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1.
从东北地区采集的150份猪肺脏样品中,检测出3株猪细小病毒毒株。根据PPV7标准株NCBI登录号KU563733设计3对引物,对3个病毒株的基因片段进行扩增测序,将测序结果依次进行拼接,获得3个病毒株的NS1和CP基因序列,然后进行序列的同源性比对及进化树分析。结果显示:3个毒株的NS1基因序列与经典PPV7毒株的同源性分别为94.4%~95.2%、94.1%~95.1%和93.5%~94.3%;CP基因序列与经典PPV7毒株的同源性分别为89.6%~91.8%、89.8%~92.0%和89.6%~91.7%。通过进化树比对分析,确认3株PPV毒株为PPV7亚型。通过对其他病毒进行检测,发现PPV7与PCV2、PPV2的混合感染率较高。该分析结果为我国东北地区猪病防控提供了依据。 相似文献
2.
聚合酶链反应检测猪细小病毒的研究 总被引:17,自引:1,他引:17
本研究成功地建立了检测猪细小病毒(PPV)的聚合酶链反应(PCR)技术。以16个核苷酸引物对首次完成了PPVDNA结构蛋白VP1编码区228bp片段的扩增。同样数目的另一引物对,也成功扩增了Vp2编码区158bpDNA片段。PPVBM-1株与其它国内分离株(广西株、天津株和哈尔滨株)均出现相同扩增结果。琼脂糖凝胶电泳显示了特异条带(VP1228bp.Vp2158bp),而伪狂犬病病毒、犬细小病毒均未扩增,表明了本方法的特异性。同时,限制性内切酶分析(Vp1228bp及Vp2158bp分别含单一PvuⅡ、EcoRⅠ位点),也证实了特异性。本方法敏感性高,可检出10fg模板DNA。既可作样品的快速检测,又能检查细胞系的污染。具有特异、简便、快速的优点。 相似文献
3.
《中国兽医学报》2017,(8):1442-1450
为了进一步研究山西猪圆环病毒2型(PCV2)的遗传变异多样性情况,对山西2013—2016年间分离的9株猪圆环病毒流行株(SXQX、SXCZ、SXJC、SXJX、SXLL、SXPY、SXPG、SXXY、SXTY2株)的全基因组进行了扩增、克隆和测序,已收录入GenBank中。并将其全基因序列、ORF2序列和推导出的Cap蛋白氨基酸序列与不同国家和地区的28株主要流行株进行了遗传变异多样性分析,结果显示:9株PCV2山西流行株全基因组核酸序列全长SXJX、SXXY、SXJC株为1 768bp,其余均为1 767bp,分别约占33%和67%。9株PCV2流行株之间核苷酸同源性为94.7%~99.8%,与国内外28株参考株同源性为93.9%~99.9%,与国产疫苗株同源性(LG、DBN-SXO7-2、SH株)为95.1%~99.8%;PCV2全基因组序列的进化分析表明:本试验分离的SXJX、SXJC、SXXY株属于PCV2a亚型的2D亚群,SXLL、SXPY、SXCZ株属于PCV2b亚型的1C亚群,SXTY14、SXQX、SXPG株属于PCV2b亚型的1A/1B亚群,可见近几年,山西PCV2流行株以PCV-2b亚型为主。分离的9株PCV2的ORF2之间核苷酸和Cap蛋白氨基酸同源性分别为90.0%~100.0%和87.1%~100.0%,与28株参考株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为87.6%~100.0%和84.1%~100.0%,与国产疫苗株核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为91.0%~100.0%和89.3%~100.0%,同源性都较高。9株分离株中,有6株分离株(SXQX、SXTY14、SXPG、SXXY、SXJC、SXJX)Cap蛋白氨基酸为233个,其中SXQX、SXTY14、SXPG株的ORF2位于1 033~1 734bp,SXXY、SXJC、SXJX株的ORF2位于1 034~1 735bp,3株分离株(SXCZ、SXLL、SXPY)Cap蛋白氨基酸为234个,其ORF2位于1 030~1 734bp,而与其他基因组序列为1 767bp分离株的ORF2相比,1 030~1 734bp位置多了3个碱基TCA,导致其氨基酸序列在234位置增加1个K(Lys)。另外还发现9株PCV2Cap蛋白除了唯一糖基化位点(NYS)(第143~145位氨基酸)呈高度保守外,还存在较多的氨基酸变异,这为山西地区PCV2的免疫预防等的研究提供理论依据,并为深入开展PCV2的分子致病机理提供基础理论数据。 相似文献
4.
