鸡混合性绦虫感染的绦虫种类鉴定

从武隆县巷口镇凤山鸡场2013年10月送检的病鸡小肠中采集绦虫,将采集到的绦虫制成标本,然后在显微镜下观察,并根据绦虫虫体长度,吻钩数目以及虫体、头节、吻钩、节片的形态特征鉴定绦虫的种类。结果显示,在采集的绦虫样本中,1份为膜壳科柴壳属绦虫,1份为膜壳科网宫属绦虫,3份为膜壳科微吻属绦虫。结果表明：武隆某鸡场鸡感染绦虫为混合感染,感染膜壳科微吻属绦虫的机率最大。建议该鸡场使用吡喹酮等药物进行治疗。     

牛羽虱的形态学特征和分子鉴定

本研究旨在从形态学和分子水平对牛羽虱(Bovicola bovis,B.bovis)进行鉴定.对采自湖南省长沙市黄牛体表的虱子样品进行初步形态学观察后,通过PCR对虫体线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cytochrome c oxidase subunit 1,cox1)基因进行扩增,应用DNAMAN软件开展序列分析,...     

青海大通北川河源区鱼类舌状绦虫和双线绦虫的分子鉴定及系统发育关系研究

通过PCR方法扩增青海大通北川河源区国家级自然保护区河流中鱼体内寄生的舌状绦虫和双线绦虫CoxI、ItsI和NadI基因部分序列,并进行分子鉴定,分析3种基因的同源性,利用这3种基因进行分子进化和系统发育关系研究。结果显示,经过分子鉴定,寄生在鱼类肠道中的绦虫为舌状绦虫,寄生在鱼类腹腔中的绦虫为双线绦虫;舌状绦虫裂头蚴克隆的CoxI、ItsI和NadI基因序列分别与EU241312 (法国)、KC900974(伊朗)和AF524046(中国)的核苷酸序列同源性为97.8%、99.3%和84.2%,双线绦虫克隆的CoxI、ItsI和NadI基因序列分别与EU241309(法国)、KC900994(伊朗)和AF254123(中国)的核苷酸序列同源性为89.6%、98.9%和99.5%;舌状绦虫与双线绦虫3种基因序列比对发现,CoxI基因序列同源性为83.2%,ItsI基因序列同源性为91.1%,NadI同源性为71.8%。同时,利用GenBank中其他种属绦虫的CoxI、ItsI和NadI基因序列构建系统发育树,均与已鉴定的舌状绦虫和双线绦虫聚在同一支上,与其他绦虫所属分支相距较远,从构建的系统发育树可以看出舌状绦虫和双线绦虫分属两个不同种类,且与舌状绦虫中国广州分离株种属亲缘关系较近。初步阐明了鉴定的舌状绦虫和双线绦虫分离株与其他种属之间的系统发育关系。     

福建省蛇源裂头蚴的分子鉴定及遗传分析

裂头蚴病是由于裂头蚴感染引起的一种人兽共患病,为了对福建省养殖蛇类的裂头蚴感染情况进行调查并鉴定虫种,对采自福建省三明市、漳州市和南平市等地蛇场的蛇类进行剖检,分离得到了裂头蚴,记录寄生部位和数量.提取裂头蚴虫体基因组,采用PCR对虫体ITS、NAD4和COX3基因进行了扩增.同时,将扩增得到的目的基因连接到pEASY...     

猬迭宫绦虫裂头蚴线粒体nad1基因部分序列的多态性研究

从湖南省4个不同地区的黑斑蛙大腿肌肉中采集猬迭宫绦虫裂头蚴作为研究对象,用引物Nadlu及Nadld扩增猬迭宫绦虫裂头蚴的nad1基因片段,应用Clustal× 1.81程序对序列进行比对,同时利用DNAStar 5.0中的McGalign程序进行同源性分析.结果显示猬迭宫绦虫裂头蚴nadl序列均为570bp.研究结果为猬迭宫绦虫裂头蚴进一步的分类、鉴定和遗传变异研究奠定了基础.     

