东方山羊豆引种研究初报

1999年1月从哈萨克斯坦共和国引进多年生优良豆科牧草东方山羊豆分别在不同地点进行了多点试种，并对其播种密度、播种深度、产草量、单株种子平均产量、营养成分、适口性进行了研究。     

有希望的草种—东方山羊豆

近两年来俄罗斯科学工作者纷纷发表文章 ,向世人介绍东方山羊豆。该植物比起紫花苜蓿利用年限长、蛋白质含量高、春季返青后长势快 ,是一种待开发利用的很有前途的新作物。该植物属山羊豆属(ＧａｌｅｇａＬ ) ,该属植物有 8个种 ,原苏联有 2个种 ,其中东方山羊豆有较好的饲用价值。分布于原苏联的北高加索、达格斯坦自治共和国、格鲁吉亚全境、亚米尼亚的北部、阿塞拜疆的西南部和罕见于克里米亚地区。生于海拔为 3 0 5～ 1 82 0米的森林草地带。从 1 93 2年全苏饲料研究所开始引种试验。该所的西米诺瓦 (Ｃｕｕｕｈｏｌａ)做过 1 3年 (1 9…     

东方山羊豆引种研究初报

1999年1月从哈萨克斯坦共和国引进多年生优良豆科牧草东言山羊豆分别在不同地点进行了多点试种，并对其播种密度、播种深度、产草量、单株种子平衡产量、营养成分、适口性进行了研究。     

东方山羊豆的生物学特性与栽培技术

根据有关文献资料和笔者的试验观测 ,概述了东方山羊豆的生物生态学特性、饲用价值及栽培利用技术     

东方山羊豆在俄罗斯的研究和应用

东方山羊豆Galega orientalis是近年来东欧和俄罗斯等国家广泛推广的豆科多年生饲用植物,因饲用价值高、抗逆性强、高产而倍受关注。简要介绍了东方山羊豆的栽培历史、植物学特点、生物学特性、青草和干草产量的形成、高产栽培的主要技术原理、播种方法和播种量与产量、化肥计量施用效果,用东方山羊豆与传统三叶草Trifoliumsp.—猫尾草Phloum pratense混播育肥犊牛,效果提高21.8%。     

东方山羊豆蔗糖转运蛋白基因克隆及表达载体构建

根据已知的EST序列,采用RACE技术克隆了东方山羊豆蔗糖转运蛋白基因全长eDNA,命名为GoSUT(GenBank accession No.HM802255).序列分析结果表明,该cDNA全长1883bp,开放阅读框1545bp,编码514个氨基酸.应用生物信息学软件对编码蛋白的理化性质、结构和功能进行了分析和预测...     

优良豆科牧草--东方山羊豆的研究与利用

开发新豆科牧草资源不仅是改善饲草料品质，提高草地畜牧业生产力的基础，还可为我国实施退耕还林还草，恢复生态环境建设的战略部署提供草本植物物种。东方山羊豆是自1980年后，在前苏联、北欧等国家得到重视的一种新兴豆科牧草，它具有产量高，植株蛋白质含量高，生态适应性强，草地持续稳定性好的特点。本文综述了国内外对该草种的产量及饲用价值评定，回顾了影响山羊豆草地建植和生长的因素，提出了在我国西北地区开展东方山羊豆研究和利用推广的潜力和前景。     

东方山羊豆在陇东半干旱雨养农区的引种适应性

东方山羊豆Galega orientalis是近年来东欧和俄罗斯等国家广泛推广的豆科多年生饲用植物,因饲用价值高、抗逆性强、产量高而受到广泛关注.在陇东半干旱雨养农区引种东方山羊豆,5月中旬初花,下旬盛花,6月下旬种子成熟.生长第3年成熟植株自然高度128.87 cm,鲜草产量54 146.7 kg/hm2,干草产量14 286.7 kg/hm2,收获种子211.4 kg/hm2.结果表明,东方山羊豆在当地适应性好,可进行推广栽培.     

东方山羊豆GoMIPS双元表达载体的构建及鉴定

 从东方山羊豆（Galega.orientalisL.）中克隆出的GoMIPS（肌醇-1-磷酸合成酶）基因序列设计合成1对带有NcoI和SpeI酶切位点的引物,用RT-PCR方法从东方山羊豆幼嫩叶片总RNA中扩增出GoMIPS基因的cDNA序列,经纯化后,克隆至pMD19-T载体上,构建pMD-MIPS的中间载体,测序鉴定。然后用NcoI和SpeI限制性酶对含有目的基因的pMD-MIPS和pCAMBIA1302空载体进行双酶切,通过酶切鉴定和测序分析表明,已成功构建了CaMV35S启动子驱动GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1302-MIPS。     