[目的]了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)在广西壮族自治区的流行情况及遗传特征。[方法]采用PCR方法对广西壮族自治区不同地区送检的病料进行PCV2检测和全基因组序列扩增。应用BioEdit、Mega 7.0、RDP 5和SimPlot(ver 3.5.1)软件对获得的24株PCV2毒株全基因组序列进行核苷酸序列相似性、遗传变异和重组分析,并对Cap蛋白氨基酸序列变异位点进行分析。[结果]PCV2广西株基因组大小均为1 768 bp;核苷酸序列相似性分析显示,广西株与参考株PCV1~PCV4的相似性在44.7%~99.7%,与PCV3亲缘性最低;广西株为PCV2b和PCV2d型,PCV2d流行最为广泛;全基因组序列重组分析显示,部分广西株存在重组事件;与疫苗株AY686764-PCV2b和HM641752-PCV2b相比,PCV2广西株的Cap蛋白氨基酸序列共有21个位点发生变异。[结论]PCV2广西流行毒株以PCV2d型为主,部分毒株具有重组现象,部分位点发生独特的氨基酸变异,遗传进化趋势明显。研究结果为广西壮族自治区PCV2的流行病学... 相似文献
5.
利用PStⅠ和HindⅢ双酶切及低熔点琼脂糖凝胶电泳技术,从重组质粒PUP中回收3.0kb猪细小病毒DNA片段。以地高辛(Digoxigenin)标记后制备探针。运用该探针对作者分离并鉴定的7株猪细小病毒及PPV-BM1株、四川株、Z株、广西株、天津株进行打点杂交,并以具有相同临床症状的猪病毒性疾病的猪瘟病毒、日本乙型脑炎病毒、伪狂犬病病毒以及PUP质粒、PK-15为对照。结果探针与猪细小病毒DNA、PUP质粒的杂交呈阳性反应,而对照病毒、PK-15呈阴性反应,探针的最低检出限量为40pgDNA。结果表明,该探针具有特异性强、敏感性高,可用于猪细小病毒的检测 相似文献
6.
为了监测河北省及周边地区猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV-2)的流行性和遗传变异性,试验采集河北省及周边地区猪场疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合征(PCVAD)仔猪的组织病料,提取DNA,采用PCR方法进行PCV-2全基因组扩增、克隆和测序,采用DNAStar软件对PCV-2测序结果进行剪辑、拼接和同源性分析,利用MEGA X 10.0.5软件对PCV-2基因组进行遗传进化分析,利用RDP4软件对PCV-2基因组进行重组分析。结果表明:成功扩增并克隆出6株PCV-2毒株的基因组序列,6株分离株分别为河北沧州株HB/NG/2020(OM524507)、HB/WT/2020(OM524511)和HB/CZ/2020(OM524512),河北邯郸株HB/WA/2020(OM524508),河北邢台株HB/ZZ/2020(OM524509)及内蒙古乌兰察布株NMG/QQ/2020(OM524510);经测序和全长拼接,PCV-2基因组长度均为1 768 bp。经同源性分析,6株PCV-2毒株基因组核苷酸序列的同源性为97.8%~100%,与4株国产疫苗参考株LG、Z... 相似文献
7.
以猪细小病毒(PPV)细胞复壮毒接种于妊娠后11~13d的初妊母兔,接毒的初妊母兔均于妊娠后30~32d分娩。分娩后立即扑杀接毒母兔及其死产仔兔、对照母兔及其仔兔,分别无菌采集其肝脏和肾脏,按常规方法处理后以银加强胶体金技术进行检测,结果试验兔样本均为阳性,而对照兔样本均为阴性,这表明PPV也可在兔体内垂直传播,并引起繁殖障碍。初妊母兔可替代妊娠母猪作为PPV人工感染试验的动物模型。 相似文献
8.