桂林蛇源裂头蚴分离株的分子鉴定及种系发育关系分析

为研究从桂林草花蛇中分离到的裂头蚴的分子分类地位,对其核糖体18 S rDNA、28 S rDNA、ITS全基因及线粒体coxl部分基因进行了克隆和序列分析.从GenBank获取相应基因序列,应用CLUSTAL W2软件进行多重比对分析序列差异,应用MEGA 4.0软件构建种系发育树.结果表明,在基于18 S、28 S...     

猬迭宫绦虫裂头蚴线粒体nad1基因部分序列的多态性研

从湖南省4个不同地区的黑斑蛙大腿肌肉中采集猬迭宫绦虫裂头蚴作为研究对象,用引物Nad1u及Nad1d扩增猬迭宫绦虫裂头蚴的nad1基因片段,应用ClustalX 1.81程序对序列进行比对,同时利用DNAStar 5.0中的MeGalign程序进行同源性分析。结果显示猬迭宫绦虫裂头蚴nad1序列均为570 bp。研究结果为猬迭宫绦虫裂头蚴进一步的分类、鉴定和遗传变异研究奠定了基础。     

山东地区羊绿脓杆菌的分离鉴定及系统发育分析

近年,山东省规模化羊场羊患慢性化脓性肺炎病例频繁出现,为了探明其病原及特点,本试验在流行病学调查基础上,对山东省6个地区10个规模化羊场的病、死羊进行临床症状观察、病理学检查,对所分离的菌株进行形态特征、理化特性检查及药敏试验、致病性试验和16SrRNA基因的分子鉴定。结果显示,从剖检病死羊的肺、肝、气管等组织中分离出6株细菌(分别命名为PA1~PA6),分离菌株镜检均为革兰阴性、短杆菌,对庆大霉素高度敏感,对小鼠具有较强致病作用。综合流行病学和生化试验结果等判定,该6株分离菌均为绿脓杆菌。对6株绿脓杆菌16SrRNA序列分析表明,该6株分离菌与已知的绿脓杆菌16SrRNA序列的同源性为99.9%~100%,与报道的绿脓杆菌菌株B136-33、YMD-4以及LCQ-4的序列位于一个分支上,属于一个亚群,其中与北京株B136-33的进化关系更近,核苷酸同源性为100%。     

兰州市流浪犬蠕虫感染情况调查及复孔绦虫分子生物学鉴定

为了解兰州市流浪犬蠕虫感染情况及复孔绦虫的遗传变异情况,本实验采集兰州市四个区（城关区、七里河区、安宁区、西固区）541份犬只粪便样本和5株犬复孔绦虫,使用粪检法调查蠕虫感染情况并利用线粒体cox1序列对兰州市犬复孔绦虫进行分子鉴定。结果显示,兰州市流浪犬蠕虫感染率为25.69%(139/541),优势虫种为蛔虫和复孔绦虫,其感染率依次为17.37%(94/541)、5.17%(28/541)。将本次测得的犬复孔绦虫cox1序列与GenBank中收录的中国西南地区和日本的犬复孔绦虫cox1序列进行比对分析,发现兰州市与中国西南地区、日本的样本序列差异分别为4%、5%,同时构建遗传关系树发现三者具有高度同源性,但可能由于地域不同导致气候海拔等因素的变化,致使兰州市犬复孔绦虫的部分cox1碱基发生变异。     

袋鼠摩根氏菌生物特性鉴定及系统发育分析

本研究利用Biolog快速鉴定系统、16S rRNA序列分析及传统细菌鉴定方法对3株分离自北京动物园袋鼠肺脏的菌株进行形态学、培养特性、生化特性、小鼠致病性等生物特性的鉴定及系统发育分析。结果表明,3株菌株均为摩根氏菌,对昆明小鼠有强致病性;3株袋鼠摩根氏菌16S rRNA序列与LMG7874模式株同源性均为99.8%,且位于系统发育树的同一分支。     

