一株新型大口黑鲈双RNA病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

为有效预防大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus, LBBV),实验针对LBBV保守基因VP1设计特异性引物,构建重组质粒pMD-LBBV-VP1,通过优化PCR反应条件,提高检测方法的灵敏度和特异性,建立了大口黑鲈双RNA病毒的巢式RTPCR检测方法,并采用该方法对实验室2017—2020年收集的304株样本进行检测。结果显示,巢氏引物F1/R1、F2/R2最佳工作浓度均为4×10~(-12) mol,最佳退火温度分别为64.1℃和61.5℃,当巢氏RT-PCR扩增35个循环时,可以检测质粒最低浓度为4.15个/μL拷贝数,最低模拟样品浓度为10~2 PFU/mL,与第1轮PCR相比,灵敏度均提高了10 000倍,同时检测9种不同病毒,仅LBBV出现明亮特异性条带,在304个样品中,第1轮PCR检出阳性样品14株,检出率为4.60%,巢式RT-PCR检出阳性样品28株,检出率为9.21%;本实验建立的巢式RT-PCR检测方法灵敏度高且特异性好,可用于LBBV的早期检测及防控。     

口蹄疫的检测方法与疫苗研究进展

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的急性接触性传染病.家畜中牛、羊、猪都敏感,其中牛最易感,人也可患病.由于猪、牛、羊等主要家畜均可感染此病,并能形成全球大规模流行,所以国际兽疫局(OIE)将该病列为A类家畜传染病之首.该病的发病率几乎达100%,但病程一般呈良性经过,死亡率只有2%～3%,犊牛及仔猪和恶性病型,死亡率可达50%～70%.除动物死亡造成直接经济损失外,动物在患病期间肉和奶的生产停止、病后肉和奶产量长期减少以及种用价值丧失也可造成较大的损失.最为严重的是由于该病传染性极强,对病畜和怀疑处于潜伏期的同群动物必须紧急处理,对疫点周围的广大范围必须隔离封锁,禁止动物移动和畜产品调运上市.因此导致该地区甚至该国家的畜产品进出口贸易停止,造成巨大的经济损失和政治影响.英国上一次大规模爆发口蹄疫是在1967年,当时有50万头牲畜被宰杀,经济损失1.5亿英镑.此次发现的口蹄疫使英国每天损失800万英镑,英国农民联合会的一项调查显示,大部分农民的收入在过去6年中下降了70%.     

应用PCR和RT-PCR技术对4种对虾病毒的检测

探讨了应用PCR和RT－PCR技术对4种主要的对虾病毒进行检测的方法。同时使用该方法检测了对虾天然饵料－－卤虫中的4种对虾病毒。结果显示，含病毒核酸的阳性对照样品分别扩增出了大小为824bp,705bp,260bp和216bp的预期产物，但未能从卤虫样品中检测到此4种病毒的存在。本文报道的病毒检测方法具有快速、灵敏、准确的特点，可以用于进出口贸易中对活体或冰冻对虾，虾苗，对虾饵料等进行相关对虾病毒的检疫，也为制定我国对虾病毒检疫检验规范提供了技术参考。     

应用免疫技术检测牙鲆组织内的淋巴囊肿病毒

应用免疫荧光抗体技术(IFAT)和标记链亲和素-生物素(LSAB)免疫组化法对患淋巴囊肿病牙鲆(Paralichthys olivaceus的肝、脾、肾、胃、幽门、肠、心脏、性腺、鳃、表皮10种组织进行了检测，结果发现体表有囊肿症状病鱼的胃、肠、鳃和表皮组织内有淋巴囊肿病毒存在；体表未见囊肿症状病鱼的胃、肠和表皮组织内也检测到了病毒，说明这两种免疫技术可以应用于牙鲆淋巴囊肿病的检测与诊断。同时本文还对淋巴囊肿病毒通过消化道感染的可能进行了探讨。     

鸡传染性支气管炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与初步应用

鸡支气管炎的大规模暴发和流行将导致养殖场雏鸡死淘率增加，产蛋鸡产蛋品质下降，产蛋量不足。要想最大化降低鸡传染性支气管炎暴发，基层兽医技术人员应该加大检测效率，快速、精准地检测阳性病例，便于后续消杀与净化，最大程度减少感染源，切断传染途径。基于此，总结荧光RT-PCR检测方法的建立与应用，旨在进一步提高鸡传染性支气管炎病毒的检出时效性和精准度。     