猪细小病毒2型、3型、6型多重PCR检测方法的建立及初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立同时快速检测猪细小病毒2型(PPV2)、猪细小病毒3型(PPV3)、猪细小病毒6型(PPV6)的方法,本研究根据PPV2、PPV3、PPV6各自的NS基因序列设计3对特异性引物,建立了一种能同时检测上述病原的多重PCR方法。结果显示,建立的多重PCR方法对PPV2、PPV3、PPV6的基因组DNA均能有效扩增,对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、副猪嗜血杆菌(HPS)、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、日本乙型脑炎病毒(JEV)的核酸均无特异性扩增,特异性较强;对PPV2、PPV3、PPV6的重组质粒最低检测限分别为4.32×10^3拷贝/μL、9.62×10^3拷贝/μL、4.25×10^3拷贝/μL,与其他研究者已建立的单一PCR检测结果一致,敏感性较高。利用本研究建立的多重PCR方法对25份可疑临床样品检测,同时利用文献报道的单一PCR方法检测,二者结果一致。本研究建立的多重PCR方法为检测PPV,及该病的流行病学调查提供了技术支持。 相似文献
9.
根椐Gen Bank中登录的猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)核苷酸序列,分别设计2对引物,在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了2种病毒的双重PCR检测方法,用这2对引物对同一样品中的PCV2和PPV核酸模板进行双重PCR扩增,结果可同时扩增PCV2的245 bp、PPV的475 bp的特异性片段,而对其他4种病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该双重PCR技术能检出1 pg的PCV2和1 pg的PPV模板。用105份临床病料对本研究双重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的双重PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于对这两种病毒的同时检测和鉴别诊断。 相似文献
10.
间接Dot-ELISA检测猪细小病毒抗原的研究 总被引:3,自引:1,他引:3
本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)用于检测PPV抗原对纯化PPV抗原的最低检出量为2.5ng/点。PPV阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明,该方法对PPV抗原的检测具有特异性。以该方法检测PPV人工感染兔样本和自然染猪样本,PPV抗原的阳性检出率分别为肾样本100%(17/17)、81.82%(91/11),肝样本100%(16/16)、56.52%(13/23)。20份随机样本的间接Dot-ELISA检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 相似文献
11.
《中国兽医学报》2020,(2):242-247
猪细小病毒7型(porcine parvovirus 7,PPV-7)是2016年首次从美国猪群发现和鉴定的新的猪细小病毒。为进一步了解PPV-7的分子流行病学特征,采用分段扩增的方法对来自我国不同省份的10份PPV-7阳性样品进行全基因组扩增和测序,并利用DNAStar、MEGA等软件对这10株PPV-7流行毒株进行分子遗传和重组分析。结果表明,10株PPV-7流行毒株与PPV-7参考毒株的核苷酸序列同源性为92.2%~95.9%,与其他同属的田鼠细小病毒2(KX272741)等参考毒株的同源性为46.1%~50.8%,与细小病毒亚科其他属参考毒株的同源性为29.4%~33.1%;因此作者建议重新将PPV-7归于一个新的病毒属。用RADP软件进一步分析PPV-7流行毒株重组时发现,不同流行毒株的重组位点和父系病毒的来源均不相同,表明这些流行毒株仍在不断发生变异和重组,且这种变异具有不确定性。这无疑增加了PPV-7致病性增强的风险,提示我们应持续重视和关注PPV-7的分子流行病学监测。 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(6):896-901
