脂肪间充质干细胞的研究进展

干细胞(stem cells)不同于成熟细胞。首先是因为它能够在长时间内保持自我更新和扩增的能力。干细胞是未成熟的细胞,不具有组织特性,不发挥与组织相关的细胞功能。其次干细胞能够向多种细胞系分化。干细胞的这些特点使其成为良好的种子细胞来源。胚胎干细胞(ESC)是能够向各种细胞系分     

脂肪间充质干细胞的研究进展

干细胞( stem cells)不同于成熟细胞.首先是因为它能够在长时间内保持自我更新和扩增的能力.干细胞是未成熟的细胞,不具有组织特性,不发挥与组织相关的细胞功能.其次干细胞能够向多种细胞系分化.干细胞的这些特点使其成为良好的种子细胞来源.胚胎干细胞( ESC)是能够向各种细胞系分化的全能干细胞,但是由于取材存在伦理...     

细胞亲环蛋白A对猪瘟病毒增殖的影响

细胞亲环蛋白A(CyPA)在多种病毒感染中起重要的调控作用。本实验室前期蛋白质组学研究表明,猪瘟病毒(CSFV)感染PK-15后细胞的CyPA明显上调表达。为研究CyPA在CSFV增殖中的作用,本研究首先采用环孢素A(CsA)处理PK-15细胞,特异性地抑制CyPA顺反异构酶活性,观察对CSFV的影响,在CsA处理后24 h、48 h、72 h收集细胞和细胞冻融上清,进行病毒基因组拷贝数和病毒滴度测定。结果表明CsA处理能够抑制CSFV在PK-15细胞中的增殖。同时,采用RNA干扰方法,下调PK-15细胞中CyPA的表达,结果也能够抑制CSFV在细胞中的增殖。本研究结果证明CyPA对CSFV在PK-15细胞中的增殖具有调控作用,对进一步阐明CSFV与宿主细胞蛋白的相互作用具有重要意义。     

H5N1禽流感病毒以巨胞饮作用侵入细胞的研究

流感病毒在体外感染细胞的过程中,是分别通过网格蛋白(Clathrin)和小窝蛋白(Caveolae)介导的两种内吞途径进入细胞内。为探索H5N1亚型禽流感病毒(AIV)侵入细胞的其他机制,本实验在胎牛血清存在的情况下,采用Dynasore抑制剂抑制网格蛋白和小窝蛋白介导的两种AIV侵入体外培养细胞途径,然而AIV仍然可以感染A549人源肺癌细胞系。进一步实验结果显示,采用巨胞饮抑制剂5-(N-乙基-N-异丙基)阿米洛利(EIPA)能够完全抑制病毒的感染,确认巨胞饮作用是AIV侵入体外培养的另外一种途径。同时,AIV也可以通过巨胞饮作用侵入不同来源的DF1禽源细胞和MDCK犬源细胞。此外,分别具有与禽源受体、人源受体和禽源-人源双重受体亲和特性的3株流感病毒仍然能够通过巨胞饮作用感染A549细胞。受体特异性试验表明,去除细胞的唾液酸受体后,病毒则不能够感染体外培养的细胞,表明唾液酸受体在巨胞饮作用的病毒侵入方式中仍然具有关键作用。本实验结果证明,巨胞饮作用是流感病毒侵入细胞的另外一种途径。该结果将有助于进一步研究流感病毒的感染机理。     

鸡毒支原体热休克蛋白GrpE粘附特性的鉴定

鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株grp E基因,并利用表达纯化的重组蛋白GrpE(rGrpE)免疫BALB/c小鼠。制备抗GrpE的单克隆抗体(MAb)。通过亚细胞定位,结果显示GrpE定位于细胞表面。通过激光共聚焦显微镜观察到rGrpE对DF-1细胞具有明显的粘附作用,而且利用抗GrpE的MAb能够特异抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附。此外,夹心ELISA和流式细胞术试验结果也表明制备的MAb能够显著抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附,并呈剂量依赖关系。上述结果表明热休克蛋白GrpE是MG的一种新的具有粘附特性的蛋白。     

