乌鲁木齐市宠物猫源大肠杆菌耐药性及耐药基因检测

为了解宠物猫源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药基因携带情况,在乌鲁木齐市多家宠物医院采集宠物猫肛拭子样品59份进行大肠杆菌的分离鉴定,通过琼脂稀释法测定10种抗菌药物的最小抑菌浓度,利用PCR方法检测13种耐药基因。结果:分离鉴定出大肠杆菌47株,分离率79.7%(47/59)。分离菌对四环素(TET)(83.0%)、阿莫西林-克拉维酸(A/C)(66.0%)和磺胺异噁唑(FIS)(66.0%)耐药情况严重;对头孢他啶(TAZ)、头孢曲松(CRO)、恩诺沙星(EN)、庆大霉素(GEN)耐药率在38.3%～48.9%;对环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AMK)敏感性较好,未检出亚胺培南耐药菌株。菌株多药耐药分布在5～8耐,占比59.6%,耐药表型以1耐TET和6耐A/C+GEN+CRO+TAZ+TET+FIS为主。共检出ant(3″)-Ia、aac(6′)-Ib、bla_TEM、bla_CTX-M、qnrS、tetA、tetB、tetM、sulⅠ、sulⅡ10种耐药基因,检出率分布在8.5%～57.4%,未检出耐药基因oqxB、bla     

53株禽致病性大肠杆菌的耐药表型及耐药基因的检测

为了解禽致病性大肠杆菌耐药表型及耐药基因的情况,选取江苏、安徽等地分离的53株禽致病性大肠杆菌,采用药敏纸片法对9种抗菌药物进行药敏试验,并对四环素类tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(W)、tet(M)、tet(O)、tet(K)、tet(L)耐药基因,喹诺酮类GryA、ParC耐药基因,磺胺类sulⅠ、sulⅡ、sulⅢ耐药基因,β-内酰胺类SHV、CTX-M、ompCA耐药基因,氨基糖苷类aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA耐药基因进行PCR检测。结果显示:53株禽致病性大肠杆菌对磺胺异噁唑、环丙沙星、氨苄西林、多西环素的耐药率较高,分别为88.68%(47/53)、71.71%(38/53)、86.79%(46/53)、75.47%(40/53)。其中50株禽致病性大肠杆菌表现为多重耐药,耐4、5、6种药物的现象最为普遍,且不同地区菌株存在差异。tet(A)是四环素耐药基因中最为流行的一种耐药基因(52.83%,28/53),喹诺酮类耐药基因主要由gryA(94.33%,50/53)、parC(94.33%,50/53)基因编码,耐磺胺类药物sulⅠ、sulⅡ、sulⅢ基因均有检出,分别为96.23%(52/53)、98.11%(48/53)、86.79%(46/53),耐β-内酰胺类药物中仅检出ompC A基因(30.19%,16/53),在检测的11种耐氨基糖苷类耐药基因中,最为流行为aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ基因,分别为92.59%(49/53)、98.11%(52/53)、100%(53/53)。耐药基因与相关耐药菌株检出率基本呈正相关。试验结果表明:53株禽致病性大肠杆菌耐药性高,耐药谱广,耐药基因流行现象十分普遍。本试验结果能为禽致病性大肠杆菌的耐药现状与临床用药提供理论指导。     