紫花苜蓿MsMYB2基因的克隆及转化

为获得MsMYB2基因过量表达的转基因拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株,利用PCR技术在紫花苜蓿(Medicago sativa)中克隆出MYB2基因并命名为MsMYB2,MsMYB2基因编码区全长834 bp,编码1条长度为278个氨基酸的多肽链。通过DNA重组技术将其与pBI121连接,成功构建了植物表达载体pBI-MsMYB2。通过花序侵染法获得具有卡那霉素抗性的转基因拟南芥植株,并通过PCR和RT-PCR对目的基因进行检测,结果证明目的基因已整合到拟南芥基因组中并且可以表达,成功获得了MsMYB2基因表达的拟南芥转基因植株。     

紫花苜蓿MsZIP基因RNAi表达载体的构建及苜蓿转化

根据已经得到的MsZIP基因序列(GenBank序列号:HQ911778),设计两对含有酶切位点的引物ZIPF1/ZIPF2和ZIPR1/ZIPR2,合成用于构建干扰载体的正反义片段。将正反义片段插入到载体pART27中,构建成为含有发夹结构的RNAi干扰载体pART-F-R。采用农杆菌介导的方法,将该干扰载体成功转化到苜蓿中,得到9株抗性苗,选取其中的3株进行PCR鉴定,结果表明成功得到转基因苜蓿。     

紫花苜蓿柠檬酸合成酶基因的克隆及对烟草的转化

柠檬酸合成酶是调节植物体内有机酸的活性酶之一,增加植物体内的柠檬酸可以提高植物对土壤中磷的吸收以及抗铝毒性。通过从紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中克隆柠檬酸合成酶基因(MsCS),以期获得该基因全长,并为将来研究紫花苜蓿耐铝性以及对磷的吸收方向提供基础。首先利用cDNA末端快速扩增方法(RACE),克隆获得MsCS的cDNA全序列,然后利用pBI121构建植物超表达载体pBI-MsCS,通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)。结果显示:该基因序列全长为2031 bp,开放阅读框1551 bp,编码517个氨基酸,与其他物种的柠檬酸合成酶具有高度的同源性。获得17株卡那抗性植株。经PCR检测有6株为阳性植株,初步表明该基因已整合到烟草的基因组中。     

紫花苜蓿MsZIP基因超表达载体的构建及烟草转化

根据已经克隆得到的MsZIP基因(GenBank序列号:HQ911778),合成编码区cDNA,构建植物超表达载体PBI-MsZIP.将MsZIP基因插入到含有启动子35S和终止子nos的载体PBI121中,酶切鉴定表明,目的基因已经正确的插入到载体中,超表达载体构建成功.采用CaCl2冻融法将其转入农杆菌中,然后采用农杆菌介导的方法转化烟草(Nicotiana tobacum),共得到12株抗性烟草苗,选取其中长势良好的3株进行分析.结果表明:转基因烟草的PCR,RT-PCR和Southern-blot检测均得到了与目的条带大小一致的片段,说明已经成功获得了能够表达MsZIP基因的转基因烟草     

紫花苜蓿根系生物量

本文综述了紫花苜蓿(Medicagosativa L.)根系生物量的影响因子和若干自然区域内的紫花苜蓿根系生物量。影响紫花苜蓿根系生物量的影响因子包括土层厚度、地下水位、土壤特性、淹水、耕作、施肥、灌溉、刈割、生长调节剂、混播、植株密度、品种和生长年限。土壤障碍(酸、碱、盐、粘重和紧实)越重、土层越薄、地下水位越高,紫花苜蓿根系生物量越小。淹水降低紫花苜蓿根系生物量。深耕可增加紫花苜蓿根系生物量,播种当年效果尤为明显。施肥可增加紫花苜蓿根系生物量。灌溉可增加紫花苜蓿根系生物量,灌溉模式及灌溉量适当时可获得相对较大的根系生物量。刈割频率越高,紫花苜蓿根系生物量越低。添加生长调节剂可增加紫花苜蓿根系生物量。混播降低紫花苜蓿根系生物量。在一定范围内,紫花苜蓿根系生物量随着植株密度的增加而增加。不同品种(材料)的根系生物量存在一定差异。生长年限越长,紫花苜蓿根系生物量越大。在每个生长季内紫花苜蓿根系生物量呈逐渐提高趋势,但在返青之初和每次刈割之后出现降低,3～4周后恢复至刈割前水平,其后则继续增加。不同自然区域紫花苜蓿的根系生物量差异较大。在相对正常的栽培管理条件下,生长1年紫花苜蓿的根系生物量约在2～7t.hm-2之间,生长2年者约为3～9 t.hm-2,生长3～5年者约为4～21 t.hm-2。     

