拮抗细菌对土传病原菌的作用机理

本文从抗生、竞争、寄生和诱导抗性四个方面系统介绍了根围拮抗细菌对病原真菌和病原细菌的生防机制，及在生物防治中的应用前景。     

人参病原菌拮抗细菌的分离筛选与鉴定

为明确土壤拮抗细菌对人参常见病原菌的生防价值,从吉林省抚松县人参根际土壤中分离、纯化获得113株细菌,采用平板对峙法测定菌株的拮抗能力,通过温室盆栽试验研究其在土壤及人参根部的定殖规律,并通过形态、培养特征及16S r DNA序列分析进行分类鉴定。对峙试验结果表明,2株细菌对供试人参病原菌具有良好的拮抗广谱性,且多次验证其抑菌效果稳定。定殖研究结果表明,活性菌株SZ-56与SZ-60的定殖能力均达到显著水平,在土壤中的最大定殖菌量分别为每克土7.51×106CFU和7.28×106CFU,30 d后定殖菌量仍保持在105CFU;21 d后在人参根部的定殖菌量仍保持在每克根105CFU水平。根据形态、培养特征、生理生化指标和16S r DNA序列分析,确定SZ-56为内生芽胞杆菌Bacillus endophyticus,SZ-60为解淀粉芽胞杆菌B.amyloliquefaciens。     

肿节风炭疽病拮抗细菌的筛选与鉴定

为筛选出对肿节风炭疽病菌Colletotrichum dematium具有拮抗作用的细菌,开发新型生物制剂,本试验分别采用组织分离法和稀释平板法,从广西药用植物园科研基地健康肿节风植株的不同组织和根系土壤分离、纯化获得49株细菌。平板对峙试验结果表明,来自土壤的zjt-9、zjt-4,来自根系的zgs21及叶片的zyy13对肿节风炭疽病菌具有较强的拮抗作用,其中作用最强的是zjt-9。抗菌谱测定结果表明, zjt-9、zjt-4和zyy13对供试的18种病原真菌均有明显的拮抗效果,拮抗作用最强的是zjt-9,平均抑菌宽度最高达19.10 mm;经显微镜观察,拮抗细菌可造成肿节风炭疽病病原菌菌丝膨大、畸形、断裂。通过形态学特性和16S rDNA鉴定,zjt-9菌株为甲基营养型芽胞杆菌Bacillus methylotrophicus。     

关防风立枯病病原菌根际拮抗细菌筛选与鉴定

为筛选出对立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kühn具有优良防效的拮抗菌株。本研究从关防风根际土壤中分离纯化出156株细菌,采用平板对峙法测定菌株SC-32和SC-127对立枯丝核菌均有良好拮抗效果,且兼具广谱抑菌能力;抗生素标记法测定菌株SC-32和SC-127接种35 d后在土壤中含菌量仍能保持2.93×10⁷和7.83×10⁶ CFU/g;通过盆栽试验研究结果表明,菌株SC-32和SC-127对关防风立枯病的防治效果为60.53%和65.89%,高于菌剂和农药处理。通过形态学、生理生化特征、16S rDNA基因序列进行分类学鉴定确定菌株SC-32和SC-127均为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。     

枸杞根腐病病原菌鉴定及其拮抗菌的筛选

为了针对根腐病实施有效的生物防治,分离鉴定枸杞根腐病病原菌及其拮抗菌,采用组织分离法获得腐根上的病原菌,结合形态学与分子生物学特征鉴定病原菌;利用稀释涂布、滤纸片法和共培养法从健康根际土壤筛选拮抗细菌,通过形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列分析对拮抗效果较好的菌株进行鉴定。结果表明：从枸杞根腐病分离得到腐皮镰刀菌（Fusarium solani）和尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）两种主要致病菌,从健康枸杞根际土壤中分离获得12株对两种镰刀菌具有拮抗作用的细菌,其中J7-3、J7-8、J7-9和J10-8对腐皮镰刀菌的抑菌率均在80%以上,J7-3和J10-8对尖孢镰刀菌的抑菌率均在70%以上。菌株J7-3和J10-8对根腐病病原菌的抑菌作用较好,分别鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,其中J10-8的拮抗作用和溶菌效果最好,可作为研发微生物菌剂的菌种资源。     