基于线粒体pcox1分析头槽绦虫种系发育关系

为阐明鱼头槽绦虫线粒体中的细胞色素c氧化酶第一亚基部分序列(pcox1)的遗传多态性,研究鱼头槽绦虫种系发育关系,以湖南省部分地区鱼头槽绦虫为研究对象,通过聚合酶链式反应(PCR)对其线粒体pcox1基因进行扩增并测序。序列分析比对后,结合Gen Bank收录的头槽绦虫以及其他科绦虫的序列,共同构建系统进化树,以此分析鱼头槽绦虫种内与种间的遗传关系。结果表明:湖南各分离株的pcox1长度为389～412 bp,各分离株间的同源性为93%～100%,与Gen Bank中收录的鱼头槽绦虫的同源性为99.2%～100%,序列均位于进化树同一分支上;本次收集的21株分离株与其他种绦虫序列的同源性为70.3%～80.0%,且进化树分支相距较远。结果说明鱼头槽绦虫的pcox1在不同地区种内均相对保守,种间差异较大,可以作为种间遗传变异研究的分子标记。     

ITS序列分析在真菌分类鉴定和分子检测中的应用

笔者介绍了ITS序列结构特点,综述了ITS序列在植物病原真菌分类鏊定和分子检测中的应用,并对其应用前景进行了展望.     

西藏牦牛、绵羊棘球蚴病病原的分子鉴定

本研究旨在对西藏自治区那曲地区和拉萨市牦牛、绵羊体内棘球蚴病原进行分子生物学鉴定并分析其遗传变异规律。对2016年11月底采自西藏拉萨市当雄县和那曲地区嘉黎县的5只绵羊体内的5个棘球蚴包囊、15头牦牛体内的18个棘球蚴包囊分别分离棘球蚴原头蚴或生发层组织,提取基因组DNA,应用PCR方法扩增nad1基因,通过测序获得nad1全基因序列。运用DNAStar MegAlign软件对序列进行同源性分析。以GenBank中已公布的棘球属的nad1全基因序列为比对对象,采用最大似然法（ML）构建系统发育树。结果显示,所测定的牦牛和绵羊的23个棘球蚴病原nad1基因序列与GenBank登录的细粒棘球蚴狭义种（G1基因型）nad1基因序列高度同源,同源性为99.6%~99.8%,23条nad1基因的遗传距离为0~0.0022447。同源基因的碱基变异率为0.2%~0.4%;与棘球属其他棘球绦虫同源基因的碱基变异率为14.9%~19.8%。有5个样本的nad1基因在不同位点发生碱基突变,变异位点发生序列转换。以上结果表明,本研究所采集牦牛和绵羊的棘球蚴为细粒棘球绦虫G1基因型,其nad1基因变异小,序列一致性高。     

3株斑羚、岩羊化脓隐秘杆菌的鉴定及系统发育分析

本研究利用Biolog快速鉴定系统、16S rRNA序列分析及传统细菌鉴定方法对3株分离自北京动物园斑羚、岩羊化脓隐秘杆菌进行了鉴定和系统发育分析。结果表明,3株菌株均为化脓隐秘杆菌;系统发育分析结果表明,3株化脓隐秘杆菌16S rRNA序列与NCTC5224模式株同源性均为100%,且位于系统发育树的同一分支。     

云南师宗和江苏盱眙中华按蚊的分子鉴定及COII基因序列分析

为了了解云南省师宗县和江苏省盱眙县中华按蚊的分子鉴定及COII基因序列特征,2014年7月在云南省师宗县和江苏省盱眙县采集蚊虫标本,通过形态学鉴定出中华按蚊,再提取蚊虫基因组DNA,用COII基因特异引物和序列测定,然后采用生物信息学软件进行核苷酸序列同源性和遗传进化分析。结果在云南省师宗县县城周围采集蚊虫标本314只,其中按蚊234只(74.52%);在江苏省盱眙县桂五镇采集蚊虫标本212只,其中按蚊143只(67.45%)。经形态学鉴定,每个地方挑选了8只疑似中华按蚊进行序列分析,结果显示,16只蚊虫COII核苷酸序列同源性在98%-100%之间,遗传进化分析显示,16只蚊虫全部与中华按蚊位于同一进化分支内。表明了采用分子鉴定的方法可有效地进行蚊虫种类鉴定。     

禽源大肠埃希菌Biolog鉴定和系统发育分析

采用Biolog和16S rRNA基因序列分析法对中国兽医药品监察所菌种室收集保藏的18株大肠埃希菌(Escherichia coli)进行了鉴定.菌株经纯化培养,用Biolog微生物鉴定系统进行了鉴定,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.提取基因组DNA,采用16S rRNA通用引物,用PCR进行16S rRNA基因序列扩增,扩增产物纯化后进行测序.序列经人工校对后用Clustal X 1.83软件进行比对分析,采用Mega 3.1软件构建系统发育树,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.     