仔猪腹泻源大肠杆菌耐药性调查及耐药基因检测

对泰州地区分离的仔猪腹泻源大肠杆菌的耐药性及其携带的相关耐药基因情况进行检测,为养殖场今后合理用药提供科学依据。采用微量肉汤稀释法对分离的49株大肠杆菌进行8种抗菌药物的药敏试验;采用PCR方法对多黏菌素耐药基因mcr-1及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM进行检测。药敏试验结果显示:大肠杆菌对氯霉素、氟苯尼考、氨苄西林、四环素、庆大霉素和恩诺沙星等的耐药率分别达到100%、97.96%、95.92%、89.80%、59.18%和51.02%;而对多黏菌素E和头孢噻呋的耐药率也达到44.90%和32.65%。进一步耐药基因检测结果显示:ESBL耐药基因中blaCTX-M的检出率最高,达到12.24%(6/49);其次为blaSHV,8.16%(4/49);有一株大肠杆菌携带blaTEM基因。其中一株同时携带blaCTX-M和blaSHV。多黏菌素耐药基因mcr-1的检出率达到30.61%(15/49),其中4株同时携带blaCTX-M基因。泰州地区分离大肠杆菌耐药情况和多重耐药现象较为严重,多黏菌素耐药基因mcr-1及ESBL耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM的广泛分布表明这些耐药基因存在快速传播的风险。因此,有必要加强猪场细菌耐药性监测。     

兔源大肠杆菌耐药表型分析

从9个规模化兔场分离到50株大肠杆菌,选取了16种抗生素对这50株大肠杆菌运用Kirby-Barer法进行药敏试验,结果表明：先锋霉素、新霉素、痢特灵、丁胺卡那霉素的抑菌作用比较强;而细菌对氨苄青霉素、阿莫西林、强力霉素、林可霉素则表现出极其高的耐药性,对四环素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、复方新诺明、恩诺沙星、诺氟沙星、链霉素也有很高的耐药性。所分离的大肠杆菌以耐药8～12种居多,占细菌总数的78％,未发现不耐药的菌株与全部耐药的菌株。     

东南沿海地区水禽源大肠杆菌耐药表型及耐药基因型的调查

为研究水禽中大肠杆菌的耐药表型及耐药基因型,本研究从中国广东、福建、浙江、江苏和山东5个省市的水禽养殖场及周边环境中采集鸭粪便样品、水样以及土样1 505份,采用选择性培养基和基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF-MS)质谱分离鉴定大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法检测耐药表型,采用PCR方法筛选大肠杆菌中的25种耐药基因。结果显示,1 505份样品中共分离鉴定出449株大肠杆菌,分离率为29.8%,其中335份来源于粪便,52份来源于土壤,62份来源于水,这些样品中浙江(43.3%)和广东(43.2%)的分离率最高,其次是福建(28.1%)和江苏(23.8%),山东(18.3%)的分离率最低。449株大肠杆菌具有多重耐药性,对氨苄西林、环丙沙星、金霉素、氟苯尼考和磺胺类药物的耐药率分别为90.2%、50.3%、96.7%、87.3%和90.6%,而对替加环素和美罗培南则比较敏感,来源不同省份的大肠杆菌对不同抗菌药呈现出不同的耐药率。PCR检测结果发现,449株大肠杆菌中耐药基因tet(A)检出率最高(88.2%),随后是floR(58.13%)、sul2(57.02%)、tet(B)(53.9%)、cmlA(39.2%)和sul1(36.75%),未检测到qnrA、tet(M)和tet(X)耐药基因的大肠杆菌。在这5个省份中,上述耐药基因在山东省样品中分布均较高,而在浙江省和江苏省样品中分布较低。综上所述,本研究调查了中国东南沿海五省水禽及环境中大肠杆菌的耐药现状,为养殖业抗生素的规范使用提供理论依据。     

牛肉源大肠杆菌的耐药性检测及相关耐药基因分布

为了解牛肉源大肠杆菌的耐药性并检测其相关耐药基因分布,本研究选取了117株牛肉源大肠杆菌,经药敏纸片法对11种抗菌药物进行了药敏检测,并根据耐药表型利用普通和(或)多重PCR技术对耐四环素菌中tet(A)、tet(B)和tet(C)基因,耐氨苄西林菌中blaTEM1、blaPSE1和blaOXA1基因,耐链霉素菌中strA-strB、aadA1基因,耐磺胺类药菌中sul1、sul2和sul3基因进行了调查分析。结果显示,117株大肠杆菌对四环素、氨苄西林、链霉素和磺胺异恶唑的耐药率较高,分别为89%、42%、38%和22%。tet(A)基因是所有四环素耐药基因中最为流行的一种基因(55%);在检测的3个β-内酰胺类药物耐药基因中,最流行的为blaTEM1基因(73%);链霉素的耐药性主要由strA-strB基因(38%)编码;sul2基因在耐磺胺异恶唑菌中的检出率最高(77%)。结果表明本次分离的牛肉源大肠杆菌耐药非常严重,进一步肯定了肉牛业生产中抗菌药的使用对大肠杆菌耐药性的产生和发展所发挥的重要作用,提示食品动物养殖应严格控制饲料中抗菌药的滥用。     

