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1.
实验旨在研究白羽王鸽胚胎期胸肌肌纤维发育规律,并分析肌纤维发育相关基因在胸肌发育过程中的表达变化规律。采集鸽不同孵化时间胸肌组织,利用石蜡切片技术研究胸肌肌纤维发育规律,利用RT-qPCR技术检测肌纤维发育相关基因在胸肌发育过程中的表达变化规律。结果显示,鸽肌纤维在12胚龄时仍处于成肌细胞增殖和分化的混合期,14胚龄时肌细胞融合程度进一步上升,16胚龄时肌细胞增殖和分化基本完成,至出雏时肌纤维已基本发育成熟。在鸽胚胎发育过程中,胸肌肌纤维直径逐渐增加,肌纤维密度呈现先增加后降低的趋势。基因表达结果显示,Myf6表达量随着胚龄的增加不断上升,至出雏达到最大表达量;MyoD呈现先下降后上升的趋势;MyoG表达呈现持续下降的表达趋势,至出雏达到最低表达量;MSTN 12~14胚龄表达量下降,14胚龄后显著回升,至出雏达到最大表达量。综上所述,本研究结果有助于深入理解鸽骨骼肌发育规律,为进一步研究白羽王鸽骨骼肌生长发育调控机理提供理论参考。  相似文献   

2.
鸭胚骨骼肌不同组织Myf6基因表达的发育性变化研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
为研究Myf6基因对鸭肌肉发育的影响,本试验利用实时荧光定量PCR绝对定量技术检测Myf6基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期第13、17、21、25、27天及出生后7日龄胸肌、腿肌发育过程中的表达量。结果显示,Myf6基因在2个品种的胸肌和腿肌中均有表达,在不同品种同一肌肉组织中的表达变化规律一致,而在不同肌肉组织中的表达模式不同,其中在胸肌组织中21胚龄时表达量最高,随后表达量下降,维持相对较高表达水平;在腿肌组织中13胚龄时表达量较高,17胚龄时达到最高,随后表达量有所降低,并在21胚龄后急速下降至极低水平,但其表达在胚胎期后期(27胚龄)及初生期(7日龄)又有缓慢上升趋势。上述结果表明,Myf6基因参与了胸、腿肌组织的发育,在胸、腿肌中表达模式不同,推测Myf6基因在胸、腿肌中的调控存在差异,可能与其胸、腿肌不同肌纤维的发育与分化有关。  相似文献   

3.
为了研究坝上长尾鸡胚胎期肌纤维的生长发育规律,试验选取孵化至第6~21天的鸡胚胸肌和腿肌制作石蜡切片,显微镜下测定不同时期肌纤维直径和肌纤维密度,对比胸肌、腿肌的发育程度,并取第1,7,14日龄雏鸡胸肌、腿肌制作涂片观察肌节发育情况。结果表明:从孵化的第6胚龄开始,成肌细胞逐渐融合成肌纤维;从孵化的第14胚龄开始,胸肌和腿肌肌纤维直径逐渐增加,肌纤维密度逐渐降低,腿肌发育更快;而对比观察1,7,14日龄雏鸡的胸肌、腿肌涂片发现,肌组织发育过程中的肌纤维数目不变,主要表现为肌节长度增长和直径变大,其腿肌发育比胸肌快。  相似文献   

4.
MRFs (Myogenic regulatory factors,MRFs)家族包括肌分化因子MyoD、肌细胞生成素(myogenin)、生肌决定因子Myf5和Myf6,它们参与肌肉发生发育的各个环节.研究采用Real-time PCR方法研究了金定鸭胚胎期13、17、21、25和27日胚龄MRFs家族基因在骨骼肌中的表达变化,并分析其表达变化与胚重、骨骼肌发育的相关性.金定鸭胚重及骨骼肌重发育模式显示胚重在胚胎期呈持续增加趋势,但胸肌在胚胎中后期显示出较腿肌滞后的增重变化.MRFs家族基因在胚胎期骨骼肌中均能检测到表达,MyoD mRNA在21日胚龄前腿肌中的表达量高于胸肌,而在胚胎发育后期(25及27日胚龄)胸肌中表达量渐渐高于腿肌.胸、腿肌中myogenin mRNA的表达与胚重、胸、腿肌发育重量变化均呈强的负线性相关.上述研究结果首次揭示了鸭胚胎期骨骼肌中MRFs家族基因表达具有显著的时空性,推测MyoD mRNA在胸、腿肌中的表达变化可能与胸、腿肌增重表型差异有关,研究结果为进一步深入研究MRFs家族基因在胚胎期骨骼肌发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据.  相似文献   

