穿心莲内酯影响猪链球菌生物被膜形成

旨在探究穿心莲内酯对猪链球菌生物被膜形成的抑制作用,为猪链球菌病的耐药性提供替代疗法。试验采用微量稀释法测定穿心莲内酯对猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);利用结晶紫染色(CV)和扫描电镜(SEM)检测穿心莲内酯对猪链球菌生物被膜形成的影响。结果表明:1)穿心莲内酯对猪链球菌的MIC和MBC分别为0.25和0.5mg·mL~(-1);2)扫描电镜观察可见阴性对照组细菌镶嵌于生物被膜中,而穿心莲内酯在亚抑菌浓度下(1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC)能使细菌生物被膜中的细菌数量和生物被膜形成量均减少,并呈剂量依赖性;3)luxS基因和毒力基因的RT-PCR检测显示亚抑菌浓度(1/2MIC、1/4MIC)的穿心莲内酯明显降低gapdh、sly、fbps、ef和luxS基因的转录,显著增加cps2J、mrp和gdh基因的转录;4)哈维氏弧菌生物发光法测定细菌培养液显示穿心莲内酯在亚抑菌浓度下(1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC)对猪链球菌AI-2信号分子的产生有抑制作用,呈剂量依赖性。穿心莲内酯亚抑菌浓度的干预可抑制猪链球菌生物被膜的形成,并且可致毒力基因表达水平差异。     

猪源支气管败血波氏杆菌对庆大霉素异质性耐药的研究

为分析临床分离的52株猪源支气管败血波氏杆菌(Bb)在纸片扩散法(K-B)药敏试验中出现的庆大霉素(GEN)异质性耐药(HR)情况，本研究采用微量肉汤稀释法检测52株Bb分离株对GEN的最小抑菌浓度(MIC)；采用K-B法检测分离株对GEN的敏感性；通过观察抑菌环内是否有菌落初步筛选疑似GEN HR菌株；采用菌落谱性分析法(PAP)测定初筛菌株的MIC与最大不抑菌浓度(MNIC)的比值，以及耐药亚群菌株的发生频率，验证初筛的HR菌株。结果显示：52株猪源Bb对GEN耐药的菌株占13.46%(7/52)，多数分离株的MIC值为2μg/mL～8μg/m L，对GEN表现为敏感或中介，占全部菌株的86.54%(45/52)，其中Bb48株的MIC为2μg/mL，抑菌环直径为16 mm属于GEN敏感菌株。通过观察纸片法药敏试验中的抑菌环内是否存在菌落，初步筛选对GEN HR的菌株。结果显示，有7株疑似HR菌株；PAP试验结果显示，6株疑似HR菌株的MIC/MNIC比值均小于8，为假阳性HR菌株，只有Bb48株的MIC/MNIC值为16且耐药亚群发生频率为1.3×10^-6，...     

亚抑菌浓度强力霉素或庆大霉素影响猪链球菌生物被膜形成和毒力因子表达的研究

为探究亚抑菌浓度(Sub-MIC)强力霉素或庆大霉素对猪链球菌(SS)生物被膜形成能力和毒力因子表达的影响,本研究采用96孔板法测定强力霉素或庆大霉素对SS的最小抑菌浓度(MIC)。利用结晶紫染色和活细胞计数法分别测定亚抑菌浓度(1/2 MIC、1/4 MIC、1/8 MIC和1/16 MIC)的强力霉素或庆大霉素作用下SS生物被膜形成能力、SS生长能力及其被膜内SS活菌数量;采用革兰染色观察亚抑菌浓度强力霉素(1/4 MIC和1/8 MIC)或(1/2 MIC和1/4 MIC)庆大霉素作用下SS分布情况;采用qRT-PCR检测亚抑菌浓度(1/4 MIC和1/8 MIC)作用下的SS毒力因子转录水平。结果显示:亚抑菌浓度强力霉素(1/2 MIC～1/16 MIC)或庆大霉素(1/2 MIC和1/4 MIC)均能够增强SS生物被膜形成能力(p0.001)和增加被膜内SS活菌数量(p0.001),且SS具有明显集聚成团现象;不同亚抑菌浓度强力霉素和庆大霉素均减缓了SS的早期生长速率,但随着培养时间延长,其生长特性恢复;1/4 MIC和1/8 MIC的强力霉素或庆大霉素均能够显著降低SS毒力因子cps、ef、sly、fbps、gdh和gapdh mRNA的转录水平(p0.01)。结果表明:亚抑菌浓度的强力霉素和庆大霉素均可以增强SS生物被膜形成能力并降低其毒力因子的转录水平从而形成持续性感染,本研究为抗生素在治疗或预防相关疾病中的正确应用提供参考依据。     