马立克氏病病毒CVl988株VP22蛋白承载异源蛋白细胞间扩散

马立克氏病病毒(MDV)被膜蛋白VP22被证实能在细胞间高效转导,为了进一步证明VP22能够作为蛋白转运的载体,将4种不同的异源蛋白与MDV 1型(MDV-1)CVl988/Rispens株VP22蛋白融合表达,通过观察这些融合蛋白的细胞定位以及它们的细胞间扩散能力来研究VP22转运蛋白的情况.结果发现,禽流感病毒(AⅣ)核蛋白(NP)、牛γ干扰素(BoIFN-γ)及新城疫病毒(NDV)F蛋白能够被MDV-1 VP22转运,而鸡法氏囊病病毒(IBDV)蛋白VP2不能被MDV-1 VP22转运,上述结果说明MDV-1 VP22蛋白能够作为蛋白转运的载体,但对所转运的蛋白具有选择性.     

朊蛋白,“天使”还是“魔鬼”

<正>朊蛋白(Pr P)是一种具有糖基化磷脂酰肌醇(GPI)的典型的膜结合型蛋白质,通过GPI与细胞膜表面糖基化位点结合,从而锚定在细胞膜表面,主要在神经元、神经小胶质细胞和脾脏中表达,称为细胞型朊蛋白(Pr PC),对促进神经元和胶质细胞的发育与成熟有重要意义。但是在哺乳动物体内,一些因素能够诱发导致这种正常的糖蛋白发生空间构象转变,形成能够引起神经退行性疾病的朊病毒(Prion),即     

温度对新城疫灭活病毒血凝效价的影响

<正>新城疫病毒粒子呈球形,有包膜,病毒包膜上有2种糖蛋白突起和1种基质蛋白,其中一种糖蛋白突起在病毒中有血凝素和神经氨酸酶活性,称为血凝素神经氨酸酶(HN)。HN具有吸附作用,能够通过血凝素与敏感细胞表面的唾液酸受体结合,而使病毒吸附在细胞表面,也能够通过神经氨酸酶活性介导病毒粒子表面的唾液酸切除,防止因病毒粒子在细胞表面出芽时产生自我聚集[1]。血凝素(HA)在决定病毒     

精清诱导CD4~+CD25~+T调节细胞限制早期妊娠免疫应答的研究进展

精清作为受精过程中重要的物质组成部分,不仅在公畜生殖道内具有保护成熟精子的作用,还能够在受精卵发育早期限制子宫内的免疫应答反应,使妊娠过程正常完成。精清中含有妊娠母体的免疫抑制因子TGF-β(转录活性因子β)、PGE2(前列腺素E)等能够诱导CD4+CD25+T调节细胞的激活和增殖。CD4+CD25+T调节细胞是唯一一类能抑制细胞免疫应答的T细胞,它能够调节妊娠早期的免疫耐受,影响胚胎的正常发育、后代的代谢表型以及疾病的发生。     

新城疫病毒侵入鸡巨噬细胞的新途径：小窝蛋白介导的内吞通路

正新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是在世界范围内严重威胁家禽养殖业的重要病原。NDV属于副黏病毒家族中的代表性成员,是一种具有囊膜的单股、负链RNA病毒。对于副黏病毒来说,病毒囊膜与细胞膜融合,通常能够利用宿主细胞的内吞通路侵入细胞。但近年来研究发现,除了在细胞表面完成膜融合这一经典侵入途径之外,副黏病毒同样能够劫持宿主细胞的内吞通路进入细胞。     

