填饲对鹅胰岛素样生长因子结合蛋白2基因表达的影响

研究旨在探讨填饲对朗德鹅胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)基因在肝脏、胸肌和腹脂中表达的影响,将30只70日龄朗德鹅分为填饲组(15只)和对照组(15只),分别于77(填饲7 d)、84(填饲14 d)和89(填饲19 d)日龄采集填饲组和对照组的组织样本。采用实时荧光定量PCR法测定朗德鹅不同填饲阶段IGFBP2基因在肝脏、胸肌和腹脂中的表达情况。结果发现:各阶段填饲组肝脏中IGFBP2基因的表达量显著低于对照组(P0.05),且随着填饲时间的延长,表达水平下降趋势更加显著;胸肌中IGFBP2基因的表达量在填饲的第7和19天与对照组相当,而在第14天则显著低于对照组(P0.05);腹脂中IGFBP2基因的表达量在填饲的第7天和第14天显著低于对照组(P0.05),而在填饲第19天时,IGFBP2基因的表达量在填饲组与对照组间差异不显著。结果表明,IGFBP2基因的表达与鹅肥肝的形成密切相关,为深入研究IGFBP2基因在肥肝形成过程中的作用奠定基础。     

鹅乙酰辅酶A酰基转移酶2基因的克隆及其在鹅肥肝形成过程中的表达变化

为了探讨ACAA2基因与鹅(Anser anser)肝脂肪代谢的关系,本试验选取35只朗德鹅分为填饲组(15只)和对照组(20只),填饲组包括填饲7、14和19天3个阶段。运用RT-PCR方法克隆出朗德鹅ACAA2基因的完整编码序列并进行生物信息学分析,采用实时定量PCR技术测定了朗德鹅填饲不同阶段该基因在肝中的表达水平,并用葡萄糖、脂肪酸和胰岛素分别处理鹅原代肝细胞,观察这些因子对基因表达的影响。朗德鹅ACAA2基因完整CDS区长1 194bp,编码397个氨基酸;各阶段填饲组肝中该基因的表达量显著高于对照组(P0.05),但随填饲时间的延长,表达水平呈下降趋势。另外,在培养的鹅原代肝细胞中,相较于对照组,0.5mmol·L~(-1)的油酸能使ACAA2的表达量显著上调,而0.25mmol·L~(-1)的棕榈酸和不同浓度的胰岛素能显著下调ACAA2的表达(P0.05)。结果表明,ACAA2基因的表达与鹅肥肝的形成密切相关,为深入研究ACAA2基因在鹅肥肝形成过程中的作用奠定了基础。     

鹅乙酰辅酶A酰基转移酶1基因的克隆、表达及生物信息分析

本实验旨在探究鹅乙酰辅酶A酰基转移酶1(ACAA1)基因的分子结构和功能特性,及其在鹅肥肝形成过程肝脏中的表达变化。选用体型和体重相当的70日龄健康朗德鹅42只,正常填饲,填饲到21 d转为限制饲养。然后分别在填饲前(OF0)、填饲第7天(OF7)、填饲第14天(OF14)、填饲第21天(OF21)、限制饲养第7天(F7)、限制饲养第14天(F14)和限制饲养第21天(F21)7个填饲阶段各采集6只鹅肝脏组织样本;采用RT-PCR和RACE方法克隆获得朗德鹅ACAA1基因cDNA全长序列并进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR方法检测ACAA1基因在朗德鹅不同填饲阶段肝脏中的表达。结果表明:鹅ACAA1基因cDNA全长为3 352 bp,其中CDS区为1 323 bp,5'UTR长度为77 bp,3'UTR长度为1 952 bp,编码441个氨基酸;在朗德鹅肥肝形成过程中,ACAA1基因在肝脏中的表达量呈先上升后下降的趋势,其在填饲14 d的鹅肝脏中表达量最高(P0.05),在填饲结束限饲阶段的鹅肝脏中表达最低(P0.05),限饲到21 d,其表达量恢复到填饲前水平。结果提示,ACAA1基因的表达与鹅肥肝的形成密切相关,为研究ACAA1基因在鹅肥肝形成中的生物学功能及其分子机制奠定基础。     

