太子参参须皂苷对免疫抑制小鼠免疫调节作用研究

为了研究太子参参须皂苷(Pseudostellaria heterophylla fibrous root saponins, PHFRS)对免疫抑制小鼠免疫调节作用的影响,试验将80只雄性ICR小鼠随机分为5组,即空白对照(CK)组、环磷酰胺(CTX)组和PHFRS低剂量(L-PHFRS,50 mg/kg)、中剂量(M-PHFRS,100 mg/kg)、高剂量(H-PHFRS,200 mg/kg)组。第1～3天,采用腹腔注射法对CK组注射生理盐水,其余组均腹腔注射CTX(按体重80 mg/kg)。第4～17天,PHFRS各剂量组分别灌服相应剂量PHFRS,CK组、CTX组灌服等量纯化水。第18天采样,采用MTT法检测小鼠脾T、B淋巴细胞增殖情况,计算刺激指数(SI),采用免疫比浊法检测血清免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)、补体(C3、C4)含量,采用ELISA法检测血清细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α)含量。结果表明：与CK组相比,CTX组T淋巴细胞SI、IgM含量均显著降低(P<0.05),B淋巴细胞SI及IgA、C3、C4、IL-4含量均显...     

氨基多糖纳米微粒对RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β影响的试验

为了研究氨基多糖纳米微粒(CNP)对巨噬细胞株RAW264.7分泌细胞因子TNF-α、IL-1β的影响,以巨噬细胞株RAW264.7为腹腔巨噬细胞模型,分别用CNP作用RAW264.7细胞12 h、18 h及24 h后,运用酶联免疫法(ELISA),测定细胞培养液中细胞因子TNF-α、IL-1β的变化。结果:CNP有明显的提高巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β的作用。表明CNP对巨噬细胞的免疫功能具有促进作用。     

布鲁菌感染小鼠RAW264.7细胞对IRG1基因的表达调控作用

针对小鼠RAW264.7细胞IRG1基因设计4个RNA干扰靶位,筛选出最佳干扰序列构建shRNA慢病毒载体质粒并包装获得慢病毒颗粒,进而经嘌呤霉素筛选获得稳转细胞系,实现IRG1基因在RAW264.7细胞基因表达的沉默。并通过布鲁菌16M株及M5株感染基因沉默细胞对IRG1基因在布鲁菌感染中的作用进行研究。结果表明,慢病毒介导的shRNA高效、稳定地沉默了IRG1基因的表达,布鲁菌侵染RAW264.7细胞后IRG1基因表达上调。本试验为IRG1基因及相关调控基因抗布鲁菌病作用研究奠定了基础。     

VDAC1参与调控BCG感染RAW264.7细胞凋亡

旨在研究电压依赖性阴离子通道(voltage dependent anion channel1,VDAC1)对卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin, BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的调控作用及其机制。设计并合成VDAC1的小干扰RNA(si-VDAC1)转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后,再用BCG感染。后续采用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位及细胞内ROS水平,进而通过实时荧光定量PCR和Western blot检测凋亡相关因子Cyt C、Caspase-3、PARP1、Caspase-9基因(mRNA)及其蛋白的表达。随后,通过使用VDAC1寡聚抑制剂VBIT-4对RAW264.7进行孵育2 h后感染BCG,并采用免疫荧光染色技术观察Caspase-3和Western blot检测凋亡相关因子Cyt C、Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP1、Cleaved-Caspase 9的含量变化。BCG感染巨噬细胞12 h后,与对照相比,BCG感染后小鼠巨噬细胞存活率约下降至50%,而...     