口蹄疫的流行及其病毒的细胞受体

口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起偶蹄兽的一种急性热性高度接触性传染病,其特征是口腔粘膜和蹄部、乳房皮肤发生水疱和烂斑。人也可以感染。口蹄疫病毒(FMDV)属小核糖核酸病毒科中的口蹄疫病毒属。目前已知全世界有A型、O型、C型、南非1(SATⅠ)、南非2(SATⅡ)、南非3(SATⅢ)和亚洲1(AsiaⅠ)7个血清型。各型之间的抗原性不同,彼此之间不能交互免疫。但各型的临床表现则相同。每个血清型又分若干亚型,现已知的亚型有70个以上,各亚型的免疫原性都有或多或少的交叉性,与主型有一定区别。人类感染以O型多见,C型…     

多重RT-PCR体系检测4种虾病毒的方法

根据多重RT-PCR的技术原理,利用对虾传染性表皮与造血组织坏死症病毒、白斑综合征病毒、黄头病毒和桃拉综合征病毒的基因序列分别设计了4对特异引物,建立多重RT-PCR体系用于虾4种病毒的检测。多重RT-PCR体系能特异地扩增出IHHNV、WSSV、YHV和TSV的目的片段:TSV特异性扩增片段508 bp,WSSV 特异性扩增片段435 bp,IHHNV 特异性扩增片段301 bp 和YHV。特异性扩增片段614 bp。结果表明,多重PCR虾病毒检测系统具有较高的特异性和敏感性,并对其它对虾病原呈阴性。IHHNV、TSV、WSSV和YHV模板在多重PCR虾病毒检测体系中的检测下限分别为0.1,1,0.02和0.2 pg。病毒感染病料检测试验中,该检测体系的检测结果与单纯PCR的检测结果呈现出较好的吻合度。     

虾类行动障碍野田村病毒(MDNV)TaqMan RT-PCR检测方法的建立与应用

基于虾类行动障碍野田村病毒(movement disorder nodavirus,MDNV)的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因设计寡核苷酸引物和探针,以含有MDNV靶基因的pMD18-MDNV质粒和RNA标准品为模板,通过优化反应体系和反应程序,建立了MDNV的TaqMan RT-PCR检测方法.优化后的反应...     

虾类行动障碍野田村病毒(MDNV)TaqMan RT-PCR检测方法的建立与应用

基于虾类行动障碍野田村病毒(movement disorder nodavirus,MDNV)的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因设计寡核苷酸引物和探针,以含有MDNV靶基因的pMD18-MDNV质粒和RNA标准品为模板,通过优化反应体系和反应程序,建立了 MDNV的TaqMan RT-PCR检测方法。优化后的反应组分:20.0 TaqMan RT-PCR反应液预混液中包含11.0μL一步法RT-PCR缓冲液、0.8μL酶混合物、0.3 μmol/L正向引物、0.3 μmol/L反向引物、0.4 μmol/L探针、1.0 μL模板和5.2 μL RNA-free H_2O;优化后的反应程序:54.5℃ 15 min,95℃ 1 min;45 个热循环扩增(95℃ 10 s,60.3℃ 30 s)。本研究所建立的方法能实现对MDNV的特异性检测,在1.4×10~(10)～1.4×10~1 copies/μL标准质粒浓度范围内,起始模板浓度对数值与反应循环数间呈良好的线性关系;该方法最低可检测5.5×10~1拷贝的RNA标准品或1.4×10~1拷贝的pMD18-MDNV标准质粒。分析结果还显示,该检测方法批内C_t值和批间C_t值的变异系数(CV)分别小于1.27%和1.83%,具有良好的重复性和稳定性。利用该方法对2019年采自我国部分省市的样品进行检测发现,凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中MDNV的阳性检出率为23.5% (16/68)。本研究建立的MDNVTaqMan RT-PCR方法具有特异性、快速和灵敏等特点,可为对虾养殖实践中MDNV的定性、定量检测与监测以及有效防控提供技术支持。     