辣椒内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

对健康辣椒植株体内的内生细菌及拮抗菌进行了分离筛选。结果表明 ,不同品种、部位及种植地 ,内生细菌的数量有所不同 ,品种间内生细菌的数量变化为 2 83× 1 0 3 ～ 1 346×1 0 4cfu/g(FW) ;各品种以叶片中内生细菌的数量最多 ,其次为根 ,再次为茎 ,果最少 ;不同种植地中 ,前作为水稻田种植辣椒叶片中内生细菌的数量比旱地种植的多 ,而根、茎、果中内生细菌的数量正相反。拮抗、防病测定表明 ,1 0 8株辣椒内生细菌中 ,有 2 8 7%的菌株对香蕉枯萎菌和黄瓜枯萎菌有拮抗作用 ;来自辣椒叶片和茎杆内的BS 2和BS 1两菌株 ,对 1 3种植物病原真菌有较强和稳定的拮抗作用 ,其中对辣椒炭疽病有 57 34%～ 94 0 8%的防病效果 ,并可以在辣椒体内定殖。经鉴定该两菌株为枯草芽孢杆菌。     

油茶根腐病拮抗内生细菌的筛选及鉴定

为探讨防治油茶根腐病的高效拮抗菌的拮抗机制,采用研磨法从健康油茶根、茎、叶、果等组织中分离内生菌,通过平板对峙试验和抑菌谱检测试验筛选对油茶根腐病菌具有高效拮抗作用的内生菌,并进行形态观察、生理生化指标测定和16S rRNA序列分析.结果显示:从油茶中分离获得内生细菌75株,对油茶根腐病菌有拮抗作用的菌株18株,其中抑菌圈半径在5 mm以上的6株.这6株细菌的发酵液对油茶根腐病菌等6种供试病原真菌均有拮抗作用,其中菌株R6的抑菌效果最好,对各病原菌的抑菌圈半径均在10 mm以上.根据对R6的形态观察和生理生化指标测定,以及16S rRNA序列分析结果,初步鉴定其为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.     

致病疫霉拮抗细菌筛选及J-28菌株鉴定

为明确从马铃薯根际土壤中分离获得的细菌对致病疫霉的抑制作用,采用平板划线分离法分离马铃薯根际细菌,以对峙培养法和打孔法分别测试细菌菌株、菌液及无菌体发酵液对致病疫霉菌丝生长的抑制作用,并对其中最具优势的菌株通过培养特征、形态、生理生化特性及16S rDNA序列进行鉴定。结果显示,在分离的60株细菌中,有16株细菌对致病疫霉有明显拮抗作用,有6株抑菌率达60%以上。其中,J-5和J-26的抑菌率最高(90.24%和91.54%),其次为J-28,抑菌率87.80%;菌液以J-5和J-33的抑菌率最高(95.34%和92.93%);J-28菌液抑菌率为81.36%:无菌体发酵液以J-28和J-26的抑菌率最高(82.92%和75.60%)。综合评价以J-28菌株的抑菌作用最为稳定。经鉴定J-28菌株为一株巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。该菌株在马铃薯晚疫病防治中有较大潜力。     

茄科植物内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

从番茄和辣椒植株中共分离到9株对植物病原真菌具有拈抗作用的内生细菌。其中，来自樱桃番茄的内生细菌株系BS-1和湘研辣椒的内生细菌株系BS-4对辣椒根腐病菌等具有较强的拈抗作用，两者在植株体内均可以定殖。BS-1和BS-4均属于芽孢杆菌。     

丹参根腐病拮抗细菌筛选、鉴定及生防机理研究

腐皮镰刀菌Fusarium solani造成的根腐病是丹参主要土传病害之一.本研究采用稀释涂布平板法从丹参植株中分离筛选得到一株对根腐病具有良好防治效果的内生拮抗菌株DS-R5,经形态学和分子生物学鉴定为多粘类芽胞杆菌Paenibacillus polymyxa.通过孢子萌发试验、光学显微镜观察、扫描电镜和透射电镜观察...     

黄瓜褐斑病菌拮抗细菌的筛选及鉴定

从全国14个地区多种作物田采集土样56份,经室内分离、纯化及筛选,获得了对黄瓜褐斑病菌Corynespora cassiicola具有拮抗作用的16株细菌,其中拮抗作用最强的为菌株SDYT-79,其对黄瓜褐斑病菌的抑菌带宽度达37mm。室内盆栽试验结果显示,菌株SDYT-79对黄瓜褐斑病的防效达58.4%。孢子萌发试验表明,该菌株对黄瓜褐斑病菌孢子萌发有较强的抑制作用,其发酵无菌滤液及10倍稀释液对孢子萌发的抑制率均达100%。黄瓜褐斑病菌孢子在100倍、1000倍稀释无菌滤液中虽能萌发,但芽管形态异常。抑菌谱试验表明,该菌株对供试的11种植物病原真菌均有较好的抑菌作用,抑菌带在19.9～41.9mm之间。生理生化鉴定及16S rDNA序列测定结果表明该菌株为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis。     