结核分枝杆菌Rv2626c蛋白对RAW264.7细胞凋亡的影响

试验旨在研究结核分枝杆菌Rv2626c蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响。根据GenBank数据库中结核分枝杆菌Rv2626c基因序列设计引物,并以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv cDNA为模板,PCR扩增Rv2626c基因并克隆至慢病毒表达载体pLEX-EGFP中,包装慢病毒并感染RAW264.7细胞,使用Western blotting和流式细胞仪技术检测Rv2626c蛋白表达水平和RAW264.7细胞凋亡率变化。结果显示,成功构建慢病毒表达载体pLEX-EGFP-Rv2626c;成功包装慢病毒并感染RAW264.7细胞;Rv2626c蛋白在RAW264.7细胞中高水平表达显著促进了细胞凋亡。本试验结果表明,在RAW264.7细胞中过表达结核分枝杆菌Rv2626c蛋白能显著性增加其凋亡水平。     

AEE对RAW264.7细胞中iNOS表达及NO合成的影响

为了探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响,试验首先采用CCK-8法检测细胞存活率,采用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,采用实时荧光定量PCR扩增、免疫荧光技术和Western-blot技术测定iNOS mRNA和蛋白的相对表达量,最后通过硝酸盐还原酶测定法测定NO含量。结果表明：AEE和ox-LDL对RAW264.7细胞没有毒性。利用80μg/mL的ox-LDL可成功诱导RAW264.7细胞泡沫化,建立泡沫细胞模型,并且AEE可明显抑制细胞内脂滴的形成。ox-LDL可极显著上调细胞中iNOS mRNA及蛋白的相对表达量(P<0.01),并且极显著增加了细胞内NO含量(P<0.01)。经AEE预处理的RAW264.7细胞中iNOS mRNA及蛋白相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞内NO含量也极显著减少(P<0.01)。说明AEE可通过抑制iNOS的表达降低NO的合成,缓解RAW264.7细胞泡沫化,进而发挥抗...     

太子参参须多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用研究

为研究太子参参须多糖(RPFRP)对免疫抑制小鼠功能的影响,腹腔注射环磷酰胺(CY)建立免疫抑制模型小鼠,灌胃RPFRP,称量计算器官指数(脾指数和胸腺指数),碳粒廓清法测定巨噬细胞功能,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测细胞因子含量。结果显示,RPFRP能下调免疫功能低下小鼠的脾脏指数,上调胸腺指数、碳粒廓清指数K和细胞因子IL-2、IFN-γ含量。说明RPFRP能通过改善免疫器官指数、巨噬细胞吞噬功能、特异性细胞免疫和体液免疫功能,增强免疫功能低下小鼠的免疫功能。     

太子参参须提取物对小鼠血清免疫指标和抗氧化指标的影响

研究太子参参须提取物(RPFRE)对小鼠血清免疫指标和抗氧化指标的影响。将40只雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、RPFRE低剂量组(100 mg/kg)、RPFRE中剂量组(200 mg/kg)和RPFRE高剂量组(400 mg/kg),给空白对照组小鼠灌胃蒸馏水,给RPFRE组小鼠分别灌胃相应剂量的RPFRE,连续2周。第15天,采集小鼠血液,检测血清抗氧化指标(T-AOC、SOD、MDA)和免疫指标(免疫球蛋白IgG、IgM、IgA及补体C₃、C₄)。结果显示,与对照组相比,RPFRE高剂量组小鼠IgG含量、低剂量组IgM含量、中剂量组补体C₃含量均显著升高(P<0.05);3个剂量RPFRE组T-AOC极显著升高(P<0.01)。说明RPFRE能不同程度提高小鼠免疫功能和抗氧化功能。     

BCG诱导RAW264.7细胞脂肪酸氧化对细胞自噬和促炎因子表达的调控作用

旨在探究脂肪酸氧化（fatty acid oxidation,FAO）对BCG介导的RAW264.7细胞自噬和促炎因子表达的调控作用。用BODIPY染色和游离脂肪酸定量试剂盒检测BCG感染后RAW264.7细胞中脂滴聚集情况以及脂肪酸含量;Western blot检测BCG感染对肉毒碱棕榈酰基转移酶1A （CPT-1A）表达的影响;Etomoxir （100 μmol·L^-1）预处理细胞2 h后,BCG感染细胞6 h,检测RAW264.7细胞中BCG存留量,并用Western blot方法检测自噬相关蛋白（Beclin1、LC3-II）和溶酶体蛋白（Rab7）的表达情况;用免疫荧光方法和mRFP-GFP-LC3荧光双标腺病毒分别检测自噬小体聚集和自噬流;荧光定量PCR和ELISA分别检测促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达情况以及在细胞培养上清中的含量。结果显示,BCG感染促进RAW264.7细胞中脂滴聚集和CPT-1A的表达,而游离脂肪酸含量降低;Etomoxir预处理抑制了细胞中BCG存活,并上调了Beclin1、LC3-II和Rab7表达,且细胞中出现大量自噬小体聚集,自噬流增强,却抑制了促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达与分泌。综上表明,抑制FAO可促进BCG感染诱导的RAW264.7细胞自噬,并抑制BCG感染引起的炎症反应。     