内质网应激标记基因Grp78参与鹅肥肝免疫/炎症状态的调控

旨在揭示内质网应激(ERS)标记基因Grp78是否参与鹅肥肝中炎症/免疫相关基因的表达调控。本试验选择健康的、体重相近的70日龄朗德鹅30只(未分公母),随机分为对照组(n=15)和填饲组(n=15)。利用荧光定量PCR测定不同填饲阶段(填饲7、14、19 d)不同组织中Grp78的相对表达量(n=4),以明晰Grp78与鹅肥肝形成的关联;在鹅原代肝细胞中过表达Grp78,并通过RNA-seq分析Grp78所影响的信号通路和基因(n=3);利用荧光定量PCR检测鹅肥肝中与炎症/免疫相关的基因表达量(n=4),以明晰这些基因与Grp78的关联。结果表明,肝和腹脂中Grp78的表达量受填饲影响(肝中下降,而腹脂中上升)。Grp78基因的过表达试验表明,ERS除了可影响已知的代谢病和细胞凋亡通路外,还影响信号转导、免疫等通路。在免疫/炎症方面,"Toll-like receptor signaling pathway"、"TNFαsignaling pathway"、"NF-kappa B signaling pathway"等通路最为突出。此外,免疫/炎症相关基因Tnfsf10、Map3k7cl在鹅原代细胞中的表达受Grp78过表达影响,在鹅肥肝中受填饲影响。总之,本研究揭示了Grp78/ERS新的生物学功能,即对细胞的免疫/炎症状态进行调控,并借此参与鹅肥肝的形成。     

鹅Perilipin基因部分片段的克隆、不同品种及填饲对组织mRNA表达水平的影响

本研究旨在克隆鹅围脂滴蛋白(Perilipin)基因,并探讨填饲对其在四川白鹅和朗德鹅肝脏中表达的影响,为从脂滴角度研究鹅肥肝分子机理提供依据。试验选取12只朗德鹅和12只四川白鹅为研究对象,通过RT-PCR方法扩增鹅Perilipin基因部分序列,采用实时定量技术研究了该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况,最后检测填饲后两品种鹅肝脏总脂质含量、甘油三酯(TG)水平、肝质量以及Perilipin基因表达变化。结果表明:获得的鹅Perilipin基因序列与原鸡的同源性最高,与哺乳动物的同源性也达到70%以上;从组织表达上看,该基因主要表达于腹脂和皮脂,而在其他组织几乎不表达;填饲引起鹅肝脏Perilipin mRNA表达丰度的极显著增加(P0.01),且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关;此外,填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅(P0.05)。结果提示:填饲会引起Perilipin mRNA在鹅肝脏中表达丰度的极显著增加(P0.01),且其增加幅度存在着品种间差异(P0.05)。     

卵泡抑素样蛋白5基因在鹅肥肝形成中表达调控的研究

试验旨在探讨卵泡抑素样蛋白5(FSTL5)基因与鹅(Anser Cygnoides)肥肝形成的关系。试验选取30只健康、体重基本一致的70日龄朗德鹅,随机分为填饲组(15只)和对照组(15只)。在填饲到82日龄(填饲12 d)和94日龄(填饲24 d)时屠宰取样。此外,分离培养鹅原代肝细胞,并用葡萄糖、胰岛素和不同脂肪酸进行处理。结果显示:填饲后期肝脏和腹脂中FSTL5基因的表达量显著低于对照组(P<0.05),而胸肌中的表达量显著高于对照组(P<0.05)。在鹅原代肝细胞中,100 nmol/L胰岛素或0.25 mmol/L亚油酸能诱导FSTL5的表达(P<0.05)。综上所述,肝脏、脂肪与肌肉组织中的FSTL5表达在鹅肥肝形成后期受到显著影响,脂肪肝形成相关因子特别是胰岛素和亚油酸可诱导FSTL5的表达。研究结果为进一步研究FSTL5基因在鹅肥肝形成过程中的作用奠定了基础。     

