云南省边境地区牛阿卡斑病毒血清学调查

为掌握云南省边境地区牛群中的阿卡斑病毒（Akabane virus,AKAV）流行情况和分布特征,采用竞争ELISA检测方法,对2019—2020年采自云南省边境地区10个县市的牛群血清样品进行AKAV抗体检测与分析。结果显示：在采集的4 437份牛血清样品中,检出抗体阳性样品1 367份,平均抗体阳性率为30.81%;2019年抗体阳性率为27.88%,2020年为32.14%,差异不显著（P＞0.05）;入境牛抗体阳性率显著高于本地牛（P＜0.05）;养殖场抗体阳性率略高于散养户和交易市场,但三者间差异不显著（P＞0.05）;舍饲牛群的抗体阳性率显著高于半放牧半舍饲和系牧饲养（P＜0.05）,黄牛的抗体阳性率明显高于水牛（P＜0.05）。结果表明,云南省边境地区存在一定程度的AKAV感染且有加重趋势,入境牛感染风险较高,需持续开展血清学调查和监测,加强境外牛的检疫和移动控制,降低AKAV向内地扩散的风险。本研究摸清了云南省边境地区牛群中的AKAV流行本底,为今后该病毒流行控制策略的研究与制定提供了参考。     

2017—2018年云南省边境地区阿卡斑病毒抗体检测

为了解云南边境地区近年来阿卡斑病毒(Akabanne disease virus,AKAV)流行情况,2017—2018年连续2年在云南省与缅甸、老挝、越南接壤的12个边境县采集牛血清,应用cE LISA方法进行AKAV抗体检测。结果显示:2017—2018年共检测牛血清样品1 860份,检出阳性样品108份,阳性率为5.8%,显示这些地区存在一定的AKAV感染;各县AKAV抗体阳性率在0～24.4%之间,差异较大,其中抗体阳性率最高的为富宁县,2017年和2018年的阳性率分别为24.4%和20.0%,而瑞丽连续2年未检出抗体阳性;黄牛AKAV抗体阳性率(6.6%)高于水牛(4.7%),差异显著(P<0.05);入境牛抗体阳性率(6.5%)高于境内牛(3.0%),差异显著(P<0.05);养殖场(9.0%)、交易市场(8.4%)、屠宰场(7.6%)的牛AKAV抗体阳性率高于村寨散养户(2.5%),差异极显著(P<0.01)。结果表明,AKAV在云南边境地区存在一定的流行,其流行趋势受入境动物影响。结果提示,应继续加强云南省边境地区AKAV等虫媒病毒病的监控,及早发现和控制该病流行。     

2021年云南省玉溪市活禽交易市场禽流感病毒监测

为了解云南省玉溪市活禽交易市场禽流感病毒污染情况,2021年对该市8个县（市、区）活禽市场进行采样检测。全年共采集63场次1 455份棉拭子样品（禽咽喉/泄殖腔双拭子860份、环境拭子317份、运输工具拭子278份）,采用荧光RT-PCR方法进行流感病毒A型、H5/H7/H9亚型流感病毒核酸检测。共检出A型流感病毒核酸阳性435份,未检测到H5和H7亚型病毒核酸阳性;除检出7份未分型阳性样品外,在44场次检出H9亚型病毒核酸阳性428份,场次阳性率为69.84%,样品阳性率为29.42%,其中活禽、环境、运输工具样品阳性率分别为32.56%、25.87%、23.74%,差异具有统计学意义（P <0.05）。一年四季均能检测到H9亚型病毒阳性,但3—6月份样品阳性率低于年均阳性率,1、2、7、10、12月样品阳性率明显高于其他月份,各月份间样品阳性率差异具有统计学意义（P <0.01）。各县（市、区）的场次阳性率存在差异（P <0.05）,但样品阳性率差异无统计学意义（P> 0.05）。结果表明：玉溪市活禽市场H5、H7亚型高致病性禽流感病毒的污染状况得到有效控制...     

广西牛羊赤羽病和蓝舌病流行病学调查

为了解赤羽病病毒(AKAV)和蓝舌病病毒(BTV)2种虫媒病毒(Arbovirus)在广西的流行与分布情况,本研究对采集自2010年～2011年广西11市的706份牛、羊血清样品进行检测,共检测出AKAV抗体阳性样品382份,总阳性率为54.11％.其中山羊血清82份,阳性率为28.37％(82/289);牛血清300份,阳性率为71.94％(300/417).BTV抗体阳性样品279份,总阳性率为39.52％.其中山羊血清95份,阳性率为32.87％(95/289),牛血清样品184份,阳性率44.12％(184/417).同时检测出2种虫媒病毒抗体185份,占样品总数的26.20％.本研究结果表明2种虫媒病毒在广西广泛流行,并首次证明广西存在AKAV的感染.     

蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。     

2020年云南省边境地区牛蓝舌病血清学调查

为了解蓝舌病(bluetongue,BT)在云南边境地区的流行和分布情况,2020年采用竞争ELISA方法,在云南省边境地区12个县市随机采集135个养殖场、活畜交易市场和散养户的3800份牛血清样品进行蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)抗体检测。结果显示:12个边境县市均检出阳性血清样品,平均样品阳性率为77.9%,场户阳性率为93.3%;样品阳性率有一定的地区差异,其中陇川县最高(92.0%),孟连县最低(48.0%),差异存在统计学意义(P<0.05);境外牛血清样品阳性率(84.8%)显著高于本地牛(67.9%),P<0.05;不同饲养方式下的样品阳性率存在差异,其中舍饲最高(81.4%),半放牧半舍饲(62.5%)最低,P<0.05;黄牛样品阳性率(80.0%)明显高于水牛(61.4%),P<0.05。结果推断,BT在云南边境地区可能广泛存在且流行严重,需要持续开展血清学调查、监测,重点加强对境外牛的控制。本研究为我国西南边境地区BT防控提供了数据参考。     

山西省牛羊蓝舌病血清流行病学调查与分析

为了解蓝舌病病毒(BTV)在山西省的感染及分布情况,采用竞争ELISA方法,对分别在2013年和2015年的5—6月份采自山西省11个市的1 090份牛羊血清样品进行了BTV抗体检测,分析BTV阳性分布与地理、气候因素的关系。结果共检测出BTV抗体阳性样品127份,总阳性率为11.65%。其中,羊阳性血清96份,阳性率为19.28%(96/498);牛阳性血清31份,阳性率为5.24%(31/592)。结果表明,山西省部分地区牛羊群中存在BTV感染,且阳性率与纬度、降雨量有关。     

BVDV、IBRV和AKAV多重PCR检测方法的建立与应用

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV)和阿卡斑病毒(Akabane virus, AKAV)是引起牛发生繁殖障碍性传染病的主要病原。本研究根据BVDV的5′-UTR、IBRV的gB基因和AKAV的S基因设计了3对特异性引物,构建了检测BVDV、IBRV和AKAV的多重PCR方法,并优化反应体系和条件,验证了该方法的特异性和敏感性。结果显示,构建的多重PCR方法对其他牛源病毒无扩增,对BVDV、IBRV和AKAV的最低检测限分别为10³、10³和10⁴ 拷贝/μL。对采集的184份临床血清样品进行检测,BVDV、IBRV和AKAV的阳性率分别为18.48%、14.13%和1.63%,BVDV和IBRV 2种病原混合感染的阳性率为3.8%,BVDV和AKAV两种病原混合感染的阳性率为1.63%。该结果与我国出入境检疫行业标准符合率达92%以上,BVDV+IBRV和...     

赤羽病病毒Real-time RT-PCR检测方法的建立与初步应用

为了研究赤羽病病毒的检测方法,试验根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)的S基因序列建立了检测AKAV的Real-timeRT-PCR方法。结果表明:该方法对AKAV的检测有高度的特异性,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)等13种病毒均无交叉反应;Real-timeRT-PCR能够扩增稀释度为1×10-5的病毒RNA(核酸含量约1.18ng/μL),比普通RT-PCR高出1000倍;用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料,均未检测到阳性样本;AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。     

乳胶凝集试验检测猪场猪PPV、JBEV和PrV血清抗体

用乳胶凝集试验（LAT）对两个规模化猪场的后备母猪进行猪细小病毒病（PPV）、猪乙型脑炎（JBEV）和猪伪狂犬病（PrV）血清进行流行病学调查，共检查血清样本67头份，结果检出PPV抗体阳性血清28份，阳性率为41.79％；JBEV抗体阳性血清18份，阳性率为26.87％；PrV抗体阳性血清19份，阳性率为28.63％；但两个规模化猪场的PPV、JBEV和PrV阳性率不一致，甲猪场的PPV、JBEV和PrV的阳性率分别为51.2％、30.2％和39.5％，乙猪场为25.0％、20.83％和8.32％。对3种病毒阳性血清进行抗体滴度测定，其抗体滴度在甲猪场均不高于1：16，乙猪场不高于1：8。     

