桦褐孔菌发酵产物对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation products,IOFP)饲喂时间对鸡新城疫(Newcastle disease,ND)疫苗免疫效果的影响,优化和完善饲喂方案,降低生产成本,对饲喂不同时间IOFP机体的体液和细胞免疫反应部分指标进行了测定。试验分为6组,在日粮中全程添加(Ⅰ组)、免疫前添加7 d(Ⅱ组)、免疫前后分别添加4 d和3 d(Ⅲ组)、每添加4 d间隔3 d(Ⅳ组)8 g/kg IOFP,且均免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)弱毒疫苗;Ⅴ组免疫接种疫苗,饲喂商品化日粮;Ⅵ组为以PBS代替疫苗免疫,同时饲喂商品化饲料的空白对照组。所有动物于14日龄进行NDV弱毒疫苗免疫,21 d后加强免疫。分别于首免后0、7、14、21、28、35、42 d分离各组外周血血清,进行NDV血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体滴度和中和抗体滴度的测定;分离不同时间点外周血淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)进行增殖指数的测定、Th1型和Th2型细胞因子mRNA表达水平的检测。结果显示,在日粮中添加IOFP能够有效提升疫苗的免疫效果,相比于其他各组,Ⅰ组和Ⅱ组的添加方式能够更为显著的提升机体的NDV HI抗体滴度和中和抗体滴度、PBMCs增殖水平和Th1型/Th2型细胞因子mRNA的表达量。考虑到成本,最终选择免疫前饲喂7 d为IOFP作为口服免疫增强剂的最佳应用方式。     

CpG ODN免疫佐剂效应研究进展

人工合成的含非甲基化CpG基序的寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)能够与树突状细胞、B细胞、单核细胞及巨噬细胞等免疫细胞内质网膜上的Toll样受体9(TLR-9)结合,通过产生Th1型免疫反应和分泌促炎因子来增强免疫应答的强度,在机体抵抗病原入侵和抗肿瘤等方面起到免疫增强剂的作用。近年来,CpG ODN作为一种新型免疫佐剂受到了人们越来越多的关注。论文主要介绍了CpG ODN的种类及其结构和功能特征、作用机制、对畜禽的免疫增强作用、安全性等方面的研究进展,为CpG ODN作为疫苗佐剂的进一步研究和在兽医临床上的应用提供参考。     

桦褐孔菌在兽医领域研究现状及前景

桦褐孔菌是一种珍稀药用真菌,主要分布在北美、俄罗斯的西伯利亚、波兰、芬兰、日本的北海道地区和我国的黑龙江和吉林省等气候寒冷的地区.桦褐孔菌中文名称为白桦茸,还被赞誉为"西伯利亚灵芝".     

药食两用真菌-桦褐孔菌

桦褐孔菌是一种天然的药食两用真菌,在预防、抑制或治疗疾病方面起着重要作用,有良好的保健和医用价值.本文从生物属性、生长环境、药理作用、生产应用等多方面对桦褐孔菌作一综述,有助于学者充分利用现代医学和技术加强对桦褐孔菌的深入研究,使药用价值发挥最大化.     

半仿生法降解桦褐孔菌菌核多糖的研究

[目的]利用人工胃液和人工肠液对热水提取的桦褐孔菌菌核多糖进行半仿生降解,旨在确定桦褐孔菌菌核多糖在胃液及肠液中的降解方式。[方法]采用苯酚硫酸法、DNS法测定降解过程中桦褐孔菌菌核的糖含量及还原糖含量;应用高效液相色谱法(HPLC)检测降解产物的分子量。[结果]桦褐孔菌菌核多糖在半仿生降解过程中糖含量随降解时间的延长而不断降低,而还原糖含量变化不明显;降解后的桦褐孔菌菌核多糖在HPLC中的保留时间与未降解的桦褐孔菌菌核多糖相比无明显变化,说明降解前后的多糖分子量未发生明显改变。[结论]桦褐孔菌菌核多糖在胃液及肠液中的降解并非从糖链末端、支链的糖苷键逐个断裂,而是通过将多糖的糖链断裂成短链的方式进行降解。     

