毒害艾美耳球虫鸡胚培养研究

为了建立毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)的鸡胚培养体系,用毒害艾美耳球虫子孢子分别接种8～11日龄鸡胚以确定最佳接种日龄,用不同剂量子孢子接种同一日龄鸡胚以确定最佳子孢子接种剂量,并在子孢子混悬液中分别加入不同剂量的胰岛素和叶酸以观察对球虫在鸡胚中发育的影响.结果显示,毒害艾美耳球虫子孢子接种9日龄的鸡胚,其卵囊产量(平均每只胚的卵囊量)和卵囊成熟率均为最高,成熟率达到99%;当每个鸡胚接种子孢子1×104个时,其卵囊产量最高;在子孢子混悬液中分别加入胰岛素1 000 U/mL、叶酸0.05 mg/mL,均能明显增加鸡胚中的卵囊产量.本文通过对毒害艾美耳球虫的鸡胚接种日龄、子孢子接种剂量、营养物质添加等因素的研究,初步建立了毒害艾美耳球虫的鸡胚培养体系.     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2~7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2~7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%~42.9%提高到73.2%~90.5%,病变计分减少率达50%~74.9%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%~60.2%,表明以一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力;比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×104个子孢子/胚的效果最好。     

毒害艾美耳球虫晚熟系选育及其生活史研究

以剂量为l200～20000个孢子化卵囊／羽的毒害艾美耳球虫(E．necatrix)北京株(中熟系)感染3日龄京星黄羽肉仔鸡，收集感染后第11天粪便中卵囊，孢子化后接种无球虫鸡进行连续传代，经传代16次后，发现其排卵囊高峰较母株(中熟系)推迟了2天，即由接种后第7天推迟到第9天，且连续3代排卵囊高峰均出现在第9天，有较好的稳定性。生活史研究表明，其各阶段虫体均比母株的大，但潜在期不变，推测可能是选育得到的晚熟系卵囊中尚含有少量中熟系卵囊的缘故。     

盐霉素对鸡艾美耳球虫病的田间防治试验

根据鸡球虫病防治研究的设计要求与研究程序,在笼饲试验和舍饲试验有效的基础上,本所于1988年10月20日～12月20日在上海县梅陇乡养鸡场对5960羽鸡进行了田间试验,取得了较满意的结果。     

饲料添加中草药抗毒害艾美耳球虫效果观察

选择90只1日龄蛋用公雏,随机分为6组:马杜毒素拌料组(Ⅰ组,添加量5 mg/kg饲料),克球粉拌料组(Ⅱ组,添加量125 mg/kg饲料),中草药处方①组(Ⅲ组,添加量10 000 mg/kg饲料),中草药处方②组(Ⅳ组,添加量10 000 mg/kg饲料),感染不给药组(V组),不感染不给药组(Ⅵ组).于无球虫条件下进行饲养,从1日龄起饲喂混有药物的饲料,除Ⅵ组外,其他各组在18日龄接种1×105个毒害艾美耳球虫孢子化卵囊,根据各组存活率、相对增重率、病变记分、血便记分和抗球虫指数观察药物的疗效,结果表明:Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅳ组有低效抗球虫作用,Ⅲ组有中效抗球虫作用.     

马杜霉素与地克珠利联合应用抗鸡柔嫩艾美耳球虫效果试验

鸡球虫病是严重威胁养鸡业的一种寄生原虫病。15～20日龄雏鸡发病率高，死亡率可达80％以上。目前，鸡球虫疫苗在实践中应用效果不是十分理想。因此，采用药物防治球虫病仍是控制本病的主要手段。虽然国内应用的抗球虫药物种类很多，但由于各地虫株的差异和球虫较易产生耐药性，导致球虫病的治疗效果不是十分理想。为防止球虫产生耐药性，较好的办法是定期变换或联合应用作用机理不同的药物，     

毒害艾美耳球虫初次感染对雏鸡外周血液免疫功能的影响

应用免疫SPA菌体花环、间接ELISA及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)初次感染雏鸡外周血液的T、B细胞数量及其对ConA或PMA的增殖功能和IgG、IgM、IgA含量的动态变化进行了较全面系统的研究。结果发现,E.necatrix初次感染雏鸡外周血液的T、B细胞数量及其相应增殖功能、血清中上述三种免疫球蛋白含量均不同程度地高于未感染的对照雏鸡,表明E.necatrix初次感染雏鸡外周血液的细胞免疫和体液免疫功能均明显提高。     

毒害艾美耳球虫晚熟系生物学特性研究

本文对毒害艾美耳球虫晚熟系基本生物学特性进行了研究。结果表明，晚熟系的致病性与同等剂量中熟系的相当；繁殖能力高于中熟系，且每羽鸡的排卵囊总量与剂量成正相关，每个卵囊的繁殖能力与剂量成负相关；在同等剂量免疫下，晚熟系的免疫原性好于中熟系；2次免疫后，晚熟系免疫组的保护力与中熟系的相当，攻虫后卵囊繁殖减少率均在99％以上。     