亚抑菌质量浓度的桂皮醛对金黄色葡萄球菌毒力因子的抑制作用

通过吸光度测量、免疫印迹等方法,在体外检测亚抑菌质量浓度的桂皮醛作用下金黄色葡萄球菌毒力因子产量的变化。结果显示,16~128 mg/L桂皮醛对金黄色葡萄球菌的多种毒力因子有抑制作用,且呈质量浓度依赖性。各剂量的桂皮醛作用后,α溶血素、肠毒素A、B和聚集因子的产量显著低于对照组(P0.05),而凝固酶的产量只在桂皮醛为64 mg/L和128 mg/L时才有降低(P0.05)。     

中药对鸡致病性大肠埃希菌的体外抑菌试验

为研究25种中药对秦皇岛地区鸡致病性大肠埃希菌(Escherichia coli)地方流行株QH1(O78)、QH2(O89)、QH4(O1)的体外抑菌效果,以E.coli标准株ATCC25922作为质控菌株。利用水提法制备中药药液,使终浓度为1g/mL;用平板琼脂打孔法和改良微量二倍稀释-平板法分别测定25种中药的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,金银花、黄连、乌梅、五味子4种中药对鸡致病性E.coli地方株极度敏感,抑菌圈直径在20.3mm~22.7mm之间,其MIC在15.65mg/mL~31.25mg/mL之间;其他药物对鸡致病性E.coli地方株有不同程度的敏感性,为鸡致病性E.coli地方株中药防治提供理论基础。     

喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌体外生物被膜形成能力的影响

采用微量肉汤稀释法测定3种喹诺酮类药物对21株嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),体外建立其生物被膜(BF),采用结晶紫法和扫描电镜的方法研究生物被膜的形成和结构,并观察喹诺酮类药物对生物被膜形成能力的影响。结果表明:喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌有较强的抑制作用,诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的抑菌率分别为90.5%,95.25%和85.7%,其中环丙沙星的抑菌作用最强,对21株菌的最小抑菌浓度均在0.7813μg/mL以下。21株嗜水气单胞菌均可在24～48 h内体外形成较为稳定的BF,但不同菌株之间形成BF的能力有所不同。嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物较为敏感,环丙沙星浓度在1倍MIC以上即可抑制嗜水气单胞菌生物被膜的早期形成,但细菌形成成熟的生物被膜后,较高浓度药物对生物被膜的影响不明显。     

广东省某大型养鸡场tet(X4)阳性大肠杆菌流行分布特征

2020年8月从广东省某大型养鸡场不同区域采集粪便、土壤、水体等样品共654份，进行替加环素耐药大肠杆菌的分离鉴定；PCR方法检测替加环素耐药大肠杆菌的tet(X4)基因；PFGE分型检测tet(X4)阳性大肠杆菌的克隆传播情况；采用琼脂二倍稀释法和肉汤二倍稀释法测定tet(X4)阳性大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC);接合转移试验检测tet(X4)水平传播情况。结果显示，共分离得到204株替加环素耐药大肠杆菌，检测出165株tet(X4)阳性大肠杆菌，检出率为25.23%(165/654)。根据菌株来源和分离率，挑选72株进一步研究tet(X4)阳性大肠杆菌在该养鸡场的流行特征。PFGE分型将72株tet(X4)阳性大肠杆菌分为39个簇，表明该养鸡场无明显克隆传播现象。tet(X4)阳性大肠杆菌对替加环素的MIC范围为8～16 mg/L,且表现多重耐药表型，对四环素、多西环素、米诺环素、氨苄西林、氟苯尼考均表现高水平耐药，而对黏菌素、美罗培南均敏感。接合转移试验表明，tet(X4)阳性大肠杆菌主要位于IncHI1型质粒上(93.06%)。结果表明，tet(X4)基因在该养殖场主要随In...     