CpG ODN增强猪囊尾蚴病疫苗免疫反应的试验研究

依据CpG基序的生物学和免疫学特性，人工设计合成了硫代修饰的多种CpG ODN序列，通过兔、小鼠和猪体进行了与铝胶、206佐剂和蜂胶佐剂的配伍和比较试验，用ELISA法测定加单一佐剂或联合佐剂组疫苗诱导的抗猪囊尾蚴病的抗体含量(IgG或IgG2a)和效价，用MTT淋巴细胞转化试验法测定刺激指数，进一步证实了CpG基序的种类、数量和空间结构以及与其他佐剂联合对疫苗免疫反应的影响，CpG基序以1个TpC的5’端开始，紧接着3个GTCGTT基序，基序与基序之间由TpT或T分隔，在兔、小鼠和猪都能诱导机体产生强烈的免疫反应特别是细胞免疫反应。     

桦褐孔菌多糖对牦牛酸乳品质的影响

通过液体深层发酵技术生产桦褐孔菌并提取其多糖,以感官评分与滴定酸度为依据,通过单因素试验确定最佳多糖添加量,进一步优化桦褐孔菌多糖牦牛酸乳的生产工艺参数,在最优工艺参数条件下研究桦褐孔菌多糖添加对牦牛酸乳品质的影响.结果表明:桦褐孔菌多糖添加量为0.4％时,牦牛酸乳的感官评分最高且酸度较为适口;采用正交试验优化牦牛酸乳...     

CpG ODN对鸡新城疫LaSota活疫苗的免疫增强效应

将3种不同的未甲基化CpGODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后，经滴鼻和点眼免疫鸡，通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量，以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1β mRNA量，分析各CpGODN对新城疫LaSota活疫苗免疫效果的影响。结果表明，经2次免疫后，含GTCGTT核心基序的CpG ODN1组，鸡血清平均HI抗体效价最高达8．2log2、淋巴细胞刺激指数达9．836、NO分泌量达35．833μmol／L，分别比疫苗单独免疫组高出2个滴度（P〈0．05）、4．4（P〈0．01）、27．6μmol／L（P〈0．01）；含GACGTT核心基序的CpG ODN2组增强作用不明显．与疫苗单独免疫组无差异；而CpGODN3的免疫刺激活性由于受其侧翼序列的影响，作用明显减弱甚至丧失。对细胞因子的影响，CpGODN3组IFN-γ mRNA表达量稍高于CpG ODN1组，而其余细胞因子均以CpG ODN1组表达水平最高（P〈0．05）。由此证明CpG ODN1能显著增强鸡对新城疫LaSota活疫苗的体液和细胞免疫反应，可以作为高效的免疫增强剂。     

桦褐孔菌多糖对环磷酰胺化疗后小鼠免疫功能的研究

为了研究桦褐孔菌多糖对环磷酰胺(CTX)化疗小鼠免疫损伤的影响,试验将小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺组和桦褐孔菌多糖低、中、高剂量5个组。除正常对照组外,其余各组均皮下注射CTX 100 mg/kg;桦褐孔菌多糖低、中、高剂量组分别给予桦褐孔菌多糖溶液100,200,400 mg/kg,灌胃,正常对照组和环磷酰胺组给予等量生理盐水,1次/d,连用6 d。第7天检测各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及血清Ig G、Ig M含量,计算免疫器官指数。结果表明:桦褐孔菌多糖可以不同程度地恢复CTX化疗小鼠的胸腺指数和脾脏指数;显著提高小鼠血清Ig G和Ig M水平(P0.05);降低CTX化疗小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数。说明桦褐孔菌多糖能提高机体的体液免疫水平,对巨噬细胞的吞噬功能有调节作用,对CTX化疗免疫功能的损伤有一定的保护作用。     