生物防治水仙叶大褐斑病拮抗菌株的鉴定

从福建漳州湖乡水仙大田水仙根际分离并筛选到对水仙叶大褐斑病有明显拮抗作用的菌株ＣＳ５、ＣＳ５１、ＣＳ１２１。通过个体形态、培养特征、生理生化特性研究,将它们分别鉴定为拮草芽孢杆菌（ＣＳ５）、蜡质芽孢杆菌（ＣＳ５１）,荧光假单孢菌（ＣＳ１２１）、３朱细胞的ＤＮＡ Ｇ＋Ｃ摩尔百分比分别为４３．７％、３９．１％、和６６．８％。     

烟草叶围细菌Tpb55菌株的鉴定及其抑菌活性

Tpb55是从烟草叶面生境中分离获得的一株拮抗细菌,本研究从形态、生理生化、16S-23S rDNA转录间隔区PCR（ITS-PCR）分析,初步明确了该菌株的分类地位。光学显微镜下观察到Tpb55菌体为杆状,革兰氏染色均匀,鞭毛周生,产芽孢,各项生理生化测试指标与枯草芽孢杆菌菌株表现一致;16S-23S rDNA ITS-PCR分析结果表明,Tpb55与枯草芽孢杆菌同源性达到99.75%。Tpb55代谢产物对7种病原真菌和3种病原细菌均有不同程度的抑菌作用,表明该菌株代谢产物具有较高的抑菌活性和较广的抑菌谱。进一步研究发现,该菌株代谢产物对有机溶剂、蛋白酶、热和pH值都有很高的稳定性,是具较好开发潜能的生防菌株。     

西瓜枯萎菌拮抗细菌的筛选、鉴定及防效测定

从内蒙古、新疆、安徽、河南、江苏、江西6省的西瓜、黄瓜和茄子3种作物根际土壤和病健组织中,共获得样本64份,分离得到细菌1050株。室内抑菌活性测定结果表明：9株细菌分离物对西瓜枯萎病菌Fusariumoxysporumf.sp.niveum、甘蓝黑斑病菌Alternaria brassicicola、辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici和番茄灰霉病菌Botrytis cinerea均具有很强的拮抗作用,其中菌株NBT-15和PL-82对西瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制作用比较明显,抑制率分别为60.5%和55.3%。盆栽防病试验结果表明：NBT-15和PL-82对西瓜枯萎病的防治效果分别为80.4%和75.6%。形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析结果确定菌株NBT-15为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,PL-82为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。     

黄瓜土传病害拮抗细菌的筛选、鉴定及生防特性研究

为了有效防治黄瓜的土传病害,本文从黄瓜根际土壤中分离得到256株细菌,利用平板对峙试验筛选到一株拮抗菌ZM-1。通过形态、生理生化和分子生物学方法对菌株进行鉴定,测定菌株产生的抑菌物质。通过正交实验法与单因素法对菌株进行发酵优化,并通过盆栽试验测定菌株防病能力。结果表明,菌株ZM-1为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa,该菌对黄瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cucumebrium和黄瓜疫病菌Phytophthora drechsleri的抑制率分别为62.80%和65.58%。该菌株可以产生纤维素酶、铁载体等多种抑菌物质。经过最佳发酵优化,菌株发酵液菌含量可达到1×10¹⁰ cfu/mL以上。最适发酵培养基配方为蔗糖5 g/L、胰蛋白胨10 g/L、K₂HPO₄ 10 g/L,发酵条件温度25℃、pH 7.5、时间48 h、接种量2%。盆栽试验表明,菌株ZM-1对黄瓜枯萎病和黄瓜疫病的防效分别为53.97%和51.11%。本研究表明拮抗菌ZM-1在防治黄瓜土传病害方面具有...     

梨炭疽菌拮抗细菌CL01的鉴定及其抗菌活性

为挖掘可用于防治梨炭疽病的生防资源,从江苏句容梨园根际土壤中分离筛选到1株对梨炭疽菌具有较强拮抗效果的菌株CL01.基于菌落菌体形态、生理生化特征、16S rDNA和rpoB基因序列,该菌株被鉴定为奥托威类芽胞杆菌Paenibacillus ottowii.CL01能够抑制梨炭疽菌菌丝的生长,受抑制的真菌菌落边缘菌丝变...     

黄瓜根际细菌J352对大豆根腐病菌的作用

J352是从黄瓜根际筛选到的一株对病原真菌具有拮抗作用的细菌。室内培养结果表明,该菌对大豆根腐镰刀病菌有较强的抑制效果。J352发酵液对2种病原真菌孢子萌发有较高的抑制率;细菌与病原菌共培养后发现真菌菌丝和孢子发生畸变,菌丝和孢子内部均发生原生质体凝聚并出现空洞。与其它供试病原真菌的对峙培养发现,对烟草赤星病菌抑制作用最明显,抑菌率达85.5%。