＜0.01).由此可见,IBV的N蛋白可明显诱导CD8+T淋巴细胞的CTL免疫作用和CD4+T淋巴细胞的辅助性免疫作用,其细胞免疫原性高于S1蛋白和M蛋白.     

鸡传染性喉气管炎病毒gB基因重组DNA疫苗的构建与鸡IL-18联合免疫试验

本研究构建了编码ILTV糖蛋白gB基因的重组DNA疫苗pgB,为测定该DNA疫苗与鸡IL-18联合免疫的试验效果,将pgB、pIL-18分别以单独和联合的方式免疫21日龄SPF雏鸡,免疫后每周抽取外周血及外周抗凝血,应用ELISA和流式细胞仪分别检测免疫鸡的体液免疫及细胞免疫水平。二免疫后第3周用100 ELD50ILTV强毒进行攻击。结果显示,pgB和pgB与pIL-18联合免疫组均能诱导鸡产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答,其中以pgB与pIL-18联合免疫组的T淋巴细胞亚群CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+明显高于单独pgB免疫组(P0.01),87%抵抗ILTV强毒的致死性攻击。     

鹰嘴豆芽素A免疫佐剂作用试验

为了探讨鹰嘴豆芽素A(BioA)的免疫佐剂效果,分别将BioA以及氢氧化铝胶(Alum)作为佐剂和鸡卵清白蛋白(OVA)抗原联合免疫ICR小鼠,二次免疫后2周采血和取脾脏,观察免疫前后血清OVA诱导特异性抗体及亚类含量变化、细胞因子水平,淋巴细胞在抗原刺激下的体外细胞增殖反应以及外周血CD4~+和CD8~+ T细胞表达。结果显示,BioA和抗原混合物免疫小鼠后,未见不良反应;100μg BioA组小鼠血清抗体IgG、IgG1和IgG2a水平显著高于OVA组(P0.05或P0.01);100μg BioA免疫小鼠受刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)和OVA刺激产生的淋巴细胞体外增殖能力显著高于OVA组(P0.05或P0.01);100μg BioA组小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α浓度显著高于OVA组(P0.05);BioA显著提高CD4~+T细胞数量和提高CD4~+/CD8~+值(P0.01)。表明BioA是一种能同时激活Th1和Th2型免疫反应的免疫佐剂。