人参多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞的免疫调控作用

本试验旨在研究脂多糖(LPS)刺激条件下人参多糖(GPS)对小鼠单核巨噬细胞形态及免疫功能的调节作用.采用LPS刺激小鼠巨噬细胞(RAW264.7),通过测量不同浓度(1、0.5、0.1 mg/mL)GPS对细胞形态、生物酶活性、促炎症因子分泌及TLR4/NF-κB信号通路mRNA表达量的影响来研究不同浓度的GPS对L...     

结核分支杆菌Rv2031c慢病毒载体的构建及其对RAW264.7细胞凋亡的影响

研究结核分支杆菌Rv2031c基因对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响。根据GenBank数据库中结核分支杆菌Rv2031c的序列设计引物,以结核分支杆菌国际标准株H37Rv株灭活的菌液上清液为模版,扩增Rv2031c基因;克隆至慢病毒表达载体plex-EGFP中,经酶切和测序鉴定后,获得plex-Rv2031c-EGFP重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与辅助质粒共转染至293T细胞中,转染48h后收集慢病毒,并侵染RAW264.7细胞;侵染48h时收集细胞,用流式细胞术检测各试验组巨噬细胞的凋亡率;提取细胞总RNA并反转录成cDNA,PCR检测Rv2031c基因在细胞中的表达情况;同时,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白,Western blot检测Rv2031c蛋白表达水平。结果表明,成功构建了Rv2031c的慢病毒表达载体plex-Rv2031c-EGFP;构建了过表达Rv2031c的慢病毒Rv2031c-lv;感染Rv2031c-lv的RAW264.7细胞的凋亡率为41.8%,而对照组EGFP-lv感染的RAW264.7细胞其凋亡率为30.0%;PCR结果表明Rv2031c在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达;Western blot结果显示Rv2031c蛋白在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达。该研究成功构建了结核分支杆菌Rv2031c的慢病毒表达载体并验证了其对RAW264.7细胞凋亡的影响,为结核分支杆菌在机体内潜伏期感染的药物研究奠定了基础。     

布鲁氏菌OMP16对RAW264.7细胞凋亡与免疫活性的影响

旨在研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP16对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡和免疫活性的影响及其机制探讨。以OMP16处理RAW264.7细胞为模型,通过MTT以及Hoechst法检测OMP16对细胞活力的影响,通过Western blot检测Caspase-3、GRP78、CHOP的表达情况,流式细胞术检测OMP16对细胞凋亡的影响以及RT-PCR检测免疫因子IL-1β、IL-6和TNF-α的变化。结果表明,OMP16能够影响RAW264.7细胞的活力,且有浓度依赖性;添加OMP16后能够显著增加凋亡标志因子Caspase-3的表达（P<0.001）,并促进RAW264.7细胞的凋亡;作用24、36 h之后,显著引起内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP的表达;并且能显著上调IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子的mRNA表达水平。布鲁氏菌OMP16能够诱导RAW264.7凋亡,OMP16显著引起内质网应激CHOP通路的激活。     

