鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展

鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)主要侵害鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,可以引起鸡的呼吸道症状、肾脏损害、产蛋量和蛋的品质下降。该病毒血清型较多,容易产生变异,给疫病防控带来很大困难。主要对近年来在IBV的基因组结构、IBV的复制过程、IBV的结构蛋白及生物学功能、IBV的变异机制、IBV的进化以及IBV的鉴定和检测等方面的研究进展进行综述,以期为更加深入地认识和研究该病毒提供参考。     

不同来源传染性支气管炎病毒诱导SPF鸡发病的免疫机制研究

试验旨在探讨不同来源的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)诱导SPF鸡发病的免疫机制。选用140只1日龄SPF白来航鸡,随机分为4组,3组攻毒组通过滴鼻点眼途径分别接种鸡源IBV强毒株、鸡源IBV弱毒株和野鸡源IBV毒株3个毒株,对照组以同种方式接种等量灭菌的磷酸盐缓冲液。在感染后12 h、36 h、72 h、7 d和14 d,每组随机选取5只进行剖检,并分别采集法氏囊、肾脏和气管组织,剩余鸡用于观察临床症状、发病及死亡情况。应用实时荧光定量PCR检测攻毒后不同时间点采集的各组织中IBV的病毒载量、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及部分细胞因子(白细胞介素(interleukin,IL)和干扰素(interferon,IFN))表达量的变化。结果显示,感染不同来源IBV毒株之后仅鸡源IBV强毒株感染组SPF鸡出现抑郁、翅膀下垂、甩头等典型的临床症状,且在感染后5~10 d共有7只死亡,死亡率为20%。病理剖检发现,感染鸡源IBV强毒株的鸡肾脏肿大、尿酸盐沉积和有花斑样病变,而感染野鸡源IBV毒株、鸡源IBV弱毒株和对照组的鸡无明显的眼观病变。实时荧光定量PCR结果显示,在鸡源IBV强毒株组的法氏囊、肾脏和气管3个组织中均检测到病毒。对照组和野鸡源IBV毒株组中均未检测到病毒,鸡源IBV弱毒株组只在部分组织中检测到病毒。在感染后72 h,鸡源IBV强毒株组与其他各组相比,TLR1、TLR2、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15基因在法氏囊中的表达量均显著升高(P<0.05),IL-6和IFN-β参与更强烈的抗病毒免疫反应;在感染后7 d,鸡源IBV弱毒株组与其他各组相比,肾脏中TLR2、TLR3、TLR15、TLR21、IL-6和IL-18基因表达量均显著升高(P<0.05)。野鸡源IBV感染后36 h法氏囊组织中IFN-γ基因表达量显著上调(P<0.05)。综上所述,3个IBV毒株中仅鸡源IBV强毒感染引起SPF鸡典型临床发病症状与可视组织病变,且可提高SPF鸡组织中免疫相关因子的基因表达量。本研究结果揭示,不同来源的IBV对SPF鸡的不同致病性与其感染诱导的免疫反应不同有关。     

红茂草注射液对鸡传染性支气管炎病毒抑制效果的观察

用不同含量的红茂草注射液,对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的H52毒株进行稀释,在鸡胚尿囊腔中接种传代,测试了红茂草注射液对H52毒株的抑制作用。试验结果显示,红茂草注射液能有效的抑制H52毒株在鸡胚中的增殖,其最终有效浓度为2．5～5mg／mL,而且抑制作用随着红茂草注射液浓度含量的提高而增强,同时红茂草注射液对鸡胚的生长、发育无任何不良影响。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验研究

用A型魏氏梭菌滤液处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,使其产生血凝性,成功建立IBV血凝抑制试验方法(IBV-HI).血凝效价为1:256～1:1024.抗原在2～8℃的保存期至少为5个月.用该抗原对IBV标准阳性血清、SPF鸡血清、其它鸡病标准阳性血清以及含M41株病毒的灭活苗免疫的鸡血清进行检测,证明IBV-HI试验具有很好的特异性.结果表明,该方法简便、快速、特异性强,可用于疫苗质量控制和疫苗免疫效力测定.     