CpG ODN的最新研究进展

CpG C9DN是指含有CpG基序(以非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤为基元构成的特定核苷酸序列结构)的C3DN。近期研究显示,CpG ODN作为佐剂,可明显促进Th1型免疫应答的产生。其与不完全弗氏佐剂(IFA)联合应用时,其效应甚至强于完全弗氏佐剂(CFA)。即使与Th2型佐剂如氢氧化铝合用亦可明显促进免疫应答的产生,且Th1型应答明显强于Th2型应答。CpG ODN能直接激活B细胞、树突状细胞、     

CpG ODN联合重组乳酸乳球菌鼻内免疫BALB/c小鼠的佐剂效应

本试验初次建立了CpG ODN联合重组乳酸乳球菌滴鼻免疫BALB/c小鼠模型。结果得出CpG ODN佐剂协同重组菌抗原组血清中抗PRRSV特异性抗体IgG和呼吸道黏膜抗体s-Ig A均高于单独重组菌组(P>0.05)和单独佐剂组(P<0.01),佐剂CpG ODN协同重组菌抗原组的Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ及黏膜淋巴因子IL-5的活性高于单独抗原组(P>0.05)及单独佐剂组(P<0.01)。试验结果说明CpG ODN作为佐剂与重组菌鼻腔免疫小鼠后,可以提高重组菌诱导的黏膜免疫反应和Th1细胞参与的系统免疫反应,为研究安全有效的重组菌黏膜疫苗奠定了基础。     

桦褐孔菌多糖对弓形虫感染小鼠基因表达谱的影响

探讨桦褐孔菌多糖对感染弓形虫小鼠基因表达谱的影响,并对其抗虫机理进行分析。BABL/C小鼠腹腔接种RH株弓形虫速殖子103个,建立小鼠弓形虫感染模型。将小鼠随机分成3组:空白对照组、感染对照组、桦褐孔菌多糖治疗组。采集动物肝脏迅速冻存,提取总RNA,检测RNA质量,扩增RNA,进行芯片杂交,扫描后进行数据分析。结果:经SOM分析筛选出桦褐孔菌多糖治疗组的有效差异基因,并对其进行功能注释,分析其治疗弓形虫的主要原因。结果表明:桦褐孔菌多糖可有效治疗弓形虫感染引起的病理损伤,其抗弓形虫机理是通过调节宿主细胞因子水平,促进Th1/Th2平衡,控制Toll样受体信号通路以及对机体整体调控达到抗弓形虫目的。     

桦褐孔菌多糖对小鼠脏器中弓形虫感染的影响

研究桦褐孔菌多糖对小鼠脏器中弓形虫感染的影响,探讨桦褐孔菌多糖对小鼠的保护作用.建立小鼠弓形虫感染模型,设立空白对照组,感染对照组,阳性对照组,桦褐孔菌多糖组.治疗结束后,采集脏器,用半定量PCR检测各脏器中弓形虫基因拷贝数.桦褐孔菌多糖治疗组小鼠的肝脏、脾脏、肺脏中的虫体拷贝数显著低于阴性对照组.表明桦褐孔菌多糖能够...     

粗毛褐孔菌化学成分研究

从粗毛褐孔菌乙醇提取物中分离鉴定了5个单体化合物,经过分析鉴定,分别为羊毛甾二烯二醇（I）、麦角甾醇（Ⅱ）、齿孔酸（Ⅲ）、D－阿拉伯糖醇（Ⅳ）、十八烷酸（V）。首次从该药材中获得各化合物,为药材的综合开发应用提供了科学依据。     

三种中药和桦褐孔菌提取物体外抗弓形虫试验

为了进一步研究甘草、黄芩、马齿苋和桦褐孔菌体外抗弓形虫作用,本试验将提取的3种中药和桦褐孔菌提取物及其组合分别进行了体外抗弓形虫试验。结果表明,甘草和黄芩提取物具有较好的抗虫效果,且黄芩优于甘草,马齿苋和桦褐孔菌提取物抗虫效果较弱;甘草与黄芩组合、4种提取物组合的效果优于其他组合和蒿甲醚组。说明4种提取物组成的复方在体外具有良好的抗弓形虫作用。     