TLRs介导的信号通路在马链球菌感染RAW264.7细胞中的作用

为探究Toll样受体(TLRs)介导的信号通路在马链球菌马亚种(S.equi)感染小鼠巨噬细胞RAW264.7中的作用,收集S.equi感染后不同时间点的RAW264.7细胞,提取总RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞Toll样受体1、2、6(TLR1、TLR2、TLR6)、接头蛋白骨髓分化蛋白88(MyD88)及细胞因子IL-1、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA的表达情况。结果显示,S.equi感染RAW264.7细胞后6h时,TLR1、TLR2、TLR6与MyD88mRNA水平均较对照组没有显著差异(P>0.05);感染后12h时,TLR1、TLR2和TLR6mRNA表达量未出现明显上升(P>0.05),而MyD88mRNA水平极显著升高(P<0.01);感染后24h时,TLR1、TLR2和TLR6mRNA表达水平出现极显著升高(P<0.01),MyD88mRNA表达没有显著变化(P>0.05),且IL-10和IL-12mRNA水平与对照组相比极显著升高(P<0.01),IL-1、IL-6和TNF-αmRNA水平均极显著下降(P<0.01)。结果表明,TLRs介导的信号通路参与S.equi感染RAW264.7细胞的免疫应答反应。     

槐花多糖对小鼠免疫调节作用的试验

以槐花为试材,研究槐花多糖对小鼠的免疫调节作用。将槐花多糖用生理盐水配制成一定浓度的溶液,以腹腔注射的方法作用于小鼠,测定小鼠外周血和脾脏淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞活性和免疫器官指数等指标的变化。结果 1.0 m L/d的槐花多糖注射量可以显著促进小鼠外周血和脾脏淋巴细胞的增殖,提高小鼠巨噬细胞活性,并促进小鼠免疫器官的生长发育。     

辣蓼黄酮乙酸乙酯部分干预LPS诱导RAW264.7炎症反应机制

为探讨辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症反应的调节机制,采用不同剂量的FEA作用于LPS刺激诱导的RAW264.7炎症反应体外模型,测定细胞内iNOS、COX-2的表达水平和AMPK、ERK、P38、JNK、c-Jun及其相应蛋白磷酸化的水平.结果表明,80μg/mL的FEA预处...     

多糖的免疫调节作用与研究进展

动植物中存在着广泛的免疫活性多糖。近年来多糖在促进和调节机体免疫功能方面已有较大的进展,本文主要就多糖对免疫器官、免疫细胞、免疫分子、免疫信息等方面的调节作用作一综述。     

桑枝多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用

通过腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,给模型小鼠灌胃不同剂量的自制桑枝多糖,检测其免疫指标的变化情况。与正常对照组小鼠比较,模型对照组小鼠的脾脏指数、胸腺指数、腹腔巨噬细胞吞噬率与吞噬指数、淋巴细胞转化率、血清溶血素含量、溶血空斑形成数量均极显著降低(P0.01);与模型对照组(灌胃等体积8.5 g/L Na Cl溶液)小鼠比较,桑枝多糖高剂量[600 mg/(kg·d)]给药组小鼠的胸腺指数和脾脏指数以及高剂量、中剂量[400 mg/(kg·d)]给药组小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬率与吞噬指数、血清溶血素含量与溶血空斑形成数量均极显著提高(P0.01),中剂量组小鼠的胸腺指数以及高、中剂量组小鼠的淋巴细胞转化率均显著提高(P0.05)。试验结果表明,桑枝多糖能增强免疫抑制小鼠的免疫功能。     

真菌多糖免疫调节作用的研究进展

真菌多糖是主要存在于菌丝体细胞壁内、分泌于细胞外的高分子糖类化合物,一般都由10个分子以上的单糖通过糖苷键连接而成的高分子多聚物.真菌多糖是一种免疫调节剂,具有免疫调节活性,可通过多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用,通过激活T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞,增加这些细胞的数量,增强其细胞活性,促使其发挥作用.     

牛磺鹅去氧胆酸对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞凋亡的影响

为了探讨牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.10和10 μg/mL TCDCA可以极显著地对抗地塞米松（DEX）诱导的RAW264.7细胞系凋亡（P < 0.01）。1 μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1和XIAP表达有显著的促进作用（P < 0.05）;10 μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和 XIAP表达均具有显著的促进作用（P < 0.05）。TCDCA给药后对DEX诱导的RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和 XIAP表达均具有极显著的促进作用（P < 0.01）,但不同给药剂量的TCDCA作用有所差异。以上研究结果表明,TCDCA具有对抗DEX诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡作用,且与上调凋亡抑制蛋白mRNA表达有关。