5.
以矮小品系S2系鸡和隐性白羽鸡作为试验素材,采用q-PCR技术及SPSS分析软件,研究Fas相关因子1(Fas-associated factor 1,FAF1)在两个品种胚胎期至生长期骨骼肌发育中的差异性的表达模式及在成肌细胞增殖和分化期的表达特征。结果表明,FAF1在两品种胚胎期胸肌组织的表达都显著高于出雏后其他发育时期(P0.05),但FAF1在S2系鸡整个胚胎期及出雏当天的表达都显著高于隐性白羽鸡(P0.05);在腿肌组织中,隐性白羽鸡中,在10日胚龄时FAF1的表达量显著高于其他胚龄(P0.05),并随胚龄的增加表达量逐渐下降,在6周龄时表达量显著低于2、4、8、16周龄(P0.05),S2系鸡中,10日胚龄时FAF1的表达量显著高于其他发育时期(P0.05),从胚胎期至出雏后6周表达量随周龄的增加逐渐减少。除6周龄外,FAF1在S2系鸡其他发育时期的表达都显著高于隐性白羽鸡。在鸡原代成肌细胞中,FAF1 mRNA 在分化期的表达显著高于增殖期(P0.05),并随诱导分化时间的延长表达量逐渐升高。结果表明:FAF1 mRNA 表达呈现明显的品种和组织差异性,该基因可能以不同的方式参与调控胸肌、腿肌发育过程,为进一步研究该基因调控肌肉发育的分子机制提供了理论依据。  相似文献   

6.
为研究不同品种鸭胚胎期和出雏早期骨骼肌中NFATc3基因mRNA表达规律及其与生长发育的相关性,运用荧光绝对定量PCR技术检测了生长速度差异较大的高邮鸭和金定鸭13、17、21、25、27胚龄和7日龄胸肌和腿肌中NFATc3 mRNA的表达水平。结果表明胸肌和腿肌NFATc3 mRNA在两鸭品种中均具有相似的表达模式,不存在品种效应,胸肌和腿肌NFATc3 mRNA的表达均是13胚龄时表达量最高,显著高于其它各胚龄或日龄(P0.05);相关性分析结果表明两个品种鸭骨骼肌NFATc3 mRNA表达量与其组织重、体重均呈极显著负相关(P0.01),而与肌肉组织中IGF-Ⅰm RNA的表达量呈极显著正相关(P0.01)。鸭骨骼肌中NFATc3主要在早期的肌纤维生成中起作用,与IGF-Ⅰ可能共同参与了对骨骼肌生长发育的调节。  相似文献   