苜蓿愈伤组织原生质体游离与培养

对阿尔冈金苜蓿(Medicago sativa L. cv. Algonguin)原生质体游离和培养的最佳条件进行研究,建立其细胞融合原生质体杂交体系。以下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究了愈伤组织继代培养时间、酶液组合、酶解时间及酶液渗透压对原生质体游离的影响,并探讨了愈伤组织原生质体在KM8P培养基上的分裂情况。结果表明:继代12d的愈伤组织游离性最好,最佳酶液组合为2%纤维素酶+0.5%果胶+1%半纤维素酶、最佳酶解时间为12h、最佳酶液渗透压为0.55mol/L;最适宜培养苜蓿愈伤组织原生质体的培养基为KM8P+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LNAA。     

紫花苜蓿DExD/H box RNA解旋酶基因的克隆与分析

基于紫花苜蓿(Medicago sativaL.)盐胁迫抑制消减杂交文库中的一条EST序列,使用RACE技术克隆得到一条1678 bp的cDNA序列.核酸序列分析表明该cDNA序列包含一个1281 bp的最大开放阅读框,编码426个氨基酸,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)RNA解旋酶RH15和RH56的氨基酸序列相似性在90％以上,将该基因命名为MsRH(GenBank序列号:JX508648).对此基因编码蛋白进行结构域预测表明其含有明显的DEXDc和HELICc结构域,预测其为DExD/H box RNA解旋酶.洋葱(Allium cepa)表皮细胞亚细胞定位分析表明MsRH定位于细胞核.为进一步研究此基因的功能,构建了MsRH基因的超表达载体pBI-MsRH,使用农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tobacum),筛选得到5株具有卡那霉素抗性再生烟草植株.PCR和RT-PCR检测结果表明MsRH基因成功插入烟草基因组中并表达.使用250mMNaCl处理7d后,转基因烟草中脯氨酸含量低于野生型烟草,而丙二醛和相对电导率则高于野生型烟草.初步试验结果表明转MsRH基因烟草对盐敏感性升高.     

苜蓿花药培养再生植株染色体倍性检测研究

本试验采用流式细胞仪对苜蓿(Medicago sativa L.)F₁代杂种花药培养再生植株进行染色体倍性检测。旨在建立高效的苜蓿花药培养体系,提高苜蓿单倍体的诱导效率,寻求一种快速简便的苜蓿倍性检测方法。检测结果为流式细胞仪矩形图上清晰地检测出二倍体、三倍体、四倍体以及二倍体加四倍体的嵌合体。50株苜蓿花药再生植株中有42株四倍体(2n=4x),2n=4x与2n=2x的混合体为5株,二倍体(2n=2x)为2株,三倍体(2n=3x)为1株。本文还讨论了苜蓿花药培养体系的建立,优化,以及筛选出了适宜制作苜蓿细胞悬浮液的缓冲液(15 mmol·L^-1Tris-HCl(pH7.5);80 mmol·L^-1KCl;20 mmol.L^-1NaCl;2 mmol·L^-1EDTA-Na₂;15 mmol·L^-1β-Mercaptoethanol;0.1%(V/V)TritonX-100;0.5 mmol·L^-1Spermine·4HCl)及其流式细胞仪检测苜蓿倍性的适应性程序。     

紫花苜蓿MsFPS基因超表达载体的构建及烟草转化

采用RT-PCR技术获得紫花苜蓿的法呢基焦磷酸合成酶基因,并连接到含有35S启动子和GUS基因的载体pBI121上,成功构建植物表达载体pBI-FPS.用根癌农杆菌介导法将其转入烟草中,共获得7株卡那霉素抗性苗,对其中的4株进行PCR检测,证明目的基因已经整合到烟草基因组中.进一步对这4株进行RT- PCR和组织化学染色法检测,初步证实目的基因在烟草中可以表达,说明已成功获得能够表达MsFPS基因的转基因烟草.     

紫花苜蓿蓝光受体CRY2B过表达载体构建及转化

短日照是影响苜蓿秋眠性的主要因素,即光周期效应。根据转录组测序的结果,对主要的蓝光受体隐花色素CYR2 B基因和苜蓿秋眠性之间关系的研究可以从光受体途径来揭示苜蓿秋眠性调控机制,本试验首先克隆紫花苜蓿1级品种‘驯鹿'隐花色素CRY2B基因的完整开放阅读框(696~2553 bp),设计1对含有酶切位点的特异性引物CRY2 B-F,CRY2 B-R,通过多次酶切和连接,将克隆目的片段连接到植物表达载体p CAMBIA3301上得到重组载体p CAMBIA3301-CRY2B,成功地构建了紫花苜蓿CRY2B的过表达载体,并利用农杆菌介导p CAMBIA3301-CRY2 B成功转化苜蓿植株,为进一步研究CRY2 B调控苜蓿秋眠性分子机制奠定基础。