鸡传染性支气管炎病毒分子变异机制的研究

鸡传染性支气管炎(IB)目前已成为养鸡业中危害最大的病毒性传染病之一。病毒基因组RNA的点突变、缺失、插入和不同毒株基因组间的同源重组所导致的病毒血清型、基因型和组织嗜性的改变是造成现用疫苗免疫失败的主要原因。病毒的变异已成为当前对IBV病原学及本病免疫防制研究中的热点，作者重点就IBV变异机制及其变异株的来源等方面作一综述。     

传染性支气管炎病毒自然衰减曲线的测定

研究传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)在自然环境中的衰减规律,有助于养殖场中IBV的防控和检测.本试验模拟养殖场的空气环境,应用气管环组织培养(TOC)法对IBV进行散布试验.试验通过采集不同时间段的空气样品,对SPF鸡胚气管环进行攻毒试验,以气管环纤毛运动情况及上皮细胞完整性为判定依据,绘制IBV自然衰减曲线.结果显示,IBV在进入自然环境1h内其存活率显著下降,1～4 h趋于平缓,4 h后其存活率极低.     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.     

传染性支气管炎病毒分子变异机制研究进展

传染性支气管炎是鸡的一种急性高度接触性传染性疾病。传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）是冠状病毒科,冠状病毒属的代表种,以多血清型和高变异性使免疫预防复杂化和费用增高,给世界养禽业造成了严重的经济损失。该病毒是有囊膜呈中等多形性球状或椭圆形的病毒粒子,表面有...     

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)ZZ2004株核衣壳蛋白基因的克隆及原核表达

本研究旨在克隆并表达鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的核衣壳蛋白（N）。根据IBV ZZ2004株的N基因设计1对引物,提取IBV ZZ2004株的RNA,利用RT-PCR技术扩增大小约1.23 kb的片段,将其插入克隆载体pGEM-T构建pGEM-T-N。将pGEM-T-N用EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切,将酶切后的N基因片段克隆到表达载体pGEX-6P-1,转入大肠杆菌BL21（DE3）菌中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳,结果显示外源基因获得了表达且为可溶性蛋白;Western blotting检测结果显示N蛋白可与相应的IBV ZZ2004阳性血清发生特异性反应,结果表明N蛋白有一定的生物活性。本研究为IBV诊断试剂盒及新型IBV重组亚单位疫苗研制奠定基础。     

超声波法提取黄芩挥发油工艺研究

以黄芩为试验样品,研究超声波法提取黄芩中挥发油的工艺条件。在单因素试验的基础上,采用L（93）3正交试验优化超声提取挥发油的工艺条件。结果表明,影响黄芩挥发油超声提取的主要因素是料液比,其次是超声时间和超声功率,优化工艺条件为：超声时间50 min,料液比1∶20,提取功率70 W。     

中和温度对鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗中鸡传染性支气管炎病毒含量影响的研究

采用分别测定每羽份疫苗成品和每0．1mL半成品胚液鸡胚半数感染量(EID50)的方法探讨了中和温度对鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗中鸡传染性支气管炎病毒含量的影响。结果显示，中和温度对该二联活疫苗中鸡传染性支气管炎病毒的EID50有显著的影响。测定病毒含量时，中和条件以中和温度控制在20℃、中和时间45～60min较为合适。     

传染性支气管炎病毒疫苗研究进展

传染性支气管炎给我国规模化养鸡业造成巨大的经济损失,由此尝试研制重组鸡痘病毒传染性支气管炎病毒基因工程疫苗了解其免疫效应,以期获得高效而安全的基因工程疫苗。为更好地了解鸡传染性支气管炎的防治现状,文章从各种表达载体系统表达传染性支气管炎病毒蛋白的优缺点及其产生免疫保护效应的角度,对近年来传染性支气管炎病毒疫苗研究的发展状况做了简要概述,且针对传染性支气管炎病毒基因工程疫苗现存的问题,展望了将来的发展趋势。     

