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尼帕病毒和亨得拉病毒核蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
尼帕病毒(Nipahvirus,NiV)和亨得拉病毒(Hendravirus,HeV)是近年来出现的2种新的高致病性副粘病毒,在我国尚未发现。为防范2种病毒在我国的出现,本研究开展了前瞻性工作,成功研制了针对2种病毒核蛋白(N)的单克隆抗体,可用于病毒监测与诊断。首先利用大肠杆菌表达的2种病毒N蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后应用间接免疫荧光的方法对杂交瘤细胞克隆进行筛选,获得了5株N蛋白特异单抗。单抗腹水的抗体效价均超过2×10^5,培养上清抗体效价1:64~1:256。Western—blot和间接免疫荧光试验证明,5株单抗均特异针对N蛋白,其中1株(H4D11)只与HeVN蛋白反应,而不与NiVN蛋白反应,表明它具有鉴别2种病毒的能力。所研制的单抗对建立2种病毒的检测技术,用于动物监测,以防范2种新发传染病在我国流行具有重要意义。 相似文献
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一种新的病毒--尼帕病毒 总被引:4,自引:0,他引:4
1997年马来西亚 Pergk州的猪场暴发了病毒性脑炎 ,导致 1人受感死亡 ,当时被诊断为日本脑炎( JE)。 1 998年 9月 ,该州再次暴发此病 ,均为成年患者 ,表现为高热的神经系统症状 ,震颤、惊厥和昏迷等 ,且进行性加重。 1 999年 3月 ,新加坡报道了相似病例 ,发病者均为屠宰场加工马 相似文献
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为制备抗尼帕病毒(NiV)的单克隆抗体(Mib),本研究以原核表达并纯化的NiV核蛋白(N蛋白)为免疫原,按常规方法免疫小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经两次有限稀释法克隆,最终获得两株稳定分泌抗N蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为A6和C5.Western blot分析表明.... 相似文献
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本研究建立了一种基于重组酶介导的扩增技术(RAA)以及CRISPR/Cas12a系统快速检测尼帕病毒(NiV)的方法。针对NiV N和F基因分别设计RAA引物和crRNA,构建反应体系,通过前期对引物、crRNA、反应温度以及反应时间等条件筛选优化建立起高效灵敏的检测方法,并评估了该方法的敏感性、特异性和重复性。结果显示:建立的方法在37℃恒温条件下,1h即可完成检测,最低检测限能够达到102拷贝/μL,敏感性较高;特异性强,与口蹄疫病毒(FMDV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)等常见猪病毒均无交叉反应;稳定性较好,对低、中、高浓度病毒质粒均能成功检出且一致性较好。结果表明,本试验建立的NiV快速检测方法操作简单、特异性强、灵敏度高、稳定性好,不需要复杂设备,在蓝光下通过肉眼即可观察结果,可为实现NiV早期快速检测提供有力的技术支持。 相似文献
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尼帕病毒(Nipah virus,NiV)是新近发现的引发脑部炎症或呼吸道疾病等重症的新型人畜共患病病毒,该病毒最初于1999年马来西亚尼帕镇的1名脑炎患者脑脊液中分离获得,至今已经历了数次大的流行,造成严重的经济损失和人员伤亡.该病毒可由动物传播给人,也可直接人与人传播,并且能够在猪等动物身上引起严重疾病,狐蝠科的果蝠是该病毒的天然宿主.NiV感染人后的病死率极高,并且目前还没有有效的疫苗和治疗措施,生物危害性极大,被列为生物安全4级病原(BSL4).笔者从NiV的分类及分型、基因和蛋白质组、流行和分布、疫苗研制、临床和病理变化以及实验室诊断技术等方面对NiV做简单的概述. 相似文献
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为建立一种快速、敏感和特异地鉴别尼帕病毒(NiV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的检测方法,本试验以NiV M基因和HP-PRRSV nsp2基因为靶序列,通过优化反应条件建立了一种二重荧光RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、定量线性范围、敏感性和重复性进行了评价及初步应用.结果显示,用该方法检测NiV M基因和HP-PRRSV nsp2基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA和HP-PRRSV-nsp2-RNA),线性范围分别为4.6×101~4.6×107和4.1×101~4.1×108拷贝/μL;最低检出限分别为46和4.1拷贝;该方法组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示出良好的可重复性;该方法仅对NiV和HP-PRRSV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪流感病毒(SIV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)发生交叉反应.用该方法对236份猪实际样品进行NiV和HP-PRRSV核酸检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,8份样本的HP-PRRSV检测结果为阳性.本研究建立的方法为猪实际样本中NiV和HP-PRRSV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段. 相似文献
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从引进的含亨得拉病毒(Hendra virus,HeV)基因的克隆质粒中扩增得到该病毒核蛋白基因(N),将其克隆到pET-28a(+)原核表达栽体,转化大肠杆菌后成功地表达了N蛋白,SDS-PAGE电泳分析结果表明目的基因在JM109(DE3)大肠杆菌菌株中得到了良好的表达,目的蛋白量占菌体总蛋白的14.6%。Western-blotting检测表明,表达的蛋白可以被兔抗亨得拉全病毒阳性血清识别,表明该蛋白具有良好的反应性。该研究结果可进一步应用于诊断试剂和单克隆抗体的制备以及流行病学调查,以防范该病在我国的流行。 相似文献
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