为了解闽西地区2013-2015年猪圆环病毒2型(PCV2)血清学及流行毒株的遗传变异规律,本研究采集闽西地区规模化猪场1 771份血清样品,应用ELISA方法对其进行PCV2抗体水平检测,结果血清样品的总阳性率为93.00%,其中种猪血清阳性率最高为99.78%,哺乳仔猪、保育猪和育肥前期猪血清阳性率逐渐降低,分别为91.62%,80.78%,77.68%,育肥后期猪血清阳性率上升为100.00%。应用PCR方法对10株PCV2全基因组进行遗传变异分析,结果表明,PCV2基因组全长为1 766~1 768bp,10株PCV2的核苷酸序列同源性为94.6%~99.7%,其与国内外参考毒株的同源性为94.0%~99.2%。系统进化树结果表明,10株PCV2毒株可分为2个大支,1株属于PCV2a,9株属于PCV2b(2株为1A/AB,7株为1C);氨基酸序列分析表明在Cap蛋白的53~91,121~151和185~215位存在3个高度变异区,表明闽西地区PCV2流行毒株主要为PCV2b亚型。 相似文献
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我国部分地区猪圆环病毒2型分离株的遗传变异分析 总被引:3,自引:1,他引:3
为了解我国猪圆环病毒2型(PCv2)流行毒株遗传变异情况,本研究对本实验室分离到的19株PCV2分离株通过病毒全基因组克隆和测序分析,将其分为2个大基因群和3个亚群,其基因组分别为1 766 nt、1 767 nt和l 768 nt,各占15.8%、73.7%和10.5%.以1 767 nt毒株为基准,其基因组第39或1 039位有1个碱基缺失后突变成1 766 nt毒株;第1 040位有1个碱基插入后突变成1 768 nt毒株.对19株病毒ORF2编码的Cap蛋白分析发现,有4株病毒编码基因发生了突变,出现了705 nt和708 nt两种突变型,使ORF2编码的Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸增加.同时,本实验选用Acc I和Fba I内切酶对19株病毒基因组PCR产物进行了限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,其结果可作为流行毒株分型鉴别依据. 相似文献
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《中国兽医学报》2020,(1)
为了解猪圆环病毒型(porcine circovirus3,PCV3)在河北省的流行情况及遗传变异特点,本研究在2017年2月至2018年7月间,从河北省不同地区60个猪场采集了310份不同临床症状表现的发病猪组织样本,应用PCR方法对其进行检测。结果显示该地区PCV3阳性率为16.5%(51/310),猪场阳性率为45.0%(27/60),对不同临床症状发病率分析显示PCV3在表现为繁殖障碍及腹泻猪群中具有较高的阳性率,且易与PCV2发生共同感染。对获得的8株PCV3的cap基因进行测序及同源性分析显示,所得8条序列之间的核苷酸相似性为98.0%~99.7%,与24条国内外参考株之间的核苷酸相似性为98.0%~100.0%。对cap基因所推导的氨基酸序列进行分析发现cap基因的主要突变位点发生在24,27,77及150位,其中24和27位主要发生了A24V和R27K变异。对32条序列进行进化树的构建发现,进化树可分为3a、3b和3c 3个基因群,河北分离株主要分布于3a基因群和3c基因群,表明了河北省PCV3流行株相对稳定。我们的研究结果为PCV3在河北省的流行及进化特点提供了理论参考,这些数据可为该地区PCV3的诊断及综合防控提供科学依据。 相似文献
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作者拟建立检测猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的二重液相芯片(xMAP)检测方法,以满足出入境检疫和临床高通量检测的要求.依据GenBank中PPV结构蛋白VP2基因及PCV2全基因序列,设计PPV和PCV2特异性探针、引物及探针互补序列,将探针与磁性微球偶联,对下游引物和探针互补序列标记生物素,采用不对称性二重PCR扩增靶序列,将PCR产物与偶联好的探针进行杂交,用液相芯片仪进行检测.通过对检测条件优化,建立检测PPV、PCV2两种病毒的二重液相芯片技术,并对临床样本进行检测.建立的PPV和PCV2二重液相芯片检测方法,特异性良好,该方法对PPV和PCV2基因拷贝数检测下限分别为1.53×10 4、2.58×102;对56份临床样品检测表明,该方法与单项PCR检测结果符合率为100%.成功建立了PPV、PCV2二重xMAP检测方法,该检测技术可用于出入境检疫和兽医临床检验. 相似文献