鹅肥肝的生产及其FAS活性测定

以黄玉米为主要饲料,配以自制添加剂,分组对朗德鹅进行数周强制填饲,同时进行鹅肥肝的生产和肝脏脂肪酸合成酶(FAS)活性的测定.试验结果表明朗德鹅在不同填饲时期的产肝性能不相同,填饲四周后,平均肥肝重573.6g,最大的肥肝重量达800.4g;不同填饲时期鹅肥肝的脂肪酸合成酶活性也不一致,肥肝平均FAS活性高达1372.6(U/mL).本研究为提高鹅肥肝品质以及探讨其形成分子机理奠定了基础.     

鹅ACSL1基因克隆及其在鹅肥肝形成中作用的初步研究

本研究旨在克隆鹅长链酯酰辅酶A合成酶1(ACSL1)基因,并研究其在填饲诱导鹅肥肝形成中的作用,为揭示ACSL1在鹅肥肝形成过程中的作用提供依据。以前期抑制消减杂交文库筛选的部分ESTs序列为基础,通过RT-PCR扩增鹅ACSL1基因CDS、并用实时定量等技术检测该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况及填饲对其在肝脏中表达的影响,同时与填饲后鹅肝脏总脂质、甘油三酯(TG)、肝质量等指标进行相关分析。结果发现:鹅ACSL1基因CDS全长2100bp,编码699个氨基酸。保守结构区预测发现,其蛋白质跟其他物种一样,也存在2个保守功能区(ATP/AMPmotif和FACSmotif)和1个跨膜结构域,它与鸡、牛、人、小鼠ACSL1基因的同源性分别为93%、80.4%、78.5%、77.3%;该基因主要表达于腹脂、皮脂、肝脏,而在其他组织表达相对较低;填饲能引起ACSL1mRNA在鹅肝脏的表达丰度极显著增加(P0.01),且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关;同时,填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅(P0.05)。结果提示:填饲引起ACSL1mR-NA在鹅肝脏中极显著增加(P0.01),且其增加幅度存在着品种间差异(P0.05)。     

乳酸菌对朗德鹅填饲效果的影响

为探讨乳酸菌在填饲过程中对朗德鹅产肝性能、脂肪沉积、屠体性能、养分表观消化率及血清生化指标的影响,试验选用108只健康、体重相近的12周龄朗德鹅,随机分为试验A组、试验B组和对照组,每组6个重复,每个重复6只。对照组填饲日粮为无乳酸菌菌液的基础日粮,试验A、B组于正式填饲前期(1~5 d)分别在基础日粮中添加2 000、3 000 g/t乳酸菌菌液;正式填饲中期(6~15 d)分别在基础日粮中添加3 000、5 000 g/t乳酸菌菌液;正式填饲后期(16~25 d)不添加乳酸菌菌液。结果表明,与对照组相比,日粮中添加乳酸菌使填饲朗德鹅肥肝成熟期延长(P<0.05),淘汰率降低;与对照组相比,日粮中添加乳酸菌使填饲朗德鹅肝脏脂肪沉积比例下降,试验B组肥肝重、肝脏重/(肠脂重+腹脂重)、肝脏重/填饲期增重显著降低(P<0.05);各组间屠体性能指标均无显著性变化(P>0.05);与对照组相比,试验B组粗脂肪表观消化率显著升高(P<0.05),试验A、B组钙、磷的表观消化率显著升高(P<0.05);与对照组相比,试验A、B组血清中甘油三酯、胆固醇和极低密度脂蛋白含量显著降低(P<0.05)。综上所述,饲喂添加乳酸菌的日粮虽可促进鹅体健康,但会延缓鹅肝脏脂肪的沉积,不利于鹅肥肝生产。因此,生产中不宜在朗德鹅填饲日粮中添加乳酸菌。     

