原生质体诱变技术选育糙皮侧耳秸秆分解菌株

通过原生质体的制备,再生及紫外诱变技术对1株具有较强的秸秆降解能力的糙皮侧耳菌株金凤9301进行菌种选育工作。得到1株木质素酶、纤维素酶、半纤维素酶均高产的菌株08P217。其木质索降解率,纤维素降解率,半纤维素降解率分别为出发菌株的1．75,1．71,3．22倍。经酯酶同工酶分析表明,试验所筛选的菌株已不同程度的发生遗传物质的改变,不同于原来的出发菌株。说明采用原生质体诱变育种是获得高效秸秆分解菌株的有效方法。     

糙皮侧耳漆酶基因的克隆及在粟酒裂殖酵母中的表达

利用RT-PCR技术,从糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)总RNA中克隆漆酶基因(Lac),再通过NheⅠ酶切位点与粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)表达载体pESP-2连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在SP-Q01中进行表达分析,最后用愈创木酚法测定表达产物的酶学活性。漆酶基因在构建的表达载体重组SP-Q01细胞中得到表达,酶学活性达到89.37 U/L。     

棉秸秆栽培糙皮侧耳菌株研究

以棉秸秆为主基料栽培糙皮侧耳,以棉籽壳为对照,用通径分析法研究了棉秸秆的木质纤维素降解率与产量的关系。结果表明:与常规基料棉籽壳(对照)栽培相比,棉秸秆栽培的糙皮侧耳在营养成分、转化率等方面无差异;棉秸秆栽培中,各菌株间的产量、木质素降解率差异明显,且木质素降解率对产量的总影响力最大。因此,棉秸秆栽培糙皮侧耳是可行的,为提高产量,宜选择木质素降解能力强的菌株用于生产和研究。     

糙皮侧耳对玉米秸的降解利用

本文研究了糙皮侧耳在玉米秸—麦麸基质上生长期间,菌体对基质的转化放率和基质中主要组分的降解规律。实验结果氧明:1.头潮菇子实体绝对生物学效率为9.15％,二潮菇子实体绝对生物学效率为4.10％。2.头潮菇子实体阶段所消耗的营养物质有57.61％是来自于木质纤维素的降解,另42.39％是来自于基质中的非木质纤维素组分。二潮菇期间所消耗的营养物质有86.82％是未自于木质纤维素的降解,另13.18％是来自于基质中的非木质纤维素组分。3.在菌丝体生长阶段和头湖菇的原基期,培养物中CMC酶、FP酶和半纤维素酶活性甚低,在子实体迅速生长阶段,该三种酶的活性迅速增加,在子实体成熟期左右培养物中出现酶活性高峰,在头潮菇子实体采收后酶活性迅速下降,在二湖菇子实体迅速生长期间,培养物中酶活性再次增加,在子实体成熟期基物中再次出现酶活性高峰。由此可见,酶活性增加与子实体生长发育有十分密切的关系。     

糙皮侧耳杂交后代遗传多样性分析

以糙皮侧耳Pleurotus ostreatus白色菌株P1和深灰色菌株P2为亲本,通过单孢菌株配对杂交获得40个杂交组合。出菇记录杂交后代子实体颜色,提取42个样本的全基因组DNA,用ISSR进行遗传多样性分析。结果表明:6条ISSR引物共扩增出45条带,其中多态性条带34条,多态性比率为75.56%,有效等位基因数为Ne=1.4858,遗传多样性指数H=0.2725,香农信息指数I=0.4021。聚类分析后发现,在0.6889水平上聚为4类,聚类结果与子实体颜色关系不大,表明糙皮侧耳杂交后代存在丰富的遗传变异。分类结果将有利于更好的利用这些丰富的育种资源。     

糙皮侧耳HMG-box转录因子分析与候选基因克隆表达

在糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的全基因组中鉴定出14个高速泳动蛋白(high-mobility group box,HMG-box)的编码基因(PoHMG1～PoHMG14),对其进行特征、结构与系统进化分析,发现所有的HMGbox转录因子蛋白的三级结构高度相似,相对分子质量为6893.79～60397.29,蛋白PoHMG6、PoHMG11、PoHMG12与PoHMG13之间的亲缘关系较近。基于糙皮侧耳在菌丝、原基、幼嫩子实体和成熟子实体时期的转录组数据,对筛选到的转录因子基因PoHMG11进行克隆分析并探究其功能及表达特性,发现该基因全长序列1 517 bp,编码489个氨基酸,含有一个HMG-box结构域。通过大肠杆菌原核表达载体体外诱导表达出相对分子质量为5.5×104的蛋白,该重组蛋白在1 mol·L^-1 IPTG、25℃诱导表达6 h时表达量最高。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析糙皮侧耳在菌丝、原基、幼嫩子实体和成熟子实体阶段PoHMG11基因的相对表达量,发现该基因在成熟糙皮侧耳子实体中的表达量比其他生长发育时期显著...     