人参浸出液对铅暴露鲤鱼卵巢细胞减毒作用研究

本研究旨在探讨人参浸出液(Rs)对铅暴露鲤鱼卵巢细胞(GCO)减毒作用。以GCO细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,以0.01 mmol/L Pb预处理细胞1 h后,添加不同浓度人参浸出液(2%Rs、4%Rs、6%Rs、8%Rs)进行治疗后,在12、24、48 h检测细胞活性;48 h检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)指标和金属硫蛋白基因(MT)相对表达量。结果表明,不同浓度Rs添加能够提高GCO细胞活性;不同浓度Rs添加能够缓解Pb诱导GCO细胞毒性,显著提高抗氧化能力(SOD、CAT、GSH-Px),调节MT基因表达,4%Rs添加时最佳。综上所述,不同浓度Rs能够缓解Pb诱导GCO细胞毒性,4%Rs添加时最佳。     

转移因子的组成和作用机制研究

转移因子(Transfer Factor,TF)是白细胞中具有免疫活性的T淋巴细胞所释放的一类可透析和传递"信使"小分子物质,它携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息,在受者体内能够诱导T细胞转变为致敏性淋巴细胞,并能够特异地将供者的细胞免疫力被动的转移到受者体内,使受者获得细胞免疫功能,即转移和扩大细胞免疫力。     

糖原合成激酶抑制剂在胚胎干细胞自我更新中的作用

胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)是从早期囊胚内细胞团分离培养出来的能够不断维持自我更新和具有发育多能性的细胞。Wnt信号通路在维持胚胎干细胞的自我更新方面起着重要作用,糖原合成激酶 (glycogen synthase kinase-3,GSK-3)抑制剂可以激活Wnt信号通路,促进胚胎干细胞自我更新和增强细胞间连接。作者就GSK-3抑制剂在胚胎干细胞自我更新、细胞连接方面的作用及其作用机制进行简单综述。     

T细胞抗原表位研究方法的进展

表位(epitope)又称抗原决定簇(antigenic determinant),是指存在于抗原分子表面的能够决定抗原特异性的数个氨基酸残基组成的特殊序列及其空间结构。根据与抗原受体结合不同分为B细胞(识别)表位和T细胞(识别)表位。 T细胞表位就是抗原蛋白中经抗原提呈细胞(antigenprocessing cell,APC)处理,由MHC分子提呈给T淋巴细胞受体的多肽片段。确定T细胞表位,对于研究细胞免疫的机理、过程及研制亚单位多肽疫苗和基因疫苗具有重要的意义。目     

新RGD嵌合体肽对黑色素瘤细胞B16增殖及其黑色素合成的影响

为研究新合成的靶向抗肿瘤肽RGD-T-La(S)、RGD-T-La(FS)对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖及其黑色素合成的影响,本研究将T-La (S)、T-La (FS)与RGD (精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸)小分子蛋白质偶联,合成新的靶向抗肿瘤肽RGD-T-La (S)、RGD-T-La (FS)。通过CCK8法检测多肽对B16细胞增殖的影响;微量酶标法检测多肽作用于B16细胞后乳酸脱氢酶(LDH)含量变化;透射电镜观察多肽作用B16细胞后的超微结构;流式细胞仪检测多肽对B16细胞周期的影响;NaOH裂解法和L-Dopa氧化法分析多肽对黑色素合成含量和酪氨酸酶活性的影响;荧光定量PCR (q-PCR)法分析多肽对黑色素合成关键因子酪氨酸酶(TYR)和小眼相关转录因子(MITF)基因转录水平的影响。结果显示,RGD-T-La(S)、RGD-T-La (FS)在10μg/mL时能够显著抑制B16细胞的增殖,且呈现时间浓度依赖性;RGD嵌合体肽在20μg/mL时能够显著增加B16细胞中LDH含量,且呈现浓度依赖性;透射电镜结果显示RGD嵌合体肽作用B16后,细胞出现自噬体及线粒体自噬现象;同时RGD嵌合体肽对酪氨酸酶活性和细胞黑色素蛋白的生成具有明显的抑制作用,显著降低TYR和MITF基因的转录水平。上述结果表明,RGD嵌合体肽在体外具有诱导细胞凋亡,抑制B16细胞增殖的作用,能够促进抗肿瘤肽T-La (FS)对肿瘤细胞的靶向杀伤作用。本实验为研究RGD嵌合体肽RGD-T-La (S)和RGD-T-La (FS)靶向抗肿瘤的作用机制以及为临床相关抗肿瘤药物的研发提供科学依据。     