与鹅肥肝形成相关的血液生物标志物的筛选

Micro RNAs(mi RNAs)通过作用于靶基因发挥其生物学功能。研究测定了填饲19 d的朗德鹅与对照组朗德鹅(非填饲的常规饲喂组)(每组3只)血清中的mi RNAs比较,筛选出对照组与填饲组存在显著差异的mi RNAs,并与肝脏中差异表达的mi RNAs比较,确定在血液和肝脏中均共同上升的mi RNAs。结果表明:填饲朗德鹅血液中有295个mi RNAs的含量显著不同于对照组(19个上升,276个下降),其中4个mi RNAs(let-7a-2-3p、mi R-184、mi R-222a-3p、mi R-1662)在血液和肝脏中的含量均显著上升,提示它们可能是鹅肥肝形成的血液生物标志物。     

朗德鹅C/EBPα基因的克隆及不同处理对其在肝脏中表达的影响

为研究C/EBPα基因与朗德鹅肝脏脂肪代谢的关系,本研究克隆了朗德鹅C/EBPα基因,预测其蛋白结构和功能,并通过实时荧光定量PCR技术检测了朗德鹅肝脏C/EBPα基因在对照组和填饲、填饲+T3、填饲+T3+甜菜碱、填饲+甜菜碱等4个不同处理组中的表达情况。结果发现:朗德鹅C/EBPα基因序列长为1 401bp,开放阅读框(ORF)为975bp,编码324个氨基酸的蛋白质,两侧分别是210bp的5′-UTR和397bp的3′-UTR;预测朗德鹅C/EBPα蛋白位于细胞核中,不含有信号肽,不含有跨膜区,含有bZIP功能结构域;不同填饲处理组肝脏组织中C/EBPα基因的表达显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),其中填饲+T3+甜菜碱处理组显著高于其它3个填饲处理组(P<0.05),与对照组差异极显著(P<0.01)。推测C/EBPα基因在朗德鹅肝脏脂肪代谢过程中发挥作用。     

肥肝鹅恢复期血液生化指标、肝脏常规营养成分及脂代谢相关基因表达水平的变化研究

试验旨在研究朗德鹅填饲形成肥肝及恢复后其体重、肝脏重、腹脂重、常规营养成分、血液生化指标和肝脏中与脂代谢相关基因的表达变化情况,为进一步阐明鹅肥肝的恢复或保护机制提供依据。将18只70日龄朗德鹅随机分为3组(每组6只):组1为对照组,用玉米饲料进行常规饲喂;组2为填饲组,填饲玉米饲料19 d;组3为填饲19 d后再用玉米饲料常规饲养20 d进行肝脏恢复。结果显示,与组2相比,组3鹅体重、肝脏重均极显著降低(P<0.01),而腹脂重下降不显著(P>0.05);与组2相比,组3肝脏水分、灰分和粗蛋白质均显著上升(P<0.05),而粗脂肪含量显著下降(P<0.05),但与组1相比,除水分外,各项指标均无显著变化(P>0.05);与组2相比,组3血浆中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度与组2相比均显著下降(P<0.05),但与组1相比,均无显著差异(P>0.05);与组2相比,组3肝脏中脂肪酸脱氢酶(FADS1)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)和细胞色素P450 2C45(CYP2C45)基因的表达量均显著下降(P<0.05),但与组1相比均无显著变化(P>0.05)。综上所述,本研究从不同层面揭示了鹅肥肝的可逆性,为深入研究鹅肥肝的恢复或保护机制,促进动物脂肪肝问题的解决奠定了基础。     

A-FABP基因内含子2多态性及A-FABP基因在鹅组织中的差异表达研究

采用PCR-RFLP技术检测160只雄性五龙鹅和172只雄性朗德鹅A-FABP基因内含子2的遗传变异,并与体重和肥肝性状进行关联分析;同时利用Real-timePCR技术检测A-FABP基因在朗德鹅10种组织中的表达情况。结果表明:克隆的五龙鹅和朗德鹅A-FABP基因内含子2序列长461bp(GenBank登录号为DQ647701、EF639390)。该扩增产物酶切后,发现有HaeⅢ-RFLP,并出现AA、AB和BB3种基因型;五龙鹅和朗德鹅的基因型频率分别为0.7、0.2、0.1与0.372、0.465、0.163。填饲的朗德鹅在体重和肥肝重上基因型AA与AB和BB之间存在显著差异(P<0.05),而五龙鹅在体重性状上3种基因型之间差异不显著(P>0.05);A-FABP基因在朗德鹅各组织中的表达量为肝>脂肪>腿肌>脾>肺>心>胸肌>肾>睾丸>脑,A-FABP基因在肝脏和脂肪的表达量之间差异不显著(P>0.05),而与其他组织的表达量相比差异显著(P<0.05)。     