毒害艾美耳球虫二次感染对雏鸡局部黏膜组织抗体生成细胞的影响

180只14日龄雏鸡随机分为毒害艾美球虫(Eimeria necatrix,E. necatrix)一次感染组、二次感染组和对照组。应用免疫酶组织化学染色法,对免疫相关指标进行了检测。结果发现,毒害艾美球虫二次感染雏鸡局部黏膜免疫组织的IgA、IgM、IgG生成细胞数量均不同程度的高于未感染毒害艾美球虫的对照组雏鸡,表明E. necatrix二次感染雏鸡局部黏膜组织的免疫功能明显增强。     

一毒害艾美耳球虫田间分离株耐药性分析

用鸡体实验法,以相对卵囊产量(ROP)、病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫百分数(POAA)和抗球虫指数(ACI)等4项指标,分析了一株毒害艾美耳球虫对复方磺胺氯吡嗪钠(20％磺胺氯吡嗪钠+4％二甲氧苄啶)、血痢宁(磺胺氯吡嗪钠可溶性粉)、贝尔球康(又称鸡球虫散,含青蒿、仙鹤草、何首乌、白头翁、肉桂等)、百球清(妥曲珠利)、马杜球败(马度米星铵预混剂)等5种抗球虫药的耐药性.结果显示:该株毒害艾美耳球虫对百球清无耐药性,对复方磺胺氯吡嗪钠和血痢宁有轻度耐药性,对贝尔球康无耐药性或轻度耐药性,对马杜球败有完全耐药性.提示该养殖场应停止使用马杜拉霉素,改用妥曲珠利或贝尔球康,但必须进行轮换用药或联合用药,以延长药物的使用寿命.     

柔嫩艾美耳球虫感染对鸡血清凋亡蛋白的影响

为了研究柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）感染对鸡血清细胞凋亡相关蛋白的影响,探讨柔嫩艾美耳球虫与宿主相互作用,将240只体重接近的7日龄海兰灰公雏鸡分为4组：A组为不感染不诱导凋亡组;B组为不感染诱导凋亡组;C组为感染不诱导凋亡组;D组为感染诱导凋亡组。诱导凋亡的处理方法是采血前2.5 h按6.4 mL/kg体重灌服40%酒精诱导凋亡,不诱导凋亡的处理则同时灌服与40%酒精等体积的生理盐水替代。于柔嫩艾美耳球虫感染（每只鸡感染1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊）后第24、48、72、96、120 h,每组抽取10只鸡心脏采血,制备血清,采用ELISA法检测血清中细胞色素C（Cyto-C）、半胱氨酸蛋白酶（Cas）-9、Cas-8、Cas-3、B细胞淋巴瘤/白血病（Bcl）-2、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Bcl-XL、BH3结构域凋亡诱导蛋白（Bid）的浓度。结果显示,感染后24、48、72、96 h D组Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3的浓度均低于B组,感染120 h D组Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3的浓度均显著高于B组（P<0.05）,感染24、48、72、96 h D组Bcl-2/Bax和Bcl-XL/Bid值均高于B组,感染120 h D组的Bcl-2/Bax低于B组,Bcl-XL/Bid值高于B组。说明柔嫩艾美耳球虫感染早期通过Bcl-2/Bax值、Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3浓度的增加来抑制宿主细胞凋亡,感染中晚期通过Bcl-2/Bax值、Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3浓度的降低促进宿主细胞凋亡。     

毒害艾美球虫二次感染雏鸡外周血液免疫功能的变化

将180只14日龄雏鸡随机分为毒害艾美球虫（Eimeria necatrix）初次感染组、二次感染组和对照组，应用免疫SPA菌体花环、间接ELISA及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐（MTT）测定法对相关免疫学指标进行了检测，以研究毒害艾美球虫二次感染对雏鸡外周血液免疫功能变化的影响。结果显示，毒害艾美球虫二次感染雏鸡外周血液T、B淋巴细胞数量及其对ConA或PMA的增殖反应和血清IgG、IgM、IgA免疫球蛋白含量均不同程度地高于未感染毒害艾美球虫的对照组雏鸡。证实毒害艾美球虫二次感染雏鸡外周血液的细胞免疫和体液免疫功能均明显提高。     

垫料管理对毒害艾美耳球虫疫苗虫株免疫效果的影响

为比较垫料管理对毒害艾美耳球虫疫苗虫株免疫效果的影响,采用谷壳和木屑为垫料,垫料厚度分别为1、2、4 cm,以及定期翻动垫料和不翻动垫料的管理方式对疫苗反应期鸡肠道病变程度和相对增重的影响,以及对攻虫后鸡肠道病变程度、相对增重和免疫保护效果的影响。在疫苗反应期,各免疫组的肠道病变轻微,相对增重与空白对照组无显著差异(P0.05);免疫21 d后攻虫,所有免疫组均能抵抗1×105个毒害艾美耳球虫强毒孢子化卵囊的攻击,而且肠道病变轻微,相对增重与空白对照组无显著差异(P0.05)。试验结果表明,厚垫料可提高毒害艾美耳球虫的免疫均匀性,免疫效果稍优于薄垫料。