用牛内皮细胞和鸡胚检测蓝舌病病毒

用接种牛内皮细胞和鸡胚两种方法比较了检测实验接种绵羊血样中蓝舌病病毒（BTV）的效果，对所有被试的BTV血清型，鸡胚能持续检出毒血症的时间比牛内皮细胞的长，并能检出病毒滴度较低样品中的BTV。     

云南省边境地区送检牛血清样品蓝舌病病毒抗体检测与血清型鉴定

为了解云南边境地区的蓝舌病流行和分布情况,采用竞争ELISA方法,2019年对云南省边境地区5个州市12个县（市）的1 580份牛血清样品进行蓝舌病病毒抗体检测,同时从检出的阳性血清中,每县（市）随机选取15~55份,采用微量血清中和试验进行血清型鉴定。结果显示：12个边境县（市）均检出阳性血清样品,但有一定的地区差异,其中芒市最高（94.1%）,沧源县最低（17.0%）;本地牛和境外牛血清样品阳性率差异不大（P＞0.05）,均在70.0%以上;各县（市）均存在5个以上血清型的交叉感染。结果表明,蓝舌病在云南边境地区广泛存在,且呈多种血清型混合流行态势,需要持续开展血清学调查。本研究为我国西南边境地区蓝舌病防控提供了数据参考。     

云南黄牛血液中阿卡斑病毒的分离鉴定及S基因序列分析

为了解阿卡斑病毒在云南师宗的流行情况及病毒的遗传特征,本研究在云南师宗设立哨兵动物,2014年5～11月每周1次连续采集血清、血液样品,血清用做AKAV抗体检测,血液在C6/36、BHK-21、MDBK和Vero细胞上进行病毒分离工作,用S基因特异引物对阳性分离物进行鉴定及序列分析。结果显示,15头哨兵动物共采集到28批420份血清、420份血液样品,其中有3头牛和1只羊感染AKAV,从这些样品中分离获得2株AKAV(编号09312D和09312H),它们在BHK-21和MDBK细胞上48 h产生明显CPE。2株新分离AKAV的S片段序列核苷酸同源性为100%,氨基酸同源性为100%,与所引用的9株其他不同地区分离的AKAV的S片段序列核苷酸同源性在83.8%～97.7%之间,氨基酸同源性在90.6%～99.6%之间,且新分离毒株处于同一进化小分支,具有高度亲缘性,形成了一个独立的次级分支,同时与其他2株中国AKAV分离株处于同一进化簇。结果表明,云南省师宗县为AKAV流行地区,病毒在当地活动频繁,新分离得到的2株病毒与其他AKAV毒株具有较高的核苷酸同源性和氨基酸同源性,提示亚洲太平洋地区AKAV病毒长期流行且关系密切,同时其氨基酸同源性高于核苷酸同源性也提示了AKAV S片段良好的氨基酸遗传稳定性。     

猪细小病毒与圆环病毒2型感染情况血清学调查

为了解清浦区生猪细小病毒和圆环病毒2型感染情况,作者应用ELISA试验对该区15个规模猪场共计l50份血清样品进行抗体监测。结果显示被检猪细小病毒抗体阳性率为10％,圆环病毒2型抗体阳性率为32．67％,两种病毒抗体同时阳性为7．33％;26．67茗的猪场细小病毒抗体阳性,86．67％的猪场圆环病毒2型抗体阳性,26．67％的猪场两种病毒抗体同时阳性（细小病毒抗体阳性的猪场圜环病毒2型抗体也同时检出阳性）。     

祁连山北麓中部地区牦牛常见病的血清学调查

[目的]为了掌握祁连山北麓中部地区牦牛常见病的感染情况。[方法]对祁连山北麓中部地区的牦牛常见病开展了血清学检测。共检测280份血清样品,分别检测了布病、口蹄疫、牛传染性鼻气管炎、弓形虫、牛副结核病的感染抗体。[结果]检出布病阳性样品3份,平均阳性率1.2%;检出口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体阳性样品31份,平均阳性率11.1%;检出牛传染性鼻气管炎阳性样品14份,平均阳性率5.0%;检出弓形虫抗体阳性样品87份,平均阳性率31.1%;检出牛副结核抗体阳性样品1份,平均阳性率0.4%。[结论]通过血清学检测,初步掌握了5种疫病的感染情况,为科学防控提供了科学依据。     

