应用单克隆抗体对马传贫弱毒疫苗接种马血清中相应抗原的检测

应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异单克隆抗体酶结合物的免疫斑点试验检测证明，自28份马传贫弱毒疫苗免疫马血清中均检出与单抗呈阳性反应的相应抗原，持续期达51个月以上，自19份人工感染传贫马、自然感染传贫马、弱毒疫苗免疫后攻毒马及42份健康马血清中均未检出单抗原，病理学检查表明，弱毒疫苗免疫马无马传贫病理学改变，以弱毒免疫马肝、脾、骨髓材料进行生物学试验表明，弱毒免疫马体内不存在致病性病毒，这阐明该弱毒疫苗的免疫本质提出一个非常值得今后深入加以探讨的课题。     

检测马传贫强毒感染马与弱毒疫苗免疫马外周血病毒抗原的研究

从马传贫强毒急性感染马的外周血白细胞、血浆、血清中可检出马传贫病毒抗原;从亚急性感染马外周血的白细胞、血浆中可检出马传贫病毒抗原;从无症状慢性马外周血的白细胞中偶尔能检出马传贫病毒抗原。对9匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马连续跟踪3个月,从外周血的白细胞、血浆、血清中均未检出马传贫病毒抗原。     

检测马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区抗体间接ELISA诊断方法的建立

本试验以纯化的重组马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区蛋白作为诊断抗原建立了间接ELISA诊断方法，确定其最佳工作条件为每孔包被重组抗原2仙g，兔抗马IgG酶标抗体以1：4000，血清以1：40倍稀释，底物作用时间为10 min；判定标准为P／N值大于2，且OD值大于0．2的血清为阳性，否则判为阴性。本试验所建立的诊断方法与琼扩试验以及以琼扩抗原作为包被抗原的ELISA试验进行了比较，表明该诊断方法敏感性更高。特异性和重复性试验表明该诊断方法具有良好的特异性和重复性。通过对4匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马血清抗体的检测，发现均在接种2周后可产生抗马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区相应抗体。此抗体一直持续存在到本试验检测的免疫后17个月，且效价较高。，用此方法检测203份马血清样品，其中161份呈抗体阳性，还检测了马传贫自然感染马血清93份，结果全部为阳性。     

马传贫强、弱毒血清抗体鉴别诊断法在古巴的应用

应用中国抗马传染性贫血驴白细胞弱毒抗原株系特异性的单克隆抗体酶结合试剂，以免疫斑点试验与琼脂免疫双扩散试验相结合的方法，对古巴二省疫苗接种地区的２５６匹马进行了马传贫弱毒疫苗接种马和马传贫自然病马鉴别诊断．结果，检出自然病马２３匹．弱毒疫苗接种马２０９匹，健康马２４匹．表明，本法可用于区别古巴马传贫病马和马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马．     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒和驴强毒基因核苷酸序列测定

本项研究马传贫驴白细胞弱毒疫苗病毒感染后总ＤＮＡ和驴强毒感染驴中血病毒ＲＮＡ为起始材料,应用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ的方法,分段扩增马传贫弱毒疫苗病毒和驴毒各基因,并将各基因克隆后进行测序列,根据与国外马传贫病毒核苷酸序列比较,推导出马传贫疫苗毒和马传贫驴强毒全基因组核苷酸序列。     

爱滋病毒抗原(P_(24))检测马传染性贫血病毒的研究

本研究通过基因工程技术生产了爱滋病毒的Ｐ２４抗原,并且运用于马传贫病毒的血清学检查,与传统方法所制备的马传贫抗原对照检测军马２５２４匹以及本实验室保留的各种马传贫阳性血清２２４份。结果显示马传贫血清能够免疫沉淀爱滋病毒（ＨＩＶ）的Ｐ２４,表明它们之间有着共同的抗原决定簇,且Ｐ２４检测法检测率高,检测周期仅３～４ｈ,明显优于传统法,可用于马传贫的快迅检测。     