褐藻多糖硫酸脂对小鼠免疫及抗日本乙型脑炎病毒的影响

为了研究褐藻多糖硫酸脂(fucoidan)对小鼠免疫及抗病毒调节作用,研究采用体内和体外试验研究褐藻多糖硫酸脂的免疫调节及抗日本乙型病毒(JEV)作用。结果表明:褐藻多糖硫酸脂能够促进脾脏淋巴细胞增殖,调节CD_4~+T细胞(CD_3~+ CD_4~+)/CD8T细胞(CD_3~+ CD_8~+)/B细胞(B 220+)亚群。说明褐藻多糖硫酸脂能够上调JEV灭活疫苗的抗体水平,同时促进Th1细胞因子IFN-γ及Th2细胞因子IL-4的表达。进一步研究发现褐藻多糖硫酸脂能够直接抑制JEV的复制。说明褐藻多糖硫酸脂具有潜在的抗病毒及免疫调节作用,可作为免疫增强剂及抗日本乙型脑炎的新型药物。     

鸡传染性喉气管炎病毒适应性细胞的筛选

为了克服鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗产品制备中存在的缺陷,通过对BHK-21细胞、Vero细胞、DF1细胞、原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、原代鸡胚肝细胞、原代鸡胚肾细胞等六种细胞进行病毒适应性培养,采用PCR和免疫荧光(IFA)跟踪检测的方法成功筛选出具有稳定病毒滴度的病毒适应性细胞——鸡胚肝细胞。然后采用新的克隆方法缩短了克隆时长并对筛选的鸡胚肝细胞进行克隆纯化,通过与原代鸡胚肝细胞进行比较,结果显示本试验所采用的克隆方法具有高几率的特点,并且能够克隆出高活性的鸡胚肝细胞,并能够繁殖较高效价的鸡传染性喉气管炎病毒,为解决鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗在生产上存在的瓶颈问题提供了重要的基础条件。     

H9N2亚型禽流感病毒细胞高产株的拯救

为构建能够在MDCK细胞中高水平复制的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗株,本研究在对病毒生长特性及HA基因遗传进化分析的基础上,筛选出一株细胞高度适应的国内流行株A/chicken/Shanghai/11/2011(H9N2) (SH11),并通过反向遗传操作技术拯救出全部基因均来自亲本株的AIV rSH11株.生物学试验结果表明rSH11在鸡胚半数感染量(EID50)、组织培养半数感染量(TCID50)、遗传稳定性等方面均与亲本株保持一致,rSH11经MDCK细胞连续传5代后血凝价稳定在1∶1024,表明该病毒株具有细胞高度增殖的特性.采用rSH11株制备油乳剂灭活苗免疫4周龄SPF鸡,免疫一周即可以检测出HI抗体,免疫3周后HI抗体平均效价高于1∶700,表明其具有良好的免疫原性.rSH11疫苗对不同的H9N2病毒株能够产生良好的免疫保护作用,显著抑制免疫鸡排毒.H9N2亚型AIV细胞高产株的拯救为该亚型AIV细胞苗的研制奠定了基础.     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞，通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力，进而对血清质量作出评价。结果表明，自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96)，并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05)，具有较好的重复性；而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

树突状细胞免疫功能的研究进展

树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是因其成熟的细胞具有许多树突样或伪足样突起,被命名为树突状细胞[J].目前,DC是所知体内抗原提呈功能最强的专职抗原提呈细胞(Antigen-presenting cell,APC)[2].近些年,随着对DC分布、发育和功能等方面研究的不断深入,人们发现DCs在免疫系统中具有独特的地位,与其他APC相比,其主要特点是能够刺激初始T细胞活化和增殖,而其他的APC仅能刺激以活化的或记忆性T细胞,因此DC能够促进固有免疫发生和启动获得性免疫.此外,DC还广泛参与肿瘤、感染、自身免疫性疾病的发生和发展,近年来已受到广泛的关注和重视.