西藏林芝地区仔猪白痢血清型及毒力基因检测

为探究西藏林芝地区仔猪白痢大肠杆菌优势血清型和毒力基因间的相关性,采用玻片凝集试验测定与仔猪白痢有关的血清型,PCR方法调查11种毒力基因。结果显示,在分离的81株藏猪源大肠杆菌里有72株检测到毒力基因,其中黏附素K88和CS31A分别检测到1(1.39%)和34(47.22%)株;肠毒素STa、STb和EAST1分别检测到10(13.89%),16(22.22%)和38(52.78%)株;毒力岛eaeA、irp2和ETT2分别检测到12(16.57%),44(61.11%)和56(77.78%)株。72株中有59株鉴定出9种血清型,其中有15株定型为O8(20.99%),11株定型为O64(16.05%),10株定型为O138(13.58%)。研究表明:O8、O64、O138为优势血清型,且O8与STa+STb相关,O107与肠毒素STa相关,O64与毒力岛eaeA+ETT2有关,毒力基因以EAST1+CS31A+irp2+ETT2组合检出率最高为18(25%)株。     

西藏牦牛源大肠杆菌主要耐药表型及耐药基因检测

对西藏6个不同地、市200株牦牛源大肠杆菌进行了氨基糖苷类、氟苯尼考和磺胺类药物耐药表型和耐药基因的PCR检测。结果显示:牦牛源大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药率分别为阿米卡星96%、链霉素94.59%、新霉素19%、庆大霉素23%、卡那霉素19%,耐药基因只检出rmtB基因,检出率为100%;氟苯尼考类药物耐药率为25%,耐药基因flor基因检出率25%;磺胺类药物耐药率为32%,耐药基因sul1基因检出率7%、sul2基因检出率7%、sul3基因检出率17%;且耐药表型与耐药基因检测结果基本一致,同时显示,西藏不同地区间牦牛大肠杆菌的耐药性存在差异,人口密集和流动较大的拉萨、林芝、日喀则市耐药现象较为严重,而阿里、山南和那曲地区相对较轻。以上耐药表型和耐药基因在西藏不同市、地区均有检出,同时存在多重耐药现象。结果表明,西藏牦牛源大肠杆菌存在耐药性,应引起重视,提示西藏地区要合理用药,减轻耐药性的产生。     

规模化猪场猪大肠杆菌的耐药性及相关耐药基因检测

为了解贵州省某规模化猪场猪源大肠杆菌分离株的药物敏感性和耐药基因的存在情况,以期为进一步研究细菌耐药的分子机制和临床用药提供资料,试验采用药物敏感试验、耐药基因PCR检测、基因测序等方法.结果表明:经K-B法检测20株猪源大肠杆菌对15种药物的敏感性,环丙沙星、氨苄西林、吡哌酸和青霉素等药物的耐药性强;利用PCR扩增技...     