云南奶（水）牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测及防控措施

本文报告了云南奶（水）牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测的结果,并在此基础上提出了相应的防控措施。2011年度,云南省现代农业（奶牛）产业技术体系奶牛疫病控制功能实验室在体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站各示范场、养殖小区和养殖户采集奶牛、奶水牛血清样品共计311份。应用口蹄疫A型、亚洲Ⅰ型和O型免疫抗体液相阻断ELISA检测方法,检出口蹄疫O型抗体阳性数253份,阳性率81.35%;亚洲Ⅰ型抗体阳性数278份,阳性率89.39%;A型抗体阳性数110份,阳性率35.37%。应用口蹄疫3ABC抗体检测方法检出抗体阳性样品7份,阳性率2.25%。应用IDEXX牛布氏杆菌抗体检测方法检出布氏杆菌抗体阳性样品2份,阳性率0.64%。针对本次获得的口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测结果,提出了相应的防控措施,强化奶牛和奶水牛犊牛免疫、跟踪监测和完善生物安全措施。     

同源血浆及血清中蓝舌病病毒抗体ELISA检测结果比较

为简化动物血液样品中蓝舌病病毒（BTV）检测及研究方法,采用2种酶联免疫吸附试验（ELISA）,对采自云南省德宏州芒市一家肉牛养殖场的30对牛同源血浆及血清样品进行BTV总抗体及VP7抗体检测。BTV总抗体ELISA检测结果显示,同源血浆与血清之间的阳/阴性结果一致率为100%,ΔPI在±5%以内的样品占87%;VP7抗体ELISA检测结果显示,同源血浆与血清之间的阳/阴性结果一致率为93%,ΔOD在±0.05范围内的样品占87%。结果表明：利用ELISA检测动物血样中BTV抗体时,血浆样品可替代血清样品;血浆样品的溶血程度不影响检测结果,但粗制血浆中的非溶解性杂质可能影响检测结果,需要使用离心除杂后的血浆样品。     

云南省部分养殖场鸡传染性贫血病毒核酸检测及VP2基因序列分析

为了解云南省鸡传染性贫血病毒（chicken anemia virus，CAV）的流行及其VP2基因变异情况，2017—2020年，在昆明市、楚雄州、大理州、红河州、玉溪市等家禽养殖密集区的89个鸡场，采集422份疑似病鸡肝脏样品，通过PCR方法检测CAV核酸。结果显示，检出阳性245份，平均阳性率为58.06%；不同年份的CAV核酸阳性率为53.61%~60.91%，不同区域核酸阳性率为51.68%~63.52%。对3份CAV阳性样品进行VP2基因序列分析，发现核苷酸序列同源性为99.6%~99.8%，与参考毒株1852TW和N7的核苷酸同源性为99.6%~99.8%，均属于GroupA分支。结果表明：云南省普遍存在CAV感染，且感染较严重；VP2基因仍可作为PCR病毒核酸检测的首选目标基因。通过加强鸡群CAV监测，淘汰阳性鸡群和结合疫苗免疫，可减少该病造成的损失。     

辽宁省猪圆环病毒2型血清学调查与分析

为了解辽宁省猪圆环病毒2型（PCV2）感染情况,对来自辽宁省14个市的59个规模化商品猪场的734份血清、17个种猪场的329份血清、45户农村散养户的146份血清,采用ELISA（酶联免疫吸附试验）方法进行PCV2抗体检测。结果显示,59个规模化猪场中有51个为阳性,阳性率86.4%（51/59）,其734份样品中有351份为阳性,样品阳性率为47.8%（351/734）;17个种猪场中有15个为阳性,阳性率为88.2%（15/17）,其种猪群样品阳性率为47.6%（81/170）,仔猪群样品阳性率为29.6%（47/159）;45户散养户中有23户为阳性,阳性率为51.1%（23/45）,检测的146份样品有58份阳性,样品阳性率39.7%（58/146）。可见,PCV2在辽宁省各地的感染已经很普遍,并且种猪群感染率高于仔猪群,规模场的感染率高于农村散养户。     

赤羽病病毒套式RT-PCR检测方法的建立与初步应用

根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了3条特异性引物,建立了检测AKAV的套式RT-PCR方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增出AKAV的S基因片段,但从牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)等13种对照病毒中均不能扩增出目的条带。敏感性试验表明,套式RT-PCR能够扩增10-5稀释度的病毒RNA(核酸含量约1.18 ng/μL),比普通RT-PCR高出1 000倍。用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料,均未检测到阳性样本,但AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。研究结果表明,该方法灵敏、特异,为AKAV的检测提供了一个快速、有效的手段。