鹅LXRα基因的克隆及填饲对其mRNA水平的影响

为了研究填饲对LxRα mRNA表达水平的影响,本试验以四川白鹅和朗德鹅为试验对象,通过RT-PCR方法克隆了鹅肝脏X受体α(LXRα)基因部分序列,并采用SYBR-Green法研究了填饲对LXRα基因在肝脏和脂肪组织中转录水平的影响.结果获得了1005 bp的鹅LXRα部分序列,且与其它物种有较高的相似性,但存在8个氨基酸变异位点.LXRα基因在肝脏、腹脂和皮脂中都有表达,但在肝脏中的表达量最高.填饲引起鹅皮脂、腹脂和肝脏的LXRα mRNA表达丰度的显著增加.对照组中,LXRα在朗德鹅肝中的表达量高于四川白鹅(P<0.05),而在皮脂、腹脂中朗德鹅的表达量低于四川白鹅(P<0.05).填饲组,在肝和腹脂中LXRα的表达量四川白鹅显著高于朗德鹅(P<0.05),皮脂中表达量品种间差异不显著.填饲后LXRα mRNA表达丰度与皮脂、腹脂和肝脏的相对质量呈显著正相关,并且朗德鹅的相关性要强于四川白鹅.结论:填饲引起鹅肝脏和脂肪组织的LXRα mR-NA表达丰度的显著增加,填饲对LXRα mRNA表达的影响存在显著的品种差异.     

开填日龄对朗德鹅脂肪沉积和生长性能的影响

试验旨在研究不同开填日龄对朗德鹅脂肪沉积与生长性能的影响。试验选取同条件饲养的70和120日龄朗德鹅各60只作为研究对象,在相同条件下开展填饲试验,正式填饲至14 d时称量试验鹅体重,试验结束时取肝脏并测量各屠宰指标以及脂肪沉积能力。结果显示:(1) 70日龄开填朗德鹅体重较120日龄开填朗德鹅低235.71 g,肝脏成熟时屠宰重基本接近,整个填饲期,70日龄开填朗德鹅增重与120日龄开填朗德鹅无显著差异。(2) 70日龄和120日龄开填朗德鹅试验结束时肝重差异显著(P<0.05),但70日龄开填朗德鹅料肝比(26.18)显著低于120日龄朗德鹅(30.43)(P<0.05)。(3)脂肪沉积方面,70日龄和120日龄开填朗德鹅腹脂重及腹脂重占体增重比例无显著差异,但120日龄组朗德鹅的肠脂重占体增重比例显著高于70日龄组(P<0.05)。(4) 70日龄开填朗德鹅屠宰后头重、小翅重、大翅重、肌胃重和鹅掌重与120日龄试验鹅差异不显著(P>0.05)。结果表明:70日龄开填朗德鹅肥肝重低于120日龄朗德鹅,但其填饲期增重多,料肝比也较低,具有更好的填饲效率。120...     

性别、体重及气温对鹅肥肝重的影响

本研究通过填饲试验研究体重、性别对鹅肥肝重的影响,同时结合2014年全年肥肝生产记录及当地气温资料研究气温对鹅肥肝重的影响,以期为肥肝鹅的生产和育种工作提供参考资料。选择415只10周龄健康朗德鹅,开展为期28 d的填饲试验,测定填饲前、填饲后体重,屠宰后测定肝脏重和腹脂重,采集血样,提取DNA后用于鉴定填饲鹅性别,同时收集2014年全年7 007只肥肝鹅肝脏重数据,结合每月的平均气温数据,分析气温对鹅肥肝生产的影响。结果表明,家鹅填饲前后体重及填饲期增重与肝脏重呈显著正相关,相关系数分别为0.40、0.62和0.46,均为极显著正相关（P < 0.01）,其中,填饲后体重极显著影响肥肝重（P < 0.01）;公、母鹅体重相近时性别对肥肝重无显著差异（P > 0.05）;气温对填饲效果具有极显著影响（P < 0.01）,填饲工作宜在13.6~25.2 ℃的温度下开展,20.3 ℃为最适宜填饲气温,气温越高肥肝重越小。综上所述,温度是保证填饲成功的最基本条件;可通过体重间接选育肝用型鹅品种;性别对肝脏重无显著影响。     