广西大肠杆菌对多种抗菌药物的耐药率及部分耐药基因检测

为研究广西地区大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药情况及耐药基因检出情况,采用2倍微量稀释法对实验室分离鉴定后甘油保藏的113株大肠杆菌进行头孢曲松钠、氟苯尼考等13种常见抗菌药物的药敏试验;筛选出42株对3种或3种以上药物最小抑菌浓度(MIC)≥3 200μg/mL的大肠杆菌,扩增bla_(TEM)基因、bla_(CTX-M-9)基因、sul 2基因。结果显示,细菌对头孢噻呋钠、氟苯尼考、磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林、环丙沙星、头孢噻肟钠、头孢曲松钠、左旋氧氟沙星、加替沙星的耐药率较高,分别为99.1%、99.1%、93.5%、92.9%、91.1%、89.9%、73.4%、72.5%、69.4%;对头孢他啶、磷霉素、阿米卡星、美罗培南的耐药率为56.6%、50.5%、32.7%、3.5%。在42株菌中,bla_(TEM)基因、bla_(CTX-M-9)基因、sul 2基因阳性率为19.0%、38.1%、45.2%。表明广西地区大肠杆菌对常见抗菌药物耐药情况趋于严重,耐药率呈升高趋势,以产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌耐药基因及磺胺类sul 2耐药基因检出率偏高,为临床合理用药及兽医临床大肠杆菌耐药性研究提供理论依据。     

貉源多重耐药大肠杆菌整合子的检测

为了解貉源大肠杆菌的耐药性及Ⅰ型整合子的携带情况,试验采用药敏试验对150株貉源大肠杆菌进行耐药性检测,采用PCR方法对其进行Ⅰ型整合酶intⅠ1、intⅠ2和intⅠ3和Ⅰ型整合子的检测。结果表明：150株貉源大肠杆菌对氨苄西林(AMP)、阿莫西林(AML)、头孢噻吩(KF)和四环素(TE)的耐药率均达到了80%以上;对亚胺培南(IPM)、庆大霉素(CN)、阿米卡星(AK)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OFX)和多黏菌素B(PB)的敏感率均达到了70%以上;均表现出不同程度的耐药性,耐药种数为1～19种,多重耐药情况达到92.67%(139/150),其中,6重耐药菌株的比例最大,为12.00%(18/150)。整合酶基因intⅠ1的阳性样本数量为108株,检出率为72.00%(108/150);整合酶基因intⅠ2的阳性样本数量为14株,检出率为9.33%(14/150);均未检出整合酶基因intⅠ3。Ⅰ型整合子的阳性菌株数量为51株,检出率为34.00%(51/150),且存在1个菌株中含有最多3个基因盒的情况。Ⅰ型整合子基因盒包括aadA2、dfrA5、d...     

广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药性和耐药基因检测分析

本研究目的是了解广西不同养殖模式猪源大肠杆菌的耐药情况和耐药基因流行情况,为临床合理用药治疗猪大肠杆菌病以及减缓细菌耐药性产生提供参考。采用K-B纸片法测定了180株分离自广西3种养殖模式猪源大肠杆菌的耐药情况,并通过PCR检测其携带EABLs(bla_(TEM)、bla_(CTX))、PMQR因子(qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)、磺胺类耐药基因(suL)和氟苯尼考耐药基因(floR)的情况。结果显示,大规模、中小规模和散养户养猪场的大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星的敏感率高于70%,而对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、利福平、林可霉素和复方新诺明的耐药率均高于90%。大规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星的耐药率极显著低于散养户(P<0.01),对氧氟沙星、庆大霉素和氟苯尼考的耐药率显著低于散养户(P<0.05);中小规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星、强力霉素和氟苯尼考的耐药性显著低于散养户(P<0.05);散养户大肠杆菌对环丙沙星、卡那霉素和壮观霉素的耐药率极显著高于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01),而对头孢噻肟的耐药率极显著低于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01)。大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户大肠杆菌的多重耐药指数(MARI)分别为0.62、0.63和0.68,分离自散养猪场的83.3%菌株(50株)表现为对13-23种药物的多药耐药,极显著高于大规模养猪场(50%,30株,P<0.01),显著高于中小规模养猪场(61.7%,37株,P<0.05)。在3种模式养猪场的大肠杆菌中均检测到bla_(TEM)、bla_(CTX、)qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr、ermB、suL和floR 9种耐药基因,其中bla_(TEM)和suL的阳性率高达100%,bla_(CTX)的阳性率最低,各模式猪场均低于57%。3种养殖模式之间的耐药基因阳性率相比差异显著,但与耐药表型不具有显著相关性。结果表明,3种养殖模式的猪场分离的大肠杆菌均具有严重的耐药问题,且菌株可携带多种耐药基因,表现为多重耐药,而不同养殖模式猪场分离的菌株耐药性存在显著性差异。     

