快速检测尿液中盐酸克伦特罗残留技术评价

为明确盐酸克伦特罗残留快速检测技术的准确性和可靠性,采用色谱定量验证方法,对目前常用的试剂盒和金标卡检测尿液中盐酸克伦特罗残留技术进行了评价。结果表明,试剂盒检测灵敏度较好,最低为0.29 μg·L-1,最高值1.04 μg·L-1,能达到仪器检测限要求,满足目前国家的判定限。但试剂盒的检测变异系数较大,结果的稳定性有待改进。试剂盒准确性较高,但含量在1 μg·L-1时,容易出现假阳性和假阴性问题,需要经质谱法作进一步确证,总体假阳性和假阴性问题不明显。金标卡检测限相对较高,在尿液中盐酸克伦特罗含量>3 μg·L-1时,准确度较好,但无法满足国家控制限要求,需要进一步改进技术,提高检测限。     

光学表面等离子共振测定盐酸克伦特罗的试验研究

为了实现高灵敏度定量检测盐酸克伦特罗,提出了一种新颖的、无标记、快速的内嵌TSPR1K23生物传感器的光学表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)盐酸克伦特罗测定方法,并通过试验验证了光学表面等离子共振生物测定装置的性能.光学表面等离子共振盐酸克伦特罗测定装置由集成光学SPR生物传感器、微流通池、便捷更换芯片的夹具、触电屏,USB接口板及光电转换电路板组成.在光学SPR芯片金膜表面固定盐酸克伦特罗抗原,在标准样品中(盐酸克伦特罗抗体质量浓度33.75 mg·L-1)分别添加0,10,20,40 mg·L-1的盐酸克伦特罗抗原,采用竞争免疫反应方法建立的盐酸克伦特罗测定标准曲线,相关系数0.997,相对标准偏差6.5%.     

盐酸克伦特罗喷射式流动注射电化学发光检测方法的研究

基于盐酸克伦特罗对于Ru(bpy)32+电化学发光的增敏作用,利用流动注射电化学发光法对盐酸克伦特罗进行检测,研究并考察流速、扫描速率、缓冲液pH值、Ru(bpy)32+浓度对电化学发光的影响;在优化的条件下建立电化学发光强度增加值与盐酸克伦特罗浓度的关系。结果表明:当流速为30μL·s~(-1)、缓冲液pH值为9.0时,Ru(bpy)32+浓度为1.0×10~(-4) mol·L~(-1)是检测盐酸克伦特罗的最佳条件。当盐酸克伦特罗浓度在1×10~(-10)~1×10~(-6) g·mL~(-1)的范围内,电化学发光强度与其浓度的负对数呈良好的线性关系,最低检出限为1×10-10 g·mL~(-1)。     

猪尿和猪肝中克伦特罗ELISA方法的建立及初步应用

以自制的单克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA条件,建立标准曲线y=- 24.778.306x+53.744,r2=0.993 4,线性范围为0.1 ～27 μg/L,IC50为1.8 μg/L(n=25),最低检测限(LOD)为0.1μg/L.尿液经叔丁基甲醚提取,回收率为68.24％～100.73％;肝脏用盐酸水解,加KH2PO4缓冲液(pH值3.0)提取,过C18柱净化,回收率为80.45％～98.45％;变异系数均小于20％,尿液和肝脏中的LOD为0.3μg/L、0.3 μg/kg.用该方法检测喂药动物尿液和肝脏中的克伦特罗残留,特异性良好,适用于猪尿和肝脏中克伦特罗残留筛选.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肝中3种β-受体激动剂残留

建立猪肝中3种β-受体激动剂克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。3种β-受体激动剂在0.1～10.0 μg·L~(-1)呈现良好线性关系,相关系数大于0.998,检出限为0.002 8～0.011 0 μg·kg~(-1),定量限为0.009 3～0.038 0 μg·kg~(-1),加标回收率在86.9%～116.8%,相对标准偏差在0.67%～3.41%,分析在7 min内完成。建立的方法操作简单,灵敏度高,重复性好,可用于肉类样品中β-受体激动剂残留的测定。     