辽宁省玉米秸秆基质栽培糙皮侧耳菌株筛选评价

为筛选出适宜辽宁地区以玉米秸秆为主要栽培基质的优良糙皮侧耳菌株,以19个糙皮侧耳菌株为试验材料,对菌丝长势、满袋时间、污染率、生物学效率及农艺性状等指标进行测定和比较分析。结果表明,C14号菌株综合指标优于其他供试菌株,其母种和栽培种在玉米秸秆基质中菌丝长势均较好,生物学效率较高,为105.8%,子实体菌盖颜色深灰色,菌柄3.1～6.8 cm,朵大韧性好,菇型紧凑,菌盖肥厚,中等大小,光泽好,可作为生产用优良菌株。C10、C2号菌株子实体性状一般,但其母种及栽培种在玉米秸秆基质中菌丝长势强、生物学效率高,利用秸秆能力强,可作为品种选育的备选材料。     

侧耳液体培养特性及胞外酶活性研究

本文测定了侧耳在PDY液体培养基中生长时 ,培养液pH值的变化 ,蛋白质含量和菌丝体重量 ;研究了淀粉酶、羧甲基纤维素酶、半纤维素酶、邻苯二酚氧化酶、愈创木酚氧化酶和漆酶的活性变化。结果表明 :在整个培养基内六种酶均有酶活性 ,但不同酶的活性有较大差异 ,产酶高峰也不尽相同     

不同糙皮侧耳菌株氨耐受性分析

在PDA培养基中添加NH4Cl和在灭菌发酵料中添加NH4OH(氨水)分析糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)不同菌株黑抗650、野生株NY-2和黑平17-1对氨的耐受性,并通过在NH4Cl质量浓度为1.00％和1.25％的PDA培养基中共培养(32℃)考察1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶产生菌对糙皮侧耳氨耐...     

钾肥对糙皮侧耳产量和品质的影响

以糙皮侧耳为试验材料,研究了常用钾肥KCl、KNO_3、K_2SO_4、KH_2PO_4对糙皮侧耳产量和品质的影响。结果表明,补充KCl、KNO_3、K_2SO_4、KH_2PO_4均可有效地提高糙皮侧耳的产量和品质;提高其蛋白质、碳水化合物、灰分和钾的含量。     

高效降解棉秸秆木质素糙皮侧耳菌株的筛选

为深入探讨白腐菌的木质素降解途径与机制,拓宽秸秆的生物降解应用研究,研究采用平板变色法对12个糙皮侧耳菌株进行初步筛选,再通过棉秸秆木质素降解实验对初选菌株进行复筛,筛选出高效降解秸秆木质素的糙皮侧耳菌株,并对其开展了秸秆栽培的应用研究。结果表明:初步筛选试验中选出了漆酶和过氧化物酶分泌能力都较强的8个菌株—皖平1号、P17、早、黑平A、苏平1号、苏平3号、新平400和天达300。木质素降解试验复筛出了高效降解木质素的糙皮侧耳菌株:苏平1号、皖平1号、苏平3号、黑平A,其中以苏平1号对棉秸秆木质素的降解能力最强,其木质素降解率为14.82%。各菌株在棉秸秆与棉子壳栽培中的转化率差异不显著,筛选出的高效降解秸秆木质素的菌株较其他菌株在棉秸秆栽培中产量、转化率均要高,其中苏平1号的产量、转化率最高。总之,从12个糙皮侧耳菌株中筛选出了高效降解棉秸秆木质素的菌株4株,即苏平1号、皖平1号、苏平3号、黑平A,其在秸秆栽培应用中产量、转化率也高,尤以苏平1号为最佳。     

糙皮侧耳和佛罗里达侧耳菌丝原生质体的形成与再生

本文报道了使用蜗牛酶和纤维素酶从糙皮侧耳和佛罗里达侧耳双核菌丝体中,成功地分离了高产量的原生质体。菌丝体培养时间,混合酶液 pH 值,一定浓度的酶液用量,酶解温度和时间与原生质体形成相关。原生质体的两种再生型被观察到,并计算了再生频率,糙皮侧耳为2.5%.佛罗里达侧耳为2.3%。     