贵州猪 鸡源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因调查

为调查贵州省动物源性大肠杆菌质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)流行情况,从贵州省5个地区147个规模养殖场采集猪肛门拭子、鸡泄殖腔拭子2469份,分离得到1 928株大肠杆菌,应用PCR方法和基因测序检测大肠杆菌qnrA、qnrB、qnrS、qnrD、qepA和aae(6′)Ib-c,基因的携带情况。结果表明,6种PMQR基因的总检测率为60.72%,qnrA、qnrB、qnrS、qnrD、qepA及aac(6′)Ib-cr的检出率分别为9.54%(184/1928)、12.03%(232/1928)、22.04%(425/1928)、4.36%(84/1928)、3.42%(66/1928)和30.65%(591/1928),且细菌同时携带多个基因的情况严重。     

奶牛乳房炎大肠杆菌整合子与耐药表型的相关性研究

为研究自乳房炎奶牛分离的大肠杆菌整合子携带情况与其耐药表型之间的相关性，在获得菌株对20种抗菌药物耐药谱的基础上，设计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子简并引物扩增菌株的整合酶基因，并结合内切酶限制性片段长度多态性分析，调查菌株携带的各类整合子，然后进一步扩增菌株整合子的基因盒插入区，测序分析其携带的基因盒。结果发现，80株自奶牛乳房炎病例分离的大肠杆菌中有37株检出Ⅰ类整合子（检出率46．25％），未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌中31株扩增出3种不同大小的基因盒插入区片段，插入基因盒主要是二氢叶酸还原酶基因（dfr）和氨基糖苷类抗生素耐药基因（aadA），最主要的基因盒排列为dfrA17-aadA5。分析表明，Ⅰ类整合子集中分布在耐受7种以上抗菌药物的菌株中，与菌株的多重耐药性高度相关，而菌株Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒与其耐药谱缺乏对应关系。     

鸡源大肠杆菌质粒介导的氟喹诺酮类药物耐药基因qnrA的分子检测

对2005年~2007年从豫北地区临床分离的377株鸡源大肠杆菌进行生化鉴定,MIC值测定。被测菌株对氟喹诺酮类（FQs）药物恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星均呈严重耐药,耐药率分别为94.9%、93.9%、94.9%。选取对恩诺沙星耐药（MIC>32 μg/ml）的235株大肠杆菌进行qnr基因的分子检测,结果显示仅有1株大肠杆菌（MIC=128 μg/ml）呈qnr基因阳性,经测序分析该基因命名为qnrA。     

河南省部分规模化奶牛场奶牛乳房炎源大肠杆菌耐药性分析与耐药基因检测

为了解规模化奶牛场乳房炎源大肠杆菌耐药现状和耐药基因分布情况,试验对采自河南省部分规模化奶牛场感染乳房炎奶牛的852份乳汁样本进行大肠杆菌的分离鉴定与16S rRNA基因PCR鉴定,对分离的大肠杆菌菌株进行药敏试验及耐药基因检测。结果表明：共分离鉴定224株大肠杆菌,分离率为26.29%。分离菌株对11种抗生素均有不同程度耐药性,其中对恩诺沙星、氟苯尼考、环丙沙星、四环素、阿莫西林、阿米卡星耐药比较严重,耐药率为63.39%～82.14%;对头孢他啶、头孢曲松耐药率相对较低,分别为22.32%、27.67%;对亚胺培南最敏感,耐药率为0。耐3种及以上抗生素菌株有193株,占86.16%。对不同奶牛场的85株大肠杆菌分离株进行耐药基因检测,共检测到11种耐药基因,未检出耐药基因tetM、bla_VIM和bla_NDM。酰胺醇类耐药基因floR携带率最高(为61.18%),喹诺酮类耐药基因oqxB(42.35%)、qnrS(44.71%)携带率和四环素类耐药基因tetA(30.59%)、tetB(38.82%)携带率相对较高,多重耐药基因检出率为51...     