gltS基因缺失对禽致病性大肠杆菌生物学特性的影响

为研究谷氨酸转运蛋白GltS编码基因对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响，本研究利用λ-Red同源重组方法构建APEC CE129(WT)株gltS基因缺失株CE129ΔgltS(KO)和基因回补株CE129ΔgltS/gltS (RS)，并均经PCR及测序鉴定，结果显示，gltS基因缺失株及回补株均正确构建。通过连续10 h测定各菌株OD600nm值绘制WT、KO、RS菌株的生长曲线，利用梅里埃自动生化鉴定系统测定3株菌的生化特性；利用K-B纸片法检测3株菌对8类16种药物的敏感性；利用半固体培养基检测3株菌的运动能力。结果显示，3株菌的生长特性、生化特性、药敏特性和运动能力均无明显差异。利用细菌平板计数法计算检测WT与KO菌株的体外竞争指数(CI)，分析KO菌株是否致弱。利用结晶紫染色法测定3株菌的生物被膜(BF)的形成能力，并利用刚果红琼脂板及含荧光增白剂的琼脂板分别检测菌株BF中curli菌毛及纤维素的形成情况。结果显示，WT与KO菌株的体外CI为0.32，表明KO菌株轻度致弱。BF形成能力检测结果显示，相对于WT、RS菌株，KO菌株BF的形成能力极显著降低(P<...     

不同种类中药废弃物和中药复方的体外抑菌试验

为了寻找更为安全高效的动物替抗药物，本试验以3种中药复方和7种中药废弃物为材料，采用K-B纸片法检测抑菌圈直径、二倍稀释法检测最低抑菌浓度(MIC)、平板涂布法检测最低杀菌浓度(MBC),综合评价所选药物对大肠埃希菌、肠炎沙门菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果。试验结果显示：9种药物(除清开灵药渣外)都对金黄色葡萄球菌具有显著的抑菌和杀菌作用，其MIC和MBC值在3.91～125 mg/mL范围内，为金黄色葡萄球菌中度到高度敏感药物；中药复方1和中药复方3对大肠埃希菌的MIC值分别为125 mg/mL和62.5 mg/mL,表现为中度抑大肠埃希菌；忍冬藤和中药复方1对肠炎沙门菌的MIC值都是125 mg/mL,为肠炎沙门菌中度敏感药物。试验结果表明，3种中药复方和6种中药废弃物(除清开灵药渣外)可开发成防治金黄色葡萄球菌感染性疾病的药物，中药复方1和中药复方3可预防和治疗禽畜大肠埃希菌感染，而中药复方1和忍冬藤可防治畜禽因感染肠炎沙门菌引起的病症。     

不同配方山苍子精油溶液剂的抑菌效果评价

通过气质联用的方法检测了山苍子精油中的主要活性成分柠檬醛的含量,并且通过山苍子精油原油的抑菌圈试验,考察了山苍子精油原油对菌金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠埃希氏菌(8099)和白色念珠菌(ATCC 10231)的抑菌效果.通过考察辅料的溶解度,配制了6种不同配方的山苍子精油溶液剂.用最小抑菌浓度(MIC)方...     