牛口蹄疫防治技术刍议

口蹄疫是家畜与野生偶蹄动物常见的一种传染性疾病,传播速度快,感染率高,对动物健康造成巨大威胁,严重影响动物养殖业的持续健康发展。同时,口蹄疫的发生不仅严重威胁动物健康,同时还对病区居民造成严重影响,威胁公共安全。所以必须要加强口蹄疫防治研究工作,探寻有效的防控技术措施,控制和减少口蹄疫带来的危害。以牛口蹄疫为研究对象,对其防治技术进行分析探讨,希望为有关人员提供借鉴和参考。     

应用ELISA方法快速检测IHNV—B病毒

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)快速诊断病毒性疾病,由于具有灵敏度高、特异性强和简便等优点,已在医学和兽医学上得到了广泛的应用。在鱼类病毒检测方面,Dixon,P.F.和Hill,B.J.用ELI-SA方法(1983)快速检测传染性胰脏坏死症病毒(IPNV)和(1984)几种鱼类弹状病毒,江育林等(1990)曾报道用此技术快速检测IPN病毒,1990年在我国本溪虹鳟鱼苗中分离出一株弹状病毒,暂称之为传染性造血器官坏死症病毒中国本溪株(IHNV-B),由于该病毒对虹鳟(rainbow trout)鱼苗危害极为严重,为预防和控制其蔓延,本文报道了应用ELISA方法对感染的鱼苗、鱼卵和细胞培养物中的IHNV-B病毒进行快速检测,可用目测或酶标检测仪来判定结果。     

适度规模猪场及农村散养猪口蹄疫综合防治技术

<正>口蹄疫(Foot and Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病,世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物传染病,我国规定为一类动物疫病,属人畜共患疫病,对养猪业危害很大。     

PCR技术在水产养殖动物细菌性病原检测中的应用

近年来PCR技术的迅速发展，带动了水产病原的检测技术不断向着快速、准确的方向发展。文章回顾了PCR技术在水产养殖动物细菌性病原检测中应用，并对水产养殖细菌性疾病诊断技术的发展方向作了展望。     

应用PCR检测太湖青虾白斑病毒和桃拉病毒

白斑综合征和桃拉综合征是严重危害虾类养殖业的两种传染性疾病,病原的快速检测是控制疾 病暴发,减少病害损失的有效方法之一。青虾是太湖地区的主要养殖虾类,本实验应用白斑病毒和桃拉病毒 复合式试剂盒,对太湖附近的青虾进行检测,结果未发现太湖青虾感染或携带这两种病毒。     

规模猪场如何防制猪口蹄疫

<正>口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物(猪、牛、羊、骆驼、鹿等)一种急性、热性、高度接触性传染病。该病被国家列为一类传染病,只能预防,不能治疗。1病原为口蹄疫病毒,现已知的有7个主     

鸡传染性支气管炎病毒血清学和分子生物学检测技术研究进展

鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)是一种致病性较强的病毒，不仅严重损害鸡的呼吸道，还会对其他器官造成影响，早发现、早治疗是防治该病出现大规模传播的重要手段。为了更好地防治该病，研究者们一直致力于建立快速准确的检测技术，特别是在血清和分子水平上。对传染性支气管炎(infectious bronchitis, IB)实验室检测技术的相关研究和优缺点进行了综述。在实际检测过程中，应结合具体情况，选择正确的方法，确保测试结果的准确性。     

一种检测鳜鱼病毒方法

<专刊>= <栏目>=研究简报 <图片>=N <表格>=N <连载>= <来源>= <中图分类号>= <主题分类>= <行业分类>= <本刊专题>= <本刊编号>= <基金项目>= <注释>= <参考文献>= <责任编辑>= <备注1>= <备注2>= <备注3>= <正文>=     

动物源性食品安全检测技术探析

当前，在乡村振兴背景下，我国养殖业迅猛发展，动物源性食品供给量逐年提升，但随之而来的激素、抗生素、兽药、添加剂等安全问题层出不穷，因此做好动物源性食品安全检测极为重要。主要探究了动物源性食品安全检测技术，并以贵州地区兽药检测实践为例，总结食品安全检测技术应用措施，旨在为各界提供更加方便、高效且准确的检测方法。     

猪口蹄疫的综合预防

<正>口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的以患病动物的口、蹄部出现水疱性病症为特征的传染性疫病。口蹄疫的特点是起病急、传播极为迅速。除通过感染动物污染的固性物传播外,还能以气溶胶的形式通过空气长距离