7.
试验旨在研究RNA m6A修饰相关基因去甲基化酶Alk B同源蛋白5(Alk B homologue 5,ALKBH5)、去甲基化酶肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)、甲基转移酶样蛋白3(methyltransferase like 3,METTL3)、甲基转移酶样蛋白14(methyltransferase like 14,METTL14)和成肾细胞瘤1-结合蛋白(Wilms’tumor 1-associating protein,WTAP)在鸡骨骼肌发育过程中的表达,分析其与骨骼肌m6A甲基化水平的相关性。首先,利用实时荧光定量PCR技术检测m6A甲基化相关基因在金茅花鸡12(E12)、14(E14)、16(E16)、18(E18)胚龄和1日龄腿肌和胸肌组织中mRNA表达水平,以及其在鸡成肌细胞50%、100%增殖期和1、2、3、4、5 d分化期的mRNA表达水平;随后,利用m6A甲基化试剂盒检测金茅花鸡E12和1日龄腿肌和胸肌组织中m6A甲基化修饰水平,与m6A甲基化相关基因表达水平进行相关性分析。结果显示,m6A去甲基化基因ALKBH5和FTO mRNA表达水平在骨骼肌发育过程中显著上调(P<0.05),即在E12、E14低表达,E16、E18逐渐上调,1日龄达到最高。m6A甲基化写入基因METTL14、METTL3和WTAP mRNA表达水平在E12、E14、E16逐渐上升,E18下降,随后至1日龄表达量回升。在细胞增殖过程中,ALKBH5、FTOMETTL14、METTL3和WTAP基因表达均上调;在细胞分化过程中ALKBH5和FTO基因表达水平显著上调(P<0.05),在分化第5天达到最高。METTL14、METTL3和WTAP基因mRNA表达水平在细胞诱导分化的1、2、3、4 d表达量呈下降趋势,而在诱导分化的第5天有所回升。甲基化水平检测结果显示,腿肌和胸肌m6A甲基化水平变化趋势一致,均在胚胎发育过程中显著下降(P<0.05),至1日龄达到最低。相关性分析结果显示,鸡骨骼肌RNA m6A甲基化水平与m6A去甲基化修饰基因ALKBH5、FTO mRNA表达水平呈显著负相关(P<0.05)。综合以上试验结果,推测m6A甲基化修饰与鸡骨骼肌发育相关,而去甲基化基因ALKBH5、FTO可能通过调控RNA m6A甲基化水平,影响鸡骨骼肌发育。本研究结果为进一步研究m6A甲基化修饰调控鸡骨骼肌生长发育的功能和分子机制提供理论依据。  相似文献   

8.
为研究CSRP3在鸡骨骼肌早期生长发育中的作用,本研究通过实时荧光定量PCR技术探讨了CSRP3mRNA在生长速度不同的花山鸡和清远麻鸡胚胎期胸肌中以及体外培养的鸡成肌细胞中的表达,并分析2个品种鸡胚胎期胸肌中CSRP3 mRNA的表达与其胸肌质量、体质量的相关性。体内外研究结果均表明,CSRP3基因的表达随着鸡骨骼肌肌纤维分化进程逐渐升高;同一胚龄时,比较CSRP3mRNA在2个品种鸡胸肌中的表达,均是慢生型清远麻鸡显著高于快大型花山鸡;相关性结果表明,2个品种鸡胚胎期胸肌中CSRP3mRNA表达量与其胸肌质量、体质量均呈正相关,与胸肌质量的相关性达极显著水平。结果提示,鸡胸肌中CSRP3基因的表达具有品种特异性,与胸肌肌纤维的生长和分化有着密切联系。  相似文献   

9.
本研究以18、21、24胚龄和27胚龄的鸭胚为实验对象,研究鸭胚胎后期腿肌成肌细胞增殖和肌纤维发育的特点。采用BrdU标记鸭胚,用免疫荧光法检测腿肌成肌细胞的增殖情况,同时制作石蜡切片进行H-E染色,照相并观察腿肌肌纤维发育规律。结果表明:鸭胚后期腿肌发育明显,全胚重以47.91%的平均速率增长,而腿肌以78.21%的平均速率增长;4个阶段的肌纤维直径、横切面积和单位面积内肌纤维根数均差异显著(P<0.05),而单位面积细胞核数、BrdU标记率差异不显著(P>0.05),但以21胚龄时BrdU标记率最高。研究结果显示,鸭胚胎后期腿肌成肌细胞增殖速率稳定、不断融入肌纤维,导致肌纤维肥大并快速发育,且21胚龄左右是鸭胚胎期腿肌发育的高峰时期。  相似文献   

