用地高辛标记核酸探针检测鹅细小病毒的研究

从带有鹅细小病毒(GPV)NSI基因的重组质粒pMD18T-NS1用限制性内切酶EcoRI和BamH1双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0．01pg／μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交,而与对照的DPV、GPPV等病毒的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对GPV的最低检出量为0．0224pg。该探针对不同方法处理的GPV感染病料进行检测,均出现杂交阳性。表明所研制的标记探针用于GPV的检测足可行的。     

用地高辛标记核酸探针检测猪细小病毒的研究

根据猪细小病毒(PPV)基因组序列,设计引物克隆了PPV YK株保守序列NS1基因,将NS1基因纯化,利用地高辛标记制备了NS1基因PCR产物探针和克隆NS1探针,两种核酸探针的标记都达到了0.1 pg/μL。特异性试验结果表明,这两种探针都能与PPV DNA发生特异的阳性杂交,而与对照的PRV、PCV、PRRSV和HCV的核酸杂交呈阴性。敏感性试验结果表明,克隆NS1探针敏感度为0.5 pg/μL,NS1基因PCR产物探针敏感度为1 pg/μL。综上所述,这两种DIG标记探针特异性强,敏感性高,可用于PPV的检测。     

探针检测鸭黄病毒的地高辛标记DNA的制备与应用

利用RT-PCR方法扩增鸭黄病毒的NS3基因406bp的特异性片段,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备核酸探针。特异性试验结果表明,该探针仅与鸭黄病毒的核酸特异性杂交,而与鸭瘟病毒、H9N2禽流感病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒的核酸杂交均为阴性。敏感性试验表明,该探针对鸭黄病毒的RNA最低检出限量为100μg/L。对疑似黄病毒感染鸭的肝脏、肺脏、脾脏、输卵管、卵泡膜和泄殖腔棉拭子进行检测,以卵泡膜的检出率最高。该研究为鸭黄病毒感染的诊断和流行病学调查提供了一种可靠的方法。     

用地高辛标记的核酸探针检测猪伪狂犬病毒野毒感染的研究

利用PCR技术从带有伪狂犬病毒（PRV）gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRVBartha-k61株疫苗毒DNA、猪细小病毒（PPV）DNA、猪圆环病毒（PCV）DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRsV）cDNA、猪瘟病毒（CSFV）cDNA的杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对PRV野毒的最低检出量为4pg。应用该探针对11份繁殖障碍病料进行了杂交检测,共检出4份阳性病料,该结果与PCR检测结果一致,表明该核酸探针可用于猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断。     

鸭圆环病毒核酸探针的制备与应用

用地高辛标记鸭圆环病毒（DuCV）全基因组克隆制成核酸探针,与鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒（DHV-Ⅰ）的cDNA、鸭瘟病毒（DPV）的DNA和DuCV的DNA进行斑点杂交以检测核酸探针的特异性,结果该探针只与DuCV的DNA杂交呈阳性。敏感性结果表明,该探针对DuCV的最低检出量约为5PgDuCV的DNA。应用该探针对从山东、江苏、四川等地采集的196只鸭病料,共980份脏器的组织DNA进行检测,结果个体阳性率为33．2％（65／196）,在各脏器中法氏囊和肝脏中DuCV检出率较高,检出率分别为52．3％和49．2％。同时对上述样品进行PCR检测,核酸探针检测与PCR检测2种方法的符合率为87．5％。结果表明,制备的DIG标记的核酸探针特异性强、敏感性高,适合对DuCV进行诊断和流行病学调查。     

2020年秋冬季四川省内江市无害化处理病死猪5种病毒核酸检测

为了解2020年秋冬季内江市病死猪中猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪瘟病毒(CSFV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)5种病毒感染情况,在14个病死畜禽无害化处理收集点,采集108份病料样品,采用荧光PCR/RT-PCR方法进行5种病毒核酸检测。结果显示:PCV-2、PRRSV、PCV-3、CSFV的核酸检出率分别为44.4%、33.3%、12.9%、7.4%,未检出PRV核酸;双重感染检出率为18.5%,以"PCV-2+PRRSV""PCV-2+PCV-3"为主,多重感染检出率为1.9%。结果表明,内江市病死猪群中PRRSV、PCV-2感染较为严重,PCV-3零星分布,且呈现一定的混合感染状态,而CSFV和PRV感染得到有效控制。结果提示,内江市应重点加强PRRSV、PCV-2、PCV-3感染的监测与控制。     

鸭细小病毒地高辛标记探针的制备与应用

根据GenBank发表的1株鸭细小病毒全基因组序列设计1对特异性引物,利用PCR扩增得到大小为301bp的片段,回收纯化后用地高辛进行标记,制备鸭细小病毒地高辛标记探针。特异性试验表明,该探针仅与鸭细小病毒发生特异性杂交反应,与GPV、MDPV、DcuV、DEV、DHAV-I、H9N2亚型AIV、N-DRV、NDV、TMUV杂交反应均为阴性。敏感性试验表明,该探针对鸭细小病毒核酸的最低检测量为25pg。应用制备的探针对山东、江苏和安徽等地采集的61份患病鸭和30份健康鸭组织进行检测,阳性率分别为97%和0%,与病毒分离结果符合率为98%。上述结果显示,本研究制备的探针特异性强、敏感性高,为该病的诊断和流行病学调查提供可靠的方法。     

PCR制备地高辛标记的探针检测禽流感病毒核酸

用聚合酶链反应（PCR）技术,制备了广东禽流感无致病力分离株A/goose/China/24/96(H7N3）核蛋白基因片段（NPc）的地高辛标记的cDNA探针。建立并优化了检测禽流感病毒核酸的探针杂交法,探针杂交法能鉴别出非免疫鸡胚和SPF鸡胚尿囊液中的病毒,攻毒后第3天的SPF和非免疫鸡泄殖腔拭子中AIV的最大检出率为1/10,对临床样品中的AIV的最大检出率为1/7,而直接HA和HI法及AGP试验检不出临床样品的AIV。该探针具有较好的特异性和敏感性,为从分子水平探讨AIV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。     

鹅细小病毒VP1-VP3非重叠序列地高辛探针的制备和应用

根据GPV H1株核苷酸序列，设计了扩增VP1-VP3基因非重叠序列的1对引物，对其结构蛋白VP1与VP3非重叠核苷酸序列进行PCR扩增，将PCR产物纯化、回收后制备出GPV VP1-VP3基因DIG标记核酸探针，其标记效率达到0．1pg／μl。特异性检测结果表明，该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交，而与对照的DPV、GPMV等病毒的核酸杂交反应均为阴性；敏感性检测结果表明该探针对GPV的最低检出量为0．032ng。上述试验结果表明该探针可以用于GPV感染临床病料的检测。     

华南地区猪圆环病毒1型与2型感染情况调查及相互关系

根据已发表的猪圆环病毒1型(PCV-1)与猪圆环病毒2型(PCV-2)的全基因组序列,设计4对特异性引物,用套式PCR方法对广东地区的规模养猪场或个体养殖户送检的144份猪血清进行了PCV-1与PCV-2病毒检测.结果显示PCV-1阳性血清21份,PCV-2阳性血清40份,PCV-1与PCV-2均为阳性的血清7份,PCV-1阳性率为14.6%,PCV-2阳性率为27.8%;PCV-1与PCV-2均为阳性的阳性率为4.9%,从数据上的比较可知PCV-2的感染率高于PCV-1的感染率.说明PCV-2感染比较普遍,患病猪群中也存在一定比例的PCV-1病毒感染.