马传贫云南强毒及其攻击弱毒苗接种马的形态学观察

本试验观察了4匹马传贫云南强毒接种马和13匹用云南强毒攻击的弱毒苗接种马的形态学改变。4匹强毒马均出现急性型马传贫病理变化,但免疫器官中免疫活性细胞的坏死程度远不及我国辽毒急性型传贫马那样严重。甚至较美同Wyoming株毒也差。13匹接种弱毒苗的攻毒马形态学有三种类型变化。第一类型具有铁逆转,组织球,淋巴样细胞反应和网内系增生等较典型的马传贫病理变化,免疫活性细胞少,且变性,坏死。第二种类型无马传贫规律性病变,免疫活性细胞活化,增殖。但肝铁反应增强,脾铁反应明显增生。第三种类型无马传贫病理性损伤,免疫系统明显活化,增殖。依此衡量,10~(-3)lml攻毒试验马中出现Ⅰ型变化的占4/7,显然弱毒苗保护效果不够理想。10~(-4)2ml攻毒马Ⅰ、Ⅱ型变化的占5/6,表明我国研制的弱毒苗对云南毒有预防作用,可用于云南马传贫防制工作。但其中Ⅱ型变化的占3/5,Ⅲ型变化在各弱毒接种马中仅占1/3,比辽毒和Wyoming株毒攻击的弱毒接种马出现Ⅲ型反应的比数均低,结果很不一致。显然云南分离到的马传贫强毒接种马的病理变化及再攻毒马形态学改变与辽寝和Wyoming株毒有差异。本试验对这种差异进行了讨论,认为云南马传贫毒可能是又一个毒株。     

马传贫弱毒疫苗免疫马外周血TB淋巴细胞的动力学观察

近年来,研制成功了马传贫驴白细胞弱毒疫苗,在现地广泛用于马传染性贫血病(简称马传贫)免疫收到了良好效果。但是,人们对马传贫的免疫机理,尚不清楚。为此,我们肘接种马传贫弱毒疫苗马进行了外周血TB淋巴纠胞的动力学观测,以期为     

爱滋病毒抗原（P24）检测马传染性贫血性病毒的研究

本研究通过基因工程技术生产了受滋病毒的Ｐ２４抗原，并且运用于马传贫病毒的血清学检查，与传统方法所制备的马传贫抗原对照检测军马２５２４匹以及本实验室保留的各种马传贫阳性血清２２４份。结果显示马传贫血清能够免疫沉淀爱滋病毒（ＨＩＶ）的Ｐ２４，表明它们之间有着共同的抗原决定簇，且Ｐ２４检测法检测率高，检测周期仅３￣４ｈ，明显优于传统法，可用于马传贫的快速检测。     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒和驴强毒全基因核苷酸序列测定

本项研究以马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒感染细胞总ＤＮＡ和驴强毒感染驴外周血病毒ＲＮＡ为起始材料,应用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ的方法,分段扩增出马传贫弱毒疫苗毒前病毒和驴强毒各基因,并将各基因克隆后进行测序。根据与国外发表的马传贫病毒核苷酸序列比较,推导出马传贫疫苗毒和马传贫驴强毒全基因组核苷酸序列。     

用斑点试验测定马传贫母源抗体的探讨

用斑点试验测定马传贫母源抗体的探讨于秀英焦淑红（内蒙古哲盟兽医工作站）张志明（哲盟家畜繁育指导站）哈尔滨兽医研究所应用生物工程杂交瘤技术研制成功有株系特异性的抗马传贫驴白细胞弱毒疫苗抗原的单克隆抗体，并制成试剂盒，以斑点（ＤＢ）试验和免疫扩散（ＩＤ）...     

马传染性贫血弱毒疫苗免疫马与自然感染马酶联免疫吸附试验血清抗体耐热性比较研究

本试验对马传贫血清抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)的耐热性进行了比较研究.对2匹弱毒疫苗免疫马跟踪检测17个月,在接种3周后ELISA检测均呈阳性,其中一匹马ELISA抗体阳性持续到接种后10个月,另一匹马ELISA抗体阳性可持续到接种后一年.对两匹马的所有不同时期采集的血清样品经75℃加热5 min处理后,用ELISA检测均为阴性.另选6匹马传贫弱毒疫苗免疫马血清且ELISA检测抗体呈阳性的30个样品,经75℃加热5min处理后,均由阳性转变成阴性.4匹经马传贫病毒辽毒株(LN-EIAV)实验感染马且ELISA检测抗体呈阳性的血清样品,经75℃加热5 min处理后,结果仍为阳性.23匹ELISA检测抗体呈阳性的自然感染马血清样品,经加热处理后,19匹马血清样品仍为阳性,4匹马血清样品由阳性转变成阴性.结果表明弱毒疫苗免疫马较自然感染马血清抗体耐热性稍差.     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗株跨膜蛋白主要免疫决定区基因的克隆与表达

从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码跨膜蛋白主要免疫决定区(TMIR)的基因，并在大肠杆菌中进行了表达。所表达的融合蛋白有一部分是可溶的，其氨基端带有6个组氨酸的标签，因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化。在间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹试验中，重组的TMIR蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应，而与健康马血清无任何反应。这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性，可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制、接种马体内免疫应答及马传贫诊断的研究。     

免疫酶斑点法在出口马匹马传贫检疫上的应用

当前,我国向国外出口马匹有所增加。在我国政府向外国签订的有关检疫条款中,马传贫已列入检疫对象,并规定以琼脂扩散试验为诊断本病的依据。但由于我国部分地区马匹接种了马传贫驴白细胞弱毒疫苗,而马传贫自然感染马与弱毒疫苗免疫马又均可出现血清学反应,给检疫工作带来了困难。为了保证出口马匹的质量,维护国家信誉,     