10.
试验以矮小品系S2鸡为试验素材,采用q-PCR技术以及SPSS分析软件,研究焦点黏连(Focal adhesion)信号通路中调控:小凹蛋白-3(CAV-3)、血小板衍生生长因子受体α多肽(PDGFRA)、分泌型焦磷酸蛋白(SPP1)在生长期骨骼肌发育中的表达模式及在成肌细胞增殖和分化期的表达特征。结果显示:在肌肉组织中,CAV-3在胸肌和腿肌中的表达模式相同,从4周龄开始随着发育时间的增加,CAV-3表达量逐渐降低,在16周龄时显著低于其他发育时期(P0.05);在0日龄、8周龄时PDGRFA在胸肌中相对表达量显著高于腿肌(P0.05),但在16周龄时胸肌中PDGRFA相对表达量显著低于腿肌(P0.05);SPP1在胸肌和腿肌中的表达模式存在显著差异,从4周龄开始,在胸肌中随着发育时间增加,SPP1相对表达量逐渐减少,在腿肌中随着发育时间的增加,SPP1相对表达量逐渐减少。在成肌细胞中,CAV-3相对表达量在增殖期100%时显著高于其他发育时期(P0.05),并随分化时间的增加,CAV-3相对表达量逐渐减少;PDGFRA表达量在分化期的表达显著高于增殖期(P0.05),并随诱导分化时间的延长表达量逐渐升高;SPP1相对表达量在增殖期100%时显著高于其他发育时期(P0.05)。结果表明:CAV-3、PDGFRA和SPP1 mRNA表达量在鸡成肌细胞增殖分化期和鸡肌肉组织生长期分别呈现明显的差异性,3种基因可能分别以不同的方式参与调控胸肌、腿肌发育过程,为进一步研究该3种基因分别调控肌肉发育的分子机制提供了理论依据。  相似文献   

11.
为研究肌纤维发育相关基因在不同地方鸡种的表达调控作用,选用1日龄体重相近的汶上芦花鸡、济宁百日鸡和鲁西斗鸡,分别在1日龄、1~5周龄采集同一部位的胸肌、腿肌,应用实时荧光定量PCR测定Myf5、Myf6、MyoD1和MSTN等基因的表达量。结果显示:汶上芦花鸡胸肌中MSTN基因1周龄表达量显著高于其他周龄(P0.05),鲁西斗鸡腿肌中MSTN基因4周龄表达量显著高于其他周龄(P0.05),济宁百日鸡胸肌中MSTN基因4周龄和5周龄表达量显著高于其他周龄(P0.05),腿肌中4周龄显著高于其他周龄(P0.05);汶上芦花鸡腿肌Myf6基因2周龄的表达水平明显高于其他周龄(P0.05),济宁百日鸡胸肌中Myf6基因5周龄时表达量显著低于鲁西斗鸡和汶上芦花鸡(P0.05);4~5周龄时,济宁百日鸡腿肌MyoD1基因的表达水平最低,在3周龄时,汶上芦花鸡胸肌MyoD1基因表达水平显著高于其他周龄(P0.05);在0和1周龄时,鲁西斗鸡中胸、腿肌Myf5基因表达水平均高于汶上芦花鸡和济宁百日鸡。研究表明Myf5、Myf6、MyoD1和MSTN基因在3个地方鸡种胸肌、腿肌中均呈现出不同的表达调控模式。  相似文献   

12.
旨在了解m6A甲基转移酶样蛋白16(methyltransferase-like protein 16,METTL16)在鸡不同类型肌肉组织中的表达情况及其在鸡骨骼肌功能中的调控作用。本研究利用qRT-PCR技术检测METTL16基因在120日龄广西麻鸡母鸡不同类型肌肉组织中的表达,同时利用siRNA干扰鸡原代成肌细胞中METTL16基因的表达,分析其对成肌细胞增殖、分化和肌纤维形成的影响。结果显示,METTL16基因在鸡的不同类型肌肉组织(胸大肌、胸小肌、缝匠肌、耻坐骨肌内侧肌、耻坐骨肌外侧肌、髂胫外侧肌、腓肠肌内侧肌和背阔肌)中广泛表达,其中,在白肌纤维为主的胸大肌、胸小肌和髂胫外侧肌中表达量相对更高;细胞增殖检测结果显示,干扰METTL16基因表达后,鸡成肌细胞的增殖活力受到了抑制;在成肌细胞分化后干扰METTL16基因表达,鸡成肌细胞RNA m6A甲基化水平呈下降趋势,细胞分化关键基因MyoD表达显著下降(P<0.05),fast-MyHC基因表达显著上升(P<0.001),slow-MyHC基因表达呈下降趋势。综上,METTL16基因在不同类型肌肉中的表达与其肌纤...  相似文献   