传染性支气管炎病毒感染对蛋雏鸡输卵管雌激素受体及孕激素受体表达的影响

以不同传染性支气管炎病毒（肾型IBV-河北分离株与呼吸型IBV-M41）分别感染蛋雏鸡,通过测定输卵管蛋白分泌部及子宫雌激素受体（Estrogen receptor,ER）和孕激素受体（Progesterone receptor,PR）的表达水平,来探讨IBV早期感染（10d）对抑制蛋鸡输卵管发育的作用机制。结果显示,IBV感染降低子宫和蛋白分泌部ER mR-NA、PR mRNA的表达水平,即致子宫ER mRNA和PR mRNA的表达低于检测水平;蛋白分泌部ER mRNA和PR mRNA的表达水平显著降低（P〈0.01）,且M41的作用幅度较肾型IBV更为显著（P〈0.01）。结果表明,IBV可通过降低ER和PR的表达水平,抑制输卵管对雌激素的应答能力而影响输卵管的发育。     

从黄芩毛状根中提取、纯化黄芩苷的研究

本试验以黄芩苷质量浓度为指标,考察了影响大孔吸附树脂对黄芩毛状根中黄芩苷富集效果的相关因素,并利用硅胶柱层析对其进行纯化。结果显示,LX-68型大孔吸附树脂的富集效果最好,较优工艺条件为:上样浓度为8.69 g/L,吸附流速为6 BV/h,上样体积为16 BV,树脂床径高比为1:14;洗脱剂为70%乙醇,洗脱流速为6 BV/h,用量为10 BV;硅胶柱层析洗脱剂条件为氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸(7:3:1.5:0.5)。在所确定的工艺条件下,该树脂可有效地提取黄芩毛状根中的黄芩苷,黄芩苷吸附量达131.2 mg/g,黄芩苷的回收率超过69.1%,经纯化后黄芩苷纯度为98.45%。     

黄芩多糖体外抗氧化活性研究

目的:探讨黄芩多糖的体外抗氧化活性。方法:从还原力,清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基4个方面研究黄芩多糖的体外抗氧化活性,并与VC进行比较。结果:黄芩多糖对上述自由基均有不同程度清除作用,其还原力较低;清除DPPH自由基的能力略低于VC;对超氧阴离子清除能力强于VC,EC50为0.261 mg/mL;对羟自由基的清除能力弱于VC,EC50为0.724 mg/mL。结论:黄芩多糖具有一定的体外抗氧化能力。     

表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒对SPF鸡的免疫保护作用

将表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IBVS1)以5×106PFU剂量翅皮下注射接种4周龄的SPF鸡。血清抗体检测表明,该重组鸡痘病毒能刺激鸡体产生特异性抗体,外周血液中CD4 、TCRγδ T淋巴细胞比例显著高于对照组,而CD8 T淋巴细胞比例低于对照组。免疫后4周用1×103.0EID50的传染性支气管炎病毒LX4株进行攻毒,结果表明,重组鸡痘病毒免疫组与IB弱毒疫苗免疫保护率分别为12/16和13/16;攻毒后喉拭子IBV分离结果表明,IB弱毒疫苗和重组鸡痘病毒免疫组的IBV气管排毒时间比对照组缩短了2 d,病毒的分离率显著低于对照组;肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾和肝脏的病理损伤也较对照组轻,而且病变持续时间缩短。     

黄芩总黄酮的提取及羟基自由基清除方法比较

以60%乙醇为提取溶剂,采用回流提取技术提取黄芩中的黄酮,利用芦丁作为对照,用分光光度法测定黄芩中黄酮的含量。通过不同方法考查黄芩中黄酮类化合物清除羟基自由基的能力,结果表明,黄芩中黄酮对羟基自由基具有不同的清除能力,用7.5 mmol/L的硫酸亚铁铵溶液0.80 mL,7.5 mmol/L的水杨酸-乙醇1.00 mL,0.3%的H2O2溶液1.00 mL,Tris-HCl缓冲液2.00 mL清除效果最佳。     

抗鸡传染性支气管炎病毒多克隆抗体的制备及其生物活性的鉴定

本试验将商品化疫苗株H120鸡传染性支气管炎病毒(IBV)直接免疫大白兔进行抗IBV全病毒粒子多克隆抗体的制备,通过琼扩试验及酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,同时利用免疫组织化学、免疫荧光及Western blotting技术检测了所制备多抗血清的生物活性。试验结果表明,制备得到的多抗血清具有很高的抗体效价,同时能够与不同形式的IBV相关抗原发生特异性结合。