大肠杆菌耐药基因定位及耐药质粒消除

对采集的9株野生型大肠杆菌在药敏试验的基础上,进行了耐药基因定位。结果表明,4个菌株的氨苄青霉素耐药基因位于质粒上,不同畜群来源菌株之间耐氨苄青霉素质粒存在差异。用中草药艾叶的乙醇提取物和蒸馏提取物对大肠杆菌庆大霉素耐药性及耐药质粒进行了消除试验,结果艾叶乙醇提取物的消除率最高可达69.4%。     

水禽源大肠杆菌耐药基因和质粒的相关性研究

为了探究水禽源大肠杆菌的耐药性、耐药基因携带情况及其与质粒的相关性,试验用纸片扩散法检测62株水禽源大肠杆菌对14种抗菌药物的耐药性,用PCR方法对13种耐药基因和18种质粒进行扩增,并对质粒检出率较高的阳性菌株进行耐药基因的检测。结果表明：62株水禽源大肠杆菌对阿莫西林、美洛西林和链霉素的耐药性较高,耐药率分别为88.7%、74.2%和51.6%;对丁胺卡那和头孢哌酮耐药性较低,耐药率分别为3.2%和1.6%。aac(6′)-Ib、TEM、qnrD及qnrS基因的检出率较高,分别为66.1%、59.7%、46.8%和29.0%;共检出6种质粒IncFIA、IncFIB、IncY、IncI1、IncHI2、IncN,其中质粒IncFIB的检出率最高,为80.6%。IncFIB阳性菌株的aac(6′)-Ib基因检出率为72.0%,qnrS基因检出率为22.0%。说明水禽源大肠杆菌耐药性高,常见耐药基因以aac(6′)-Ib为主,常见质粒以IncFIB为主,质粒IncFIB介导的aac(6′)-Ib基因传播较为流行。     

广西某地区猪源大肠杆菌耐药性及部分菌株耐药基因调查

试验旨在探究广西某地区猪源大肠杆菌的耐药性及部分菌株所含耐药基因情况,为预防及治疗动物性大肠杆菌类疾病提供参考。采用麦康凯琼脂培养基及伊红美蓝琼脂培养基初步鉴定、显微镜镜检、分子生物学16S rRNA鉴定、药物敏感性二倍肉汤微量稀释法等方法进行大肠杆菌的分离鉴定,并结合PCR相关技术对部分菌株的三十余种耐药基因进行检测。结果显示,从广西某地区采集的猪源病料中共分离得到65株猪源大肠杆菌,其均为多重耐药大肠杆菌且多集中于六重耐药与七重耐药。按所耐抗菌药物的种类分析发现其对β-内酰胺类、磺胺类、大环内酯类药物具有较高耐药性,耐药率分别98.46%、90.77%及84.62%,进一步分析发现其主要是对头孢噻呋钠、阿莫西林、磺胺间甲氧嘧啶、阿奇霉素等抗菌药物具有较高耐药性,对美罗培南、阿米卡星、黏杆菌素较为敏感。对部分菌株所含耐药基因进行整理发现,其多含有四环素类（tetA、tetM）、β-内酰胺类（CTX-m-u）及磺胺类（Sul2）耐药基因。综上所述发现广西地区猪源大肠杆菌耐药性情况较为严重,所含耐药基因也相对较多,因此在实际生产中需采用联合用药等相关措施进行疾病治疗以达到快速高效治疗疾病的目的。