北平顶猴伯特绦虫的分子鉴定及驱虫效果试验

伯特绦虫可感染非人灵长类动物。单纯常规粪检手段难以确定感染,本研究通过对笼养的北平顶猴进行常规粪检,并结合聚合酶链式反应扩增及基因序列比对,建立了司氏伯特绦虫的鉴定方法。利用吸绦灭注射液对感染伯特绦虫的北平顶猴进行驱虫,效果明显。本试验建立了伯特绦虫的分子生物学鉴定技术,并感染北平顶猴进行药物驱虫效果研究,为实验动物伯特绦虫的鉴定和驱虫提供指导。     

牦牛大肠杆菌的分离鉴定及系统发育分析

本试验旨在研究牦牛源大肠杆菌的遗传进化关系,明确其与人和其他动物大肠杆菌的亲缘关系。采集来源于四川省甘孜州、阿坝州的60份临床健康成年牦牛肛门棉拭子样本,接种于麦康凯琼脂培养基上进行细菌的分离培养,通过常规形态学、培养特性、生化特征和16S rRNA PCR检测的研究,确定49株为大肠杆菌。对其中9株牦牛源大肠杆菌进行16S rRNA克隆、测序,经系统发育分析发现牦牛菌株组内同源性为98.8%~99.9%,与GenBank中其他菌株的同源性为94.0%~100%。结果表明,牦牛源大肠杆菌与牛源菌株的遗传距离最近,与羊源菌株的遗传距离最远,与人、猪、鸭、鸡源菌株的遗传距离较近,其中有2株菌与人肠出血性大肠杆菌(EHEC)O₁₅₇∶H₇和志贺氏菌聚为一支,从遗传进化的关系看其有可能成为人类的潜在病原菌。     

1株越南斗鸡新城疫病毒的分离和分子鉴定

从一起新城疫暴发的病例中分离出1株新城疫病毒(NDV),命名为贵州分离株(DQ)。用RT-PCR方法扩增了贵州分离株的整个F基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,上述分离株F基因长度为1 662 bp,编码553个氨基酸。该毒株与国内2株分离株(CH2000、TW2000)之间的亲缘关系较近,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.7%~96.6%和96.6%~96.8%;但与LaSota、B1及F48E9等常见毒株的核苷酸和氨基酸同源性仅为84.0%~86.5%和87.2%~89.9%。DQ分离株在F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112R-R-Q-K-R-F117,与NDV强毒株特征相符,且具有101处的K(赖氨酸)和121处V(缬氨酸)2个特征性氨基酸,与NDV基因Ⅶ型的特性完全相符。利用MegAlign软件绘制NDV的系统发育进化树,结果表明,该分离株为基因Ⅶd亚型。     

河北保定地区羊多头蚴和犬多头带绦虫的调查与鉴定

为了解河北省山羊多头蚴和犬多头带绦虫的感染情况,本研究对河北省涞源县、阜平县和易县的山羊和犬进行绦蚴虫感染情况调查,并通过PCR技术对多头蚴与多头带绦虫分离株线粒体pnad1基因部分序列进行扩增与分析,确定多头蚴和多头带绦虫之间的种系发育关系。结果显示,调查区域山羊多头蚴与犬多头带绦虫感染率分别为2.38%和15.33%,通过DNAStar软件分析,所获得多头蚴和多头带绦虫分离株分别与四川多头带绦虫分离株的相似性分别为98.9%~99.5%和99.5%~99.8%,确定羊多头蚴为犬多头带绦虫的幼虫。