cpxR基因对大肠杆菌E41株生物学特性及生物被膜形成的影响研究

为研究双组份系统cpxR基因缺失对大肠杆菌临床分离野生株E41生物学特性的影响、培养条件与其生物被膜(BF)形成能力的关系及黄芩苷对BF的清除作用，本研究以野生株E41、缺失株E41ΔcpxR、回补株E41ΔcpxR/pcpxR为对象进行试验。比较3株菌的生长特性，结果显示三者生长曲线无显著性差异。比较3株菌的运动性，结果显示E41ΔcpxR的游泳运动和群集运动能力弱于野生株及回补株。采用平板计数检测3株菌的抗鸡血清杀菌能力，结果显示E41ΔcpxR株抗鸡血清杀菌能力弱于野生株及回补株。采用微量肉汤稀释法检测菌株的药物敏感性，结果显示与野生株和回补株相比，卡那霉素、阿米卡星和环丙沙星对缺失株的MIC降低1/2，但氟苯尼考对其MIC升高了2倍。采用结晶紫染色法检测不同成膜载体和培养温度对BF形成的影响，结果显示3株菌均在硅胶载体上的BF形成能力最强，但25℃条件下适于E41和E41ΔcpxR/pcpxR株BF的形成，37℃条件下则更适于E41ΔcpxR株BF的形成。采用平板计数法检测黄芩苷对BF的清除作用，结果显示，不加黄芩苷的空白对照组，E41和E41ΔcpxR/pcpxR株在试验起始...     

黔中金荞麦活性物质提取工艺优化及提取物抑菌活性研究

为优化贵州地区优质牧草黔中金荞麦活性物质的提取工艺，并探究提取物抑菌活性，试验通过回流法、超声法、水煮法及鲜样榨汁法对黔中金荞麦地上部分和地下部分进行提取，通过打孔法检测各提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌效果，确定提取方法；利用高效液相色谱法(HPLC)检测提取物中的有效物质含量，对溶液浓度、料液比、提取温度进行优化，设置正交试验确定最优提取工艺。以微量肉汤二倍稀释法检测在最佳提取条件下提取的黔中金荞麦提取物对3种细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明：黔中金荞麦地下部分的70%乙醇超声提取物对3种细菌均有抑制作用，对金黄色葡萄球菌抑菌效果最好，抑菌圈直径为24.2 mm。最佳提取工艺为乙醇浓度50%,提取温度60℃,料液比1∶40。提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的MIC介于31.25～62.5 mg/mL之间，MBC介于为62.5～500 mg/mL之间；对金黄色葡萄球菌的抑制效果较好，MIC和MBC分别为31.25 mg/mL和62.5 mg/mL。说明黔中金荞麦地下部分醇提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌均具有抑制作用...     

地衣芽孢杆菌B38对产气荚膜梭菌的抑菌性能研究

试验旨在探究地衣芽孢杆菌38(Bacillus licheniformis 38,B38)对产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens,CP）的抑菌性能，以期为新型替抗产品的开发提供基础。采用抑菌圈法对48株芽孢杆菌经过两次筛选，获得一株对CP抑菌效果最好的芽孢杆菌，测定其最小抑菌效价、抑菌产物生成曲线、抑菌谱和代谢产物的稳定性，并通过硫酸铵沉淀法对抗菌物质进行粗提取。结果表明：B38对CP的抑菌圈直径最大可达31.14 mm，其发酵上清液的最小抑菌效价为64 AU/mL，主要对革兰氏阳性菌发挥抑菌作用；B38代谢产物的抑菌活性在6～<12 h呈指数增长，在12～<24 h保持稳定；B38代谢产物经胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K和过氧化氢酶处理后，抑菌活性均大于87.78%，对温度和pH具有良好的耐受性；B38代谢产物中的抑菌物质可以被80%硫酸铵完全沉淀，通过该方法获得的抗菌粗品的MIC为6.25 mg/mL。试验通过抑菌圈法筛选得到了一株对CP具有优良抑菌性能的菌株B38，其发酵产物对蛋白酶、温度和pH具有优良的耐受能力。     