13.
鸭胚骨骼肌生肌调节因子MyoD1和Myf5发育性变化研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
本研究采用Real-timePCR分析生肌调节因子MyoD1和Myf5在不同鸭品种(高邮鸭和金定鸭)胚胎期及初生早期(13、17、21、25、27日胚龄和出雏后7日龄)骨骼肌发育中的表达模式以及表达差异。结果表明,MyoD1mRNA和Myf5mRNA在两个品种鸭胸肌早期发育中表现出一致的表达规律,均呈"波浪"型;在腿肌早期发育中均呈近似"反√"型的表达趋势,在27日胚龄时表达量最低,出生后7日龄表达量又上升,但MyoD1mRNA的表达量仅有小幅增加,与27日胚龄的表达量差异不显著(P>0.05),而Myf5mRNA的表达量有大幅增加,与27日胚龄的表达量差异极显著(P<0.01),胸肌和腿肌中两基因的mRNA表达量在同一胚龄不同品种间差异均不显著。结果提示:骨骼肌中MyoD1和Myf5基因表达具有显著的时空性,但不存在品种差异,为进一步深入研究MyoD1和Myf5基因在胚胎期骨骼肌发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据。  相似文献   

14.
以快大黄鸡、竹丝鸡、矮脚黄鸡和杏花鸡12~18日胚龄的鸡胚为试验素材,通过对四个品种各胚龄腿肌纤维和胸肌纤维的直径和横截面积进行观察和测量,对比不同品种鸡胚胎期腿肌和胸肌发育的差异。结果表明:不同品种鸡骨骼肌发育在胚胎期存在差异(P0.05),体型较大、长速较快的鸡较早融合出完整肌纤维轮廓,但在胚胎末期各品种鸡肌纤维的直径大小无明显差异(P0.05)。各品种鸡的腿肌发育都快于胸肌(P0.05),腿肌纤维直径在各胚龄均大于胸肌纤维(P0.05)。研究结果为揭示不同品种间肌纤维生长特性及肉质差异积累理论基础。  相似文献   

15.
Akirin基因家族中Akirin2基因与哺乳动物肌纤维类型密切相关。鸟类中仅有Akirin2基因,为研究Akirin2与鸭肌纤维类型的关系,本文比较了鸭10、14、18、22、27日胚龄及出生后1周龄(P7d)胸肌和腿肌的发育差异,并采用QRT-PCR法检测了Akirin2在以上各阶段胸肌、腿肌中的发育性表达。结果表明,Akirin2基因的表达与胸肌肌纤维的发育关系密切,其表达的增高伴随肌纤维直径的增粗;相反,在腿肌中Akirin2的表达降低伴随肌纤维直径的增粗。因此,Akirin2基因与鸟类红肌纤维发育关系密切,其有可能是鸭胸肌发育以及肌纤维类型组成的关键基因之一,值得在今后的基础研究和育种研究中引起重视。  相似文献   

16.
为研究Ccna1基因在鸭骨骼肌发育中的作用,本研究应用RT-PCR扩增和克隆了鸭Ccna1基因启动子区并作生物信息学分析,应用荧光定量PCR技术检测Ccna1基因以及参与该基因表达调控的多个肌源性转录因子在鸭胚骨骼肌组织发育过程中的表达模式。结果表明,扩增得到鸭Ccna1基因启动子2 213bp。序列分析表明,鸭Ccna1启动子存在典型的TATA-box、CAAT-box调控元件,有MyoD、MRF4、MyoG、Sp1、PITX1及MEF2等多个转录因子结合位点。定量结果发现,MyoD、MRF4、MyoG和Ccna1在鸭胚胎骨骼肌发育过程中均有表达。在鸭胸肌中,MRF4在E23时期表达量最高,显著高于D8的表达量(P0.05);在腿肌中,MRF4和MyoG表达量在E17时期达到最高,且显著高于D2、D8(P0.05)。聚类分析表明,在鸭胸肌组织中Ccna1表达模式与MyoD一致,在腿肌组织中Ccna1表达模式与MRF4、MyoG一致。初步推测,Ccna1参与到了鸭骨骼肌组织的发育,且在鸭腿肌的生长发育中,MRF4、MyoG可能与Ccna1相互作用进而调控骨骼肌发育,而在鸭胸肌组织中,Ccna1的表达可能与MyoD的转录调控有关。  相似文献   