朗德鹅填肥期SCD1基因的表达及其相关miRNA的筛选

SCD1是位于内质网上的一类催化酶,在肝脏的脂质代谢及鹅肥肝形成中发挥重要作用。试验通过荧光定量PCR技术对填饲不同阶段(填饲7、14和19 d)朗德鹅肝脏中SCD1基因的表达进行了研究。结果发现:SCD1基因在填饲各阶段肝脏中表达量均高于对照组,且填饲19 d时,填饲组表达量极显著高于对照组(P0.01);通过测定填饲组各时期肝脏中棕榈油酸、油酸含量以及血液中甘油三酯和胆固醇含量发现,SCD1基因表达量与油酸、胆固醇、VLDL以及甘油三酯含量均呈显著正相关(P0.05);通过生物学软件预测SCD1的靶向miRNA并利用双荧光素酶报告系统在CHO细胞系中验证所筛选的3个miRNA,结果显示miR30b与miR-30a-5p为鹅SCD1基因可能的靶向miRNA,进一步研究发现miR-30b和miR-30a-5p在填饲组表达量均显著低于对照组(P0.05),表明miR-30b和miR-30a-5p可能通过对SCD1基因的调节作用影响鹅肝脏脂代谢过程。     

朗德鹅填饲后不同组织PPARγ基因mRNA表达量差异的初步研究

本研究采用荧光定量PCR检测了填饲、未填饲朗德鹅肝脏、皮下脂肪、腹脂和肌肉组织PPARγ基因mRNA的表达水平,并与谷丙转氨酶等6种血清生化指标进行了相关性分析。结果表明：在肝脏组织中,填饲组PPARγ 基因mRNA的表达量极显著高于对照组中该基因的表达量（P〈0.01）;肝脏组织PPARγ 基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈显著正相关（P〈0.05）,腹脂PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈显著正相关（P〈0.05）,皮下脂肪PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈极显著正相关（P〈0.01）。结果表明肝脏、皮下脂肪、腹脂组织PPARγ基因mRNA的表达水平与朗德鹅肥肝形成有一定的关系。     

朗德鹅饲养观察及发展前景初探

法国朗德鹅是目前世界上最著名的产肥肝品种。我县为了提高鹅肥肝产量.发展创汇农业,从外地引进一批青年朗德鹅。经一周年的饲养观察,对我县自然环境条件的适应性表现良好,有发展前景。现综述如下:(一)生长发育情况.以我县农民养鹅传统方法饲我县为了提高鹅肥肝产量.发展创汇农亚.从外地引养,即白天放牧.晚间以青料为主适当搭配精粗料喂进一批青年朗德鹅。     

填饲对朗德鹅生长参数和代谢的影响

为研究填饲对朗德鹅生长参数和代谢的变化及程度以及生长参数与代谢参数之间的相关性,将30只90日龄朗德鹅公鹅随机平均分为2组笼养.填饲组高频填饲高能玉米,对照组自由采食普通饲料.21 d后测量体重(活重)、肝重、腹脂重;检测血脂和血糖等指标.填饲组较对照组体重、肝重、腹脂重极显著增高(P＜0.01),血糖显著增高(P＜0.05),血甘油三酯(P＜0.01)、总胆固醇和游离脂肪酸(P＜0.05)显著增高;填饲组体重与腹脂重显著正相关,总胆固醇与体重显著负相关.强制填饲后朗德鹅脂代谢、糖代谢均发生严重紊乱,多个参数的相关性较对照组显著改变.