单味中药水提物对鸡源耐药性E.coli地方株的体外抑菌活性研究

为了研究单味中药水提物对河北地区鸡源耐药性大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)地方流行株QH15(O_2)、QH16(O_(38))、QH17(O_(89))的体外抑菌活性。利用平板琼脂打孔法和改良微量二倍稀释法分别测定抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:诃子、五味子、五倍子、黄连、黄芩、苦参6种中药均对3株鸡耐药性E.coli地方株高度敏感,抑菌圈直径在15~24 mm之间,MIC在7.825 mg/mL~31.25 mg/mL之间,其他的药物存在不同程度的敏感性。     

利福昔明和精油对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的抑制作用

为了探究利福昔明、精油单独和联合应用对乳房炎源金黄色葡萄球菌(金葡菌)及其生物被膜形成的抑制作用,测定利福昔明、精油对9株金葡菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)和最低抑膜浓度(MBIC),棋盘法测定二者对金葡菌菌株S.a-2的联合抑菌指数(FICI),研究其对金葡菌菌株S.a-2生物被膜形成的作用。结果显示:利福昔明对金葡菌的MIC为0.016～4.00μg·mL~(-1),3种精油中,薄荷油的抑菌作用最强,MIC为0.16%～2.50%,且与利福昔明联合表现相加作用;利福昔明联合1/2 MIC、1/8 MIC薄荷油对金葡菌菌株S.a-2生物被膜形成的抑制率为90%和51%,极显著高于1/2 MIC、1/8 MIC薄荷油单独组(61%和37%)及利福昔明组(40%)(P0.01);利福昔明联合1/4 MIC薄荷油的抑制率为62%,极显著高于利福昔明组(P0.01),显著高于1/4 MIC薄荷油组(53%)(P0.05);利福昔明联合1/16 MIC的薄荷油的抑制率为44%,与1/16 MIC薄荷油组(41%)及利福昔明组差异不显著(P0.05)。结果表明:利福昔明、薄荷油单独作用对金葡菌菌株S.a-2生物被膜的形成有明显抑制,一定浓度的薄荷油与利福昔明联合应用对其有更强抑制作用。     

常用中草药对水产动物致病菌体外抑菌效果研究

试验旨在探讨黄柏、诃子、知母、苏木等常用中草药对水产动物致病菌的体外抑菌效果,为今后水产养殖细菌性疾病的防控提供参考。以美人鱼发光杆菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌临床分离株为试验菌株,以抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)及联合抑菌指数(FICI)作为检测指标,研究常用中草药对水产病原菌的抑菌活性。采用水提法提取中草药有效成分,并通过琼脂平板打孔法测定中草药对水产致病菌抑菌圈,微量肉汤稀释法测定中草药MIC和MBC及微量肉汤棋盘稀释法测定联合抑菌指数(FICI)。结果显示,16种中草药对水产致病菌具有不同程度的抑菌作用。药敏试验结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种水产致病菌均具有抑菌效果,抑菌圈直径在10.5~29.0mm之间,而4种病原菌对马齿苋均表现为耐药;MIC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MIC值为7.81~250.00mg/mL;MBC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MBC值为7.81~500.00mg/mL;联合抑菌试验结果显示,苏木与夏枯草、女贞子及青皮联用仅对美人鱼发光杆菌起到协同抑菌作用,对嗜水气单胞菌、创伤弧菌及哈维氏弧菌均无抑菌作用,女贞子和青皮组合仅对哈维氏弧菌抑菌作用为相加作用,该组合在抑菌效果上对其他病原菌表现为无关或颉颃作用,其他药物组合在抑菌效果上对4种病原菌则表现为无关或颉颃作用;联合抑菌圈测定结果表明,中草药联合使用对4种病原菌抑菌作用不一。本试验结果表明常用中草药对水产动物致病菌具有一定程度的抑菌作用。     

