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1.
CTAB法是一种广泛用于从染病植物中提取总核酸,并用于后续相关病原物PCR检测的核酸提取法,已普遍运用于DNA病毒、植原体、细菌、真菌侵染植物的总DNA提取和病原检测。本文尝试将CTAB法用于一种由RNA病毒(烟草丛顶病毒)引起的烟草丛顶病染病组织总核酸的提取,以总核酸进行烟草丛顶病毒的RT-PCR检测,并与常规RNA病毒核酸提取法——Trizol法作比较。结果表明CTAB法和Trizol法提取的核酸用于烟草丛顶病毒RT-PCR检测时,均能扩增到目的条带,检测结果一致。在对复合侵染材料进行检测时发现,CTAB法提取的染病植物组织总核酸既包括DNA也包含RNA,有利于对DNA和RNA病原物同时进行检测;CTAB法所用试剂较Trizol法便宜,毒性小,且提取的核酸量较多、保存时间较长。因此CTAB法是一种高效、简便、经济的从烟草丛顶病染病组织中提取烟草丛顶病毒RNA的方法。 相似文献
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适于cDNA-AFLP的黄瓜幼叶总RNA快速高效提取方法 总被引:8,自引:0,他引:8
为了快速高效地提取黄瓜幼叶总RNA,满足于cDNA-AFLP实验的要求。对Trizol试剂提取总RNA的方法进行了改进,所提RNA经琼脂糖电泳检测,其28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,每0.1g幼叶可获得RNA 100~150μg,产率高;经反转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足反转录和cDNA-AFLP对RNA质量和数量的要求。 相似文献
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为找到较好的白背飞虱RNA提取方法用于大规模带毒率检测、SRBSDV的早期监测及科学防控提供参考,采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA,进行检测比较其提取速率和稳定性。结果表明:采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA浓度分别为113.08ng/μL、222.43ng/μL、57.68ng/μL、102.16ng/μL和31.06ng/μL,改良Trizol法和改良CTAB-LiCl法提取的RNA纯度较高。5种方法提取的RNA均能用于SRBSDV的检测,其中改良Trizol法RT-PCR扩增的灵敏度最高,稀释梯度为10-4,NaOH粗提法灵敏度最差,稀释梯度仅为10-1,其余3种均能达到10-3。改良Trizol法提取的虫体RNA较完整且扩增效果稳定,但试剂价格较昂贵,不适合做大量样品提取;NaOH粗提法的灵敏度虽相对较低,但由于操作简便,经济快速,更适合用于大量样品的检测。 相似文献
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分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测.结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高.3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260nm/D280nm在1.83 ~2.03之间.以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验. 相似文献
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为寻找高效快速提取植物总RNA的检测方法,以白肋烟叶片为材料,用Trizol试剂盒提取总RNA。依据黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的外壳蛋白保守序列设计特异性引物,进行RT-PCR检测,从感病叶片中分别扩增出326bp、392bp的目的片断,而对照叶片中无此扩增带。将PCR产物连接pGEM-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,得到了含有目的片断的重组子。序列分析表明,与Gene Bank中报道的这两种病毒核苷酸序列进行比较,同源性均达到96%以上。从而证明Trizol试剂盒可以在1 h内提取到纯度高、含量高、完整性好的总RNA,快速、简便、可靠。 相似文献
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水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA提取方法的探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立水稻抑制差减杂交技术中叶片总RNA最佳的提取方法,以5叶期水稻品种合江19为提取总RNA的材料,对Trizol法和两种改良Trizol法提取的水稻叶片总RNA纯度和完整性进行了比较研究。基因定量仪检测结果表明,Trizol法、改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ提取的RNAOD(260/280)分别为1.529、1.755和1.991;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,改良Trizol法Ⅱ提取的RNA具有28s、18s和5s3条清晰的条带,且无降解,而其他两种方法提取的RNA质量较差,均有降解。该研究结果说明改良Trizol法Ⅱ提取的RNA完整性好和纯度较高,该方法优于Trizol法。 相似文献
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桃不同发育时期叶片总RNA提取方法的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
为了从桃叶片中提取到高质量的RNA,以进行反转录、RT-PCR等后续分子生物学试验,选取了改良硼砂-CTAB法、改良CTAB法、改良SDS-苯酚法、试剂盒法、Trizol法,以及在试验中探索的改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ对桃不同发育时期的叶片总RNA进行提取,测定RNA样品的OD值,结合琼脂糖凝胶电泳检测总RNA样品的质量。结果表明,这些方法虽然都能获得桃叶片总RNA,但是或存在不同程度的DNA残留,或有蛋白、多糖等杂质污染,或降解严重;而改良的Trizol法提取总RNA的完整性和纯度较好;针对生长期和衰老期叶片的不同生理特性可分别采用改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ,提取的总RNA反转录后,通过RT-PCR检测,条带明亮清晰,与预期目的基因片段大小一致,说明这2种方法提取的总RNA能用于后期的分子生物学试验。 相似文献