两种不同剂型毒死蜱对四种环境生物的毒性评价

按照化学农药环境安全评价试验准则方法,测定了40%毒死蜱乳油和30%毒死蜱微囊悬浮剂埘鱼类、鸟类、家蚕和蜜蜂4种环境生物的毒性.结果表明,毒死蜱乳油对斑马鱼LC50值(96 h)为0.68mg·L-1,毒死蜱微囊悬浮剂的LC50为47.30mg·L-1;毒死蜱乳油对鹌鹑的毒性LD50为7.45 mg·kg-1,毒死蜱微囊悬浮剂的LD50为56.97 mg·kg-1.食下毒叶法结果表明,毒死蜱乳油对2～4龄家蚕幼虫LC.值(48 h,25℃)分别为0.82、1.87 mg·L-1与4.35 mg·L-1,毒死蜱微囊悬浮剂为2.48、4.22 mg·L-1与8.35 mg·L-1;家蚕幼虫在药膜上爬行1、10、30 min与60 min后,毒死蜱乳油对3龄家蚕幼虫的LD50值(48 h,25 ℃)分别为3.18、0.68、0.41 μg·cm-2与0.38μg·cm-2,其微囊悬浮剂LD50值分别为6.92、1.58、1.18 μg·cm-2与0.48 μg·cm-2;毒死蜱乳油和微囊悬浮剂对蜜蜂48 h的LC50分别为0.53 mg·L-1和2.32 mg·L-1.上述结果表明,毒死蜱微囊悬浮剂对4种环境生物的安全性明显高于乳油.     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制

将氯霉素(CAP)化学修饰引入羧基活性基团,形成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS),用混合酸酐法制备免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用UV,SDS-PAGE进行鉴定;BSA-CAP-HS免疫BALB/C小鼠,细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CAPmAb,并鉴定其免疫学特性;应用CAP mAb研制CAP残留快速检测ciELISA试剂盒(CAP-Kit),并测定其性能.结果表明,BSA-CAP-HS偶联成功,分子结合比为1:15.6;筛选出3株杂交瘤,其中最好的4F9株间接ELISA效价细胞上清为1:1.28×103,腹水为1:6.4×105,亲和常数(Ka)为1.84×1010L·mol-1,半教抑制浓度(IC50)为2.4 μg·L-1,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR)为150%,与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应;CAP-Kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为0.1～128 μg·L-1,灵敏度为0.053 μg·L-1,检测限为0.1 μg·L-1,奶样、肉样的平均添加回收率为88.5%,82.7%,平均批内和批间变异系数<15%.CAP-Kit在4 ℃可保存180 d.     

QuEChERS法测定葡萄酒中乙烯菌核利方法研究

建立了QuEChERS测定葡萄酒中乙烯菌核利的方法.样品经乙腈提取,丙基乙二胺(Primary Secondary Amine,PSA)净化,冷冻离心分离,氮气吹干,最后采用气相色谱-串联质谱检测.结果表明:乙烯菌核利浓度在25～250 μg·L-1时与峰面积有良好的线性关系(R2 ＞0.9900),定量限(10 S/N)为1.3 μg·L-1;当添加量在25、50、250 μg· L-1时乙烯菌核利的平均回收率为87％～ 102％,相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为3.1％～7.3％.因此,该方法定性定量结果准确,适合葡萄酒中乙烯菌核利残留的快速检测.     

猪肉中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量检测气质联用法探讨

根据贵阳市农产品质量安全监督检验测试中心试验室检测技术水平,对气相色谱-质谱测定猪肉中盐酸克伦特罗、盐酸莱克多巴胺残留量的方法进行了探讨。试样用甲醇提取和离子交换固相萃取柱净化,氮气吹干,用衍生化试剂99%双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)+1%三甲基氯硅烷(TMCS)进行衍生,用正己烷定容,于气相色谱-质谱仪上进行测定。结果表明:盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺在5～500 ng/ml范围内均有很好的线性关系。试样中盐酸克伦特罗的平均回收率为95.40%～99.94%,相对标准偏差(RSD)≤3.55%;盐酸莱克多巴胺的平均回收率为96.60%～99.96%,相对标准偏差(RSD)≤3.35%。该方法检测限为盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺均为0.5μg/kg。     

克伦特罗的CLIA分析试剂盒的研制

通过制备克伦特罗（Clenbuterol,CL）人工抗原获得高活性抗体,用辣根过氧化物酶（HRP）标记CL抗原,以鲁米诺（luminol）为发光底物,建立直接竞争法检测分析盐酸克伦特罗,并对包被液、包被条件、封闭蛋白、孵育时间、酶用量等参数进行优化,成功研制出化学发光法检测CL试剂盒。该方法的线性检测范围0.1~8.1 ng·mL-1,线性相关系数r=0.996,IC50值为0.607 ng·mL-1;理论检测限小于0.1 ng·mL-1;批内变异系数6.76%~8.31%;批间变异系数7.4%;回收率（90±15）%,与莱克多巴胺等其他β-激动剂不发生交叉反应。