免疫酶斑点法在区分马传贫 疫苗免疫马与病马上的应用

有关检疫条款规定,马传贫病马的检疫以琼脂扩散为依据,但是阿荣旗的马匹在 1986.1987两年均注射了马传贫驴白细胞弱毒疫苗,1988年停注疫苗,到1990年已停注两年,在这种情况下马传贫的检疫是否仍可以用琼脂扩散试验做为诊断依据?我们采用琼脂扩散试验(ID)与免疫酶斑点(DB)试验相结合的办法进行检疫,现将试验情况报     

驴胎LP-1细胞株的建立及其生物学特性的研究

LP-1细胞株取自健康驴三月龄胎儿的皮肤,体外共传48代,其生长动态符合二倍体细胞株的有限生命期特性,染色体稳定,达到二倍体水平。未发现外源因子污染,致肿瘤活性试验阴性。对猪伪狂犬病毒、马传贫病毒、绵羊梅地-维斯纳病毒敏感。LP-1细胞株易于培养,不仅可作为制备马传贫弱毒疫苗和抗原的优良焙养基质,还为马传贫强、弱毒结构蛋白、基因分析等基础理论、生物技术研究提供了条件。     

马传染性贫血病荧光抗体的制备及其初步应用效果的报告

马传染性贫血病(以下简称马传贫)弱毒疫苗的问世,为研究马传贫工作带来许多新的任务。尤其是免疫机制问题,正吸引着越来越多的科学工作者从各自不同的角度进行着深入的探索。我们为了解决马传贫病毒抗原定位和免疫发生,从病理形态学角度应用荧光抗体法进行了试验。     

马传贫强毒攻击穴位注苗马的形态学观察

穴位注射马传贫弱毒苗马２２匹，分别在注苗后２、３、６个月用马传贫强毒攻击，３个月后迫杀。经病理学与免疫形态学联合检查表明，攻毒马有三种类型形态学改变：第Ⅰ种有较典型马传贫病理变化，免疫活性细胞数量减少，且变性、坏死；第Ⅱ种类型无马传贫规律性病理变化，免疫活性细胞活化，增殖，但肝内有铁反应；第Ⅲ种类型马无马传贫病理性损伤，免疫系统明显活化，增殖。据此查明２个月攻毒马１匹，出现第Ⅰ种类型形态学改变，３个月攻毒马８０％以上呈现Ⅱ、Ⅲ类型反应，与疫苗皮下注苗６个月再攻毒效果相仿，表明穴位注苗具有缩短免疫发生时间的效果。但穴位注射６个月攻毒的马出现Ⅰ型，变化例数较多（３３％），病理变化较明显，免疫反应有下降趋势，本文对这种异常现象进行了初步讨论。     

马传贫白细胞弱毒疫苗接种马攻击强毒后病理学和免疫形态学变化的探讨

本试验对46例马传贫白细胞弱毒接种后3～55个月的马用中国马传贫强毒辽系和美国马传贫强毒Wyoming株攻击,攻击3个月后迫杀,经剖检、组织学和组织化学观察和比较,基本可归纳为三种类型的形态学改变:Ⅰ型有典型的马传贫规律性病变,免疫活性细胞减少,其变性、坏死程度较强毒攻击对照马略轻;Ⅱ型无马传贫规律性病变,免疫活性细胞活化、增殖,但肝内有铁反应;Ⅲ型无马传贫病理性损伤,免疫系统明显活化、增殖。疫苗接种马经两强毒株攻击后出现各型变化的马匹比例数有一定差异,但80％以上疫苗接种后强毒攻击的马均呈Ⅱ、Ⅲ型形态学改变,即这些马均处于免疫状态,从而对攻毒马建立了病理形态学和免疫形态学相结合的检测手段。此外,本研究也提出了马传贫白细胞苗的免疫持续期可长达3年以上的形态学根据。     

马传贫强毒攻击穴位注苗马的形态学观察

穴位注射马传贫弱毒苗马２２匹，分别在注苗后２、３、６个月用马传贫强毒攻击３个月后迫杀，经病理学与免疫形态学联合检查表明，攻毒马有三种类型形态学改变；第Ｉ种有较典型马传贫病理变化，免疫活性细胞数量减少，且变性，坏死，第Ⅱ种类型无马传贫规律病理变化，免疫活性细胞活化，增殖，但肝内有铁反应；第Ⅲ种类型马无马传贫病理性损伤，免疫系统明显活化，增殖，据此查明２个月攻毒马１匹，出现第Ｉ种类型形态学改变，３个月