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桃总RNA提取方法研究 总被引:7,自引:1,他引:6
以桃叶片为试材,比较SDS-苯酚法、优化SDS-苯酚法、LiCl沉淀法、凯基Trizol试剂法的提取效果及叶片存放时间对RNA质量的影响.结果表明,凯基Trizol试剂法效果较好,产量较高,提取周期最短,RT-PCR得到的条带与目的片段大小一致;而LiCl沉淀法提取的RNA产量较少;SDS-苯酚法产量高,但有较多DNA残留;优化SDS-苯酚法的DNA残留较少.不同存放时间的叶片提取效果表明,60 d以内提取的RNA产量和质量都较高,而超过60 d,随着存放时间的延长,RNA产量减少,质量变差,说明低温存放较长时间对RNA提取有一定的影响. 相似文献
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番茄叶片总RNA提取方法的比较 总被引:9,自引:1,他引:8
番茄叶片富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,用普通方法提取番茄叶片总RNA时很难将其去除,试验比较研究了RNA plant Reagent、UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒和改进Trizol三种方法的提取效果。结果表明,改进的Trizol法能从番茄叶片中提取纯度较高的RNA,凝胶电泳显示条带清晰完整,分光光度计检测A260/A280比值为1.88。用该方法提取的番茄叶片总RNA可以用于逆转录、RT-PCR、Northern blot等分子生物学研究。 相似文献
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[目的]筛选出适合于c DNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA的提取方法。[方法]采用Trizol改良法和EASY Spin植物快速提取试剂盒法(简称试剂盒法)对猪苓菌丝及菌核的总RNA进行提取。[结果]经紫外分光光度计对所得总RNA的均一性及1%琼脂糖凝胶电泳对所得总RNA的完整性检测后发现,2种方法均可提出完整的总RNA,试剂盒法相较于Trizol改良法其所提取的总RNA质量和纯度都较好,但Trizol改良法所提取的总RNA产率比较高。[结论]LD-PCR成功合成了猪苓菌核和菌丝体的c DNA产物,呈弥散状分布在1 0005 000 bp和7502 500 bp,满足c DNA建库的要求。 相似文献
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山葡萄总RNA提取方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
以山葡萄成熟果皮及叶片为材料,对改良CTAB法,SDS法和Trizol法3种不同的总RNA提取方法进行了比较。结果表明,SDS法和Trizol法提取的总RNA均有拖带现象,有部分降解,Trizol法提取的总RNA中有DNA的污染;改良CTAB法提取山葡萄叶片和果皮的总RNA带形完整,28SrRNA和18SrRNA的荧光亮度接近2:1,A260/280值为1.8~2.0,该方法提取的总RNA纯度和提取量最高,提取出的总RNA可用于进行RT-PCR、构建cDNA文库等分子生物学的研究。 相似文献
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猪肝脏总RNA快速提取方法 总被引:1,自引:0,他引:1
采用CTAB法和改良的Trizol法提取贵州从江香猪(Sus scrofa domestica)新鲜肝脏的总RNA,通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测RNA质量。结果表明,改良的Trizol法提取的总RNA的纯度高,完整性好,优于CTAB法。且改良的Trizol法提取的猪肝脏总RNA可用于RT-PCR等后续分子生物学操作。 相似文献
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针对罗汉果果实富含多糖和多酚类物质的特点,以广西罗汉果代表种质青皮果种的果实为材料,比较了改良Trizol法、改良异硫氰酸胍法、改良CTAB法和常规Trizol法4种不同的总RNA提取方法的提取效果。结果表明,改良Trizol法所提取的RNA呈现28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3条清晰的谱带,且28S条带宽度接近18S的2倍,纯度高(D260/D280=201;D260/D230=202),完整性好(RIN=950),得率为(26000±1947) μg·g-1。RT\|PCR结果进一步表明,改良Trizol法提取的RNA完全能够用于后续的分子生物学研究。 相似文献
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[目的]为从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。[方法]采用Trizol法、改良Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。[结果]改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象;而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。[结论]传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取;改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。 相似文献
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改良Trizol法提取香蕉叶片总RNA 总被引:9,自引:0,他引:9
针对香蕉组织中多糖、多酚等次生物质含量高的特点,采用改良Trizol法,成功地从香蕉叶片中提取了总RNA.所提取的总RNA A260/A280和A260/A230值分别为1.91和2.10.电泳检测显示28 s、18 s条带完整清晰,以此RNA为模板进行RT-PCR,结果成功得到目标特异条带.试验结果表明:改良Trizol法具有方便快捷、完整性好、受多糖多酚影响较少以及无DNA和蛋白质污染等优点,对具有香蕉叶片类似成分的其他作物的RNA提取具有一定的借鉴意义. 相似文献