17.
试验旨在探究RPL38基因对狮头鹅肌肉发育进程的影响。选取15胚龄狮头鹅胚胎,分离出腿肌中的成肌细胞,并进行相关分子试验验证。采用RACE试验扩增出狮头鹅肌肉组织RPL38基因的全长mRNA,并参考mRNA序列克隆出表达载体。利用细胞周期检测试验和EDU增殖试验检测成肌细胞增殖,利用qRT-PCR检测肌肉分化相关基因的表达。结果发现RPL38蛋白的进化保守程度极高,但mRNA序列则保守程度很低。RPL38基因在狮头鹅成肌细胞增殖期高表达,而在分化中表达显著下调,通过在狮头鹅成肌细胞中过表达和干扰RPL38基因,发现RPL38会促进成肌细胞的增殖,但不影响成肌细胞分化。结果表明,RPL38可通过调控鹅成肌细胞增殖,影响鹅肌肉的生长发育。  相似文献   

18.
选取胚龄为8、11、15、18、21 d、出雏后3、6、120 d的略阳乌鸡为研究对象,探讨肌肉中肌苷酸合成酶系相关基因的表达规律。采用实时荧光定量PCR检测不同阶段的肌肉组织中PAICS、PPAT、GART和ADSL四种基因的表达水平。结果表明,PPAT、GART、PAICS、ADSL基因在胚胎期都大量表达,PAICS基因在胚胎早期(胚龄第8天)表达量最高,PPAT和GART在胚胎中期(胚龄第11天)表达量最高,ADSL基因的表达随着胚龄的增加呈上升趋势直到成年。另外,腿肌组织中PAICS、PPAT、GART、ADSL基因的表达水平在幼年期和成年期基本一致;但胸肌中四种基因表达量都明显高于腿肌,说明胸肌中肌苷酸的合成量可能会高于腿肌。  相似文献   

19.
本试验旨在研究在半旱养模式下,洗浴池不同的换水频率对马冈鹅雏鹅胸腿肌肌肉发育的影响,为改善鹅养殖环境,提高鹅生长效率提供有益借鉴。选取225只1日龄健康雏鹅,预饲20 d后随机分为3组:每天换水组(E组)、每3 d换水组(T组)和不换水组(N组),试验期4周。于试验第1、2、3、4周采集水样进行内毒素和菌落数进行检测;称量所有鹅体重;每组随机选取6只翅下采血,分离血清进行内毒素测定;采集胸腿肌组织进行HE染色,检测相关基因和蛋白表达量。结果显示:N组洗浴池水体总细菌、内毒素和雏鹅血清内毒素高于E、T两组(P<0.05),且雏鹅存活率较E组有所降低。与E组相比,N组雏鹅胸肌肌纤维密度降低(P<0.05),直径先增加(P<0.05)后降低,腿肌肌纤维密度先降低(P<0.05)后增加,直径降低(P<0.05)。实验第1周时,N组胸腿肌炎症因子TNF-α和IL-6均有N组高于E组趋势(P>0.05),N组雏鹅胸肌成肌增殖相关基因MyoD和分化相关基因Myogenin的相对表达量高于E组(P<0.05),N组腿肌成肌增殖相关基因IGF1,MyoD和Myo...  相似文献   

20.
试验旨在阐明"花山麻鸡"CPT1A基因的组织表达和时序表达规律,以胚胎期到上市日龄的"花山麻鸡"为试验材料,在不同发育时间点采集胸肌、腿肌、心脏、肝脏组织样品,利用实时荧光定量方法分析CPT1A基因在不同组织不同发育阶段表达规律。在相同发育阶段不同组织差异表达结果显示:在胚胎期(9、12、16日胚龄)和上市日龄(9周龄),CPT1A基因在肝脏的表达量显著高于在心脏、胸肌和腿肌的表达量,在出生后1日龄,CPT1A在心脏表达量最高,1周龄时,CPTA在肝脏的表达量最低;5周龄时,CPT1A在腿肌的表达量最高;7周龄时,CPT1A在腿肌和肝脏的表达量显著高于胸肌和心脏。在同一组织不同发育阶段差异表达结果显示,CPT1A在胸肌、腿肌、肝脏和心脏不同发育阶段表达规律与表达量是不同的。研究表明CPT1A基因在胸肌、腿肌、肝脏和心脏相同发育阶段表达量不同,CPT1A基因在胸肌、腿肌、肝脏和心脏织不同发育阶段表达规律与表达量不同。  相似文献   

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