糙皮侧耳凝集素基因Plectin的克隆和表达分析

基于cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了两个糙皮侧耳凝集素基因Plectin1和Plectin2。结构分析显示Plectin1和Plectin2基因全长分别为1 371和1 359 bp,二者均含有5个外显子和4个内含子;Plectin1开放阅读框长1 134 bp,编码377个氨基酸,Plectin2开放阅读框长1 122 bp,编码373个氨基酸。Southern杂交试验证实Plectin1和Plectin2在糙皮侧耳基因组中均只有1个拷贝。利用qRT-PCR分析了Plectin1和Plectin2在糙皮侧耳不同生长阶段的表达量,结果显示Plectin1和Plectin2分别在成熟子实体阶段和幼嫩子实体阶段表达量最高,这表明Plectin1和Plectin2基因可能在糙皮侧耳子实体生长发育中起到一定的调控作用。     

苹果渣发酵料栽培糙皮侧耳优良菌株的选育

新选育的糙皮侧耳菌株PL -A2 属于早熟型品种。该菌株菌丝在 5～ 37℃温度范围内均能生长 ,菌丝生长适温为 18～ 30℃ ,最适温度为 2 5～ 2 8℃。在苹果渣发酵料培养基上 ,菌丝粗壮、整齐、洁白 ,爬壁能力强 ,满袋天数为 2 2d± 1d。经推广栽培证明 ,PL -A2 是高产优质菌株     

五节芒栽培糙皮侧耳的子实体质构分析

利用质构分析仪,比较分析分别以五节芒(Miscanthus floridulus)和棉籽壳为主料栽培获得的糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)子实体的质构指标,同时测算二者干制率和杀青率差异。结果表明,相对于常规棉籽壳培养料栽培,菌草配方栽培糙皮侧耳的菌盖咀嚼性、硬度和回复性较差,菌柄回复性、硬度、内聚性和咀嚼性较差,而且子实体的干制率和杀青率也较低。     

糙皮侧耳PoLIM基因家族鉴定与表达分析

在NCBI、JGI数据库中检索糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）PoLIMs,进行生物信息学分析;测定PoLIM 1～PoLIM 6在25℃培养7 d(菌丝期),16℃培养5 d（扭结前期）、10 d（扭结后期）、15 d（原基期）、22 d（子实体期）的相对表达量以及菌丝在4℃冷胁迫12、24、48 h的相对表达量。结果表明：PoLIM1～PoLIM6的氨基酸数量为353～1 673;等电点为7.26～9.98;亚细胞定位预测均在细胞核中;有10个保守基序;启动子序列中包含光、生长素、MYB转录因子以及低温胁迫等响应元件。就相对表达量而言,PoLIM1在子实体期较高;Po LIM2在扭结后期和子实体期较高;Po LIM3、Po LIM4、Po LIM6在菌丝期较高;Po LIM5在扭结后期较高,在原基期及子实体期降低。与对照（25℃）相比,4℃冷胁迫时Po LIM1、Po LIM3、Po LIM5、Po LIM6的相对表达量升高。     

不同糙皮侧耳菌株麦秸秆全纤维降解能力对比

试验通过对13株糙皮侧耳菌株在以秸秆（应季麦秸）为主要培养基的试管中长速比较，筛选出长速明显高于其他菌株的金风9301，且其生长后的固体基质的全纤维降解率也明显高于其他菌株。该菌株对于利用富含木质纤维索的秸秆资源具有重要意义。     

不同糙皮侧耳菌株对腐食酪螨生长发育的影响

在(26±1)℃、相对湿度(80±5)％条件下,分别用10个糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株的麦粒菌种培养腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae),测定腐食酪螨的卵孵化率、各发育阶段的历期和未成螨存活率.结果表明:腐食酪螨完成一代需要的历期为(10.64±0.25)～(13.6...     

利用多功能等离子体诱变技术选育糙皮侧耳新菌株

以糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株‘新河大P-2号’为岀发菌株,利用多功能等离子体诱变技术(multifunction plasma mutagenesis system,MPMS)对菌丝进行诱变,获得367个在黍子(Proso millet)秸秆培养基上生长良好的菌株,通过拮抗实验获得39个诱变...     

丹参药渣栽培糙皮侧耳和毛头鬼伞

采用不同比例丹参(Salviae miltiorrhiza)药渣替代玉米芯对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)、毛头鬼伞(Coprinus comatus)供试菌株进行栽培实验.经栽培收获两茬子实体,分别对不同配方两个菌种的菌丝长速、单位料重产量、生物学效率等指标进行统计分析.结果表明:在单位料重产量及生物学效率表现上,随培养料中所含丹参药渣比例增加而增加;在菌丝长速表现上则相反.经丹参药渣、玉米芯的碳氮比分析(28.5∶1;88.1∶1)得知,栽培料中随药渣含量的增加氮素含量相应提高(碳氮比55.27∶1～27.44∶1,氮含量为0.76％～2.43％),成为两个菌种产量增加的主要原因.