桦褐孔菌多糖和黄芩苷体外抗新孢子虫试验

正新孢子虫病对牛的危害最为严重,是造成母牛流产、产弱胎、死胎、木乃伊胎的主要原因之一。目前国内外对新孢子虫病的防治研究仍处于动物试验阶段,还未筛选出治疗新孢子虫病的特效药物。通常以磺胺类药物和离子载体类药物进行治疗,但因其毒性大、易产生耐药性、药物残留、对动物刺激性大等缺点在临床应用上受到一定的限制。为了寻找有效防治新孢子虫的药物,本试验对桦褐孔菌多糖和黄芩苷进     

桦褐孔菌多糖治疗弓形虫感染小鼠血清中细胞因子的变化

为了探讨桦褐孔菌多糖对感染不同毒株弓形虫小鼠的早期作用机制,将健康鼠随机分成3组,建立感染不同毒株弓形虫小鼠模型后,应用ELISA方法检测血清中IL-6、TNF-α细胞因子水平。结果:感染RH株与感染PLK株的弓形虫小鼠血清中IL-6、TNF-α的结果相比较,2种毒株的模型组于感染后的值均呈现上升趋势,分别在48和24 h达到峰值,而后呈现下降趋势,但感染RH株的模型组表达量在12~60 h比感染PLK株更高;2种毒株的试验组(桦褐孔菌多糖治疗)于12~60 h期间IL-6、TNF-α的值均一直高于阴性组,低于模型组。说明感染RH株弓形虫小白鼠与感染PLK株弓形虫小白鼠相比较更能刺激其血清中IL-6、TNF-α的过度表达,桦褐孔菌多糖能调节感染不同毒株弓形虫小鼠IL-6、TNF-α的表达。研究表明,桦褐孔菌多糖通过提高机体的免疫功能达到抗弓形虫的目的。     

桦褐孔菌多糖的提取及体外抗新城疫病毒活性试验

为研究桦褐孔菌多糖抗新城疫病毒活性,本试验采用水提醇沉法提取桦褐孔菌多糖,用苯酚-硫酸比色法,以葡萄糖为标准品测定桦褐孔菌菌核多糖提取率。并将提取的多糖配制成试验所需浓度用于测定其体外抗新城疫病毒活性。MTT法检测预先加多糖、接种病毒后加多糖和多糖与病毒同时加入3种不同方法对新城疫病毒的抗病毒活性。结果初步说明桦褐孔菌多糖具有一定的抗病毒活性,为新型抗新城疫病毒药物或疫苗的研发奠定基础。     

CpG ODN对水貂免疫增强效果的研究

为获得对水貂具有免疫刺激活性的CpG ODN序列,设计合成了45种含不同CpG基序的DNA序列,应用MTS比色法测定合成CpG ODNs刺激水貂PBMC增殖的能力,结果有11条CpG ODN对水貂PBMC有刺激活性（SI＞2）;应用SI值大于5的6种CpG ODN分别与水貂伪狂犬灭活疫苗联合免疫水貂,免疫后经水貂血清抗伪狂犬中和抗体效价测定和水貂PBMC非特异性增殖效应检测,结果有3个CpG ODN序列对水貂具有较好免疫增强作用,分别是CpG-21(ATCGATTTGTCGTTATCGAT)、CpG-23(ATCGATGAACGTTAACGTTTC)和CpG-24(AACGTTCATCGATATCGATGT)。本研究获得3条对水貂具有较好免疫刺激活性的CpG ODN序列,可为水貂新型CpG佐剂的研究提供参考。     

双菌混合发酵产物稳定性的研究

为了探索复合益生菌剂的稳定性,本试验分别考察了温度、pH值和消化酶对纳豆芽孢杆菌和啤酒酵母混合固态发酵产物的影响,以及其在贮藏过程中的稳定性.结果表明,该发酵产物能耐酸碱、胃蛋白酶和胰蛋白酶,能保证足够数量的活茵在肠道定植并发挥作用.该发酵产物经50℃真空干燥后存活率较高;在-18℃冷藏具有较好的稳定性.