39味中药及其复方对鸡源禽致病性大肠杆菌体外抑菌试验研究

试验旨在筛选抑制鸡源禽致病性大肠杆菌（Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC）O78地方流行株的有效中药。采用打孔法测定39味中药及其复方对APEC的抑菌效果,使用二倍稀释法测定其最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果表明：39味中药中有9味中药对APEC有一定的抑菌效果,其中五味子、洛神花和黄柏对APEC高度敏感,MIC依次为31.25、31.25、500 mg/mL,MBC依次为62.5、125、500 mg/mL;蒲公英、红花和石榴皮中度敏感,MIC与MBC均大于或等于500 mg/mL;丹皮、何首乌和荷叶低度敏感;其余中药无抑菌效果。复方中五味子+洛神花配伍药效最好,MIC与MBC分别为31.25 mg/mL与125 mg/mL。说明在39味中药中五味子、黄柏、洛神花和复方五味子+洛神花（1∶1）对APEC有比较好的体外抑菌能力。     

中草药及复方制剂对3种致病菌及枯草芽孢杆菌J-4的体外抑菌研究

采用牛津杯法、琼脂板扩散法和比浊法,测定10种中药、2种方剂及复配制剂对3种致病菌及枯草芽孢杆菌J-4的体外抑菌效果,并测定中药最低抑菌浓度(MIC)。结果显示,黄连、黄柏对大肠杆菌抑制作用较强,MIC均为7.8 mg/mL;石菖蒲对沙门菌抑制作用最强,抑菌圈达16.53 mm,MIC为125 mg/mL;对痢疾杆菌,各单味中药抑制作用均较弱。太无神术散抑菌作用强于二妙丸,但均弱于复配制剂,对3种致病菌的MIC分别为3.9 mg/mL,7.8 mg/mL,7.8 mg/mL。黄连、生姜对J-4均表现为抑制作用,2%太无神术散对J-4增殖作用最明显,其他各药对J-4增殖作用因药物浓度不同而不同。     

5种中药提取物及其组合对嗜水气单胞菌的体外抑制作用

试验旨在探讨大黄、诃子、五倍子、黄连、黄芩5种中药及其组合对嗜水气单胞菌的体外抑制作用。试验测定了5种中药的水提物和醇提物对3株嗜水气单胞菌的抑菌圈、最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）及对嗜水气单胞菌生长的影响，采用棋盘交叉法测定了5种中药联合抑菌作用。结果显示，大黄和黄芩醇提物的抑菌圈显著高于其水提物（P<0.05），诃子和黄连水提物的抑菌圈显著高于其醇提物（P<0.05），五倍子水提物和醇提物抑菌圈大小相近。五倍子抗菌作用最强，其水提物和醇提物MIC为7.81～15.63 g/L，大黄醇提物和诃子水提物抗菌作用次之，MIC均为15.63～31.25 g/L。选择抑菌作用更强的提取物两两组合，五倍子水提物与其他4种中药提取物组合、大黄醇提物与黄连水提物组合均为协同作用；黄连水提物与黄芩醇提物组合为相加作用；大黄醇提物与黄芩醇提物、诃子水提物与黄连水提物组合均为无关作用；诃子水提物与黄芩醇提物组合为拮抗作用。研究表明，5种中药对嗜水气单胞菌均具有抑制作用，五倍子作用最强，五倍子水提物与其他4种中药提取物两两组合、黄连水提物与黄芩醇提物组合均可增强抗菌活性。     

石榴皮止泻散体外抑菌效果研究

为评价石榴皮止泻散的体外抑菌效果，将石榴皮止泻散制成水煎液，采用平板法进行体外抑菌试验，并采用试管稀释法测定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示，平板法体外抑菌试验中每1 mL含1 g生药的石榴皮止泻散水煎液孔周围有明显的抑菌圈，平均抑菌圈直径分别为14.0和15.7 mm;试管稀释法测定石榴皮止泻散对大肠杆菌的MIC为25 mg/mL,MBC为50 mg/mL。结论，石榴皮止泻散水煎液在体外对